WWW.KNIGA.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Книги, пособия, учебники, издания, публикации

 

Pages:   || 2 |

«(51) Int. Cl. A61K 31/395 (2006.01) (45) Дата публикации и выдачи патента A61K 31/438 (2006.01) 2012.04.30 A61K 47/40 (2006.01) (21) A61K 9/19 (2006.01) Номер заявки ...»

-- [ Страница 1 ] --

016410 B1

Евразийское

(19) (11) (13)

патентное

ведомство

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОМУ ПАТЕНТУ

(12)

(51) Int. Cl. A61K 31/395 (2006.01) (45) Дата публикации и выдачи патента A61K 31/438 (2006.01) 2012.04.30 A61K 47/40 (2006.01) (21) A61K 9/19 (2006.01) Номер заявки A61K 9/14 (2006.01) B82B 3/00 (2006.01) (22) Дата подачи заявки A61P 31/04 (2006.01) 2010.11.13 A61P 1/04 (2006.01)

ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ НА ОСНОВЕ НАНОЧАСТИЦ

(54)

ЦИКЛОДЕКСТРИНА, СОДЕРЖАЩИХ РИФАБУТИН, СПОСОБ ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯ,

СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ МИКОБАКТЕРИОЗА И ГЕЛИКОБАКТЕРНОЙ ИНФЕКЦИИ

(ВАРИАНТЫ) (56) RU-C2- (43) 2012.03. ЕA-B1- (96) 2010000142 (RU) 2010.11. WO-A2-2008/ (71)(73) Заявитель и патентовладелец:

ООО "НПК НАНОСИСТЕМА" (RU) (72) Изобретатель:

Гельперина Светлана Эммануиловна, Максименко Ольга Олеговна, Ванчугова Людмила Витальевна, Шипуло Елена Владимировна, Бабий Владимир Евстахиевич, Игнатьев B Алексей Владимирович (RU) (74) Представитель:

Ясинский С.Я. (RU) Изобретение относится к медицине и фармации, а именно к фармацевтической композиции (57) для лечения микобактериозов и геликобактерной инфекции на основе диспергированных в фармацевтически приемлемом носителе наночастиц циклодекстрина от 100 до 1000 нм, свободных от полимера и содержащих терапевтически эффективное количество диспергированного в них рифабутина, а также фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества. Изобретение раскрывает также способ получения упомянутой фармацевтической композиции, а также способы лечения микобактериозов и геликобактерной инфекции, включающих внутривенное и/или B внутримышечное, и/или пероральное введение нуждающемуся в этом пациенту упомянутой фармацевтической композиции в терапевтически эффективном количестве. Композиция в соответствии с изобретением может быть выполнена как в виде лиофилизата, пригодного (после диспергирования в фармацевтически приемлемом носителе) для внутривенного или внутримышечного введения пациенту, так и в виде порошка, пригодного для изготовления твердых пероральных лекарственных форм, и обеспечивает эффективность не менее (а в ряде случаев - и более) высокую, чем вводимая перорально субстанция рифабутина.

Область техники Настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции для лечения микобактериозов и геликобактерной инфекции на основе диспергированных в фармацевтически приемлемом носителе наночастиц циклодекстрина, содержащих терапевтически эффективное количество диспергированного в них рифабутина, а также к способу получения такой композиции и к способам лечения микобактериозов и геликобактерной инфекции, включающим внутривенное, и/или внутримышечное, и/или пероральное введение терапевтически эффективного количества такой композиции нуждающемуся в этом пациенту.

Уровень техники и задачи изобретения В последние десятилетия проблема повышения эффективности лечения туберкулеза и других микобактериозов приобрела особую актуальность в связи с повышением уровня заболеваемости в России и во всем мире. В связи с распространением ВИЧ-инфекции выделилась группа больных с повышенным риском развития как туберкулеза, так и нетуберкулезных микобактериозов, характеризующихся тяжелым диссеминированным течением заболевания. Фатальный иммунодефицит у ВИЧ-инфицированных больных, а также вторичный иммунодефицит у больных туберкулезом на фоне полирезистентности возбудителя вызывают серьезные трудности в лечении туберкулеза.

Наиболее перспективным путем повышения эффективности лечения туберкулеза и других микобактериозов (например, проказы, которая также представляет собой очень актуальную проблему для развивающихся стран) оказалось создание принципиально новых противотуберкулезных препаратов путем скрининга новых природных молекул или химической модификации известных структур. Однако его действенность ограничена во времени вследствие непрерывности процесса возникновения и распространения резистентности к новым препаратам. Тем не менее, создание в конце 80-х годов нового полусинтетического антибиотика широкого спектра действия группы рифамицинов-рифабутина стало важным достижением фармацевтической химии [1] (см. "Список источников" в конце настоящего описания).

По химической структуре рифабутин представляет собой 4-дезоксо-3,4-[2-спиро[N-изобутил-4пипераидил] 2,5-дигидро-1H-имидазол]. По спектру и механизму действия рифабутин схож с рифампицином, однако существенно превосходит его по фармакодинамическим и фармакокинетическим свойствами [1].

Так, лучшая, чем у рифампицина, растворимость рифабутина в липидах обусловливает лучшее его проникновение в ткани, больший объем распределения, меньшую разницу между максимальной (Cmax) и минимальной (Cmin) концентрациями в сыворотке крови, пролонгированное время полувыведения из организма [2].

В основе антибактериального действия рифабутина, как и других антибиотиков из группы рифамицинов (например, рифампицина), лежит подавление ДНК-зависимой РНК-полимеразы бактерий [1].

Также предполагается, что препарат оказывает прямое ингибирующее действие на синтез ДНК бактериальной клетки, обусловливающее его активность в отношении резистентных к рифампицину микобактерий [2]. Рифабутин обладает широким спектром антибактериального действия, активен в отношении широкого круга грамположительных и грамотрицательных бактерий.





Наиболее важным свойством рифабутина является его активность в отношении Mycobacterium tuberculosis и Mycobacterium avium-intracellulare complex. Значения минимальной подавляющей концентрации (МНК) рифабутина в отношении чувствительных к рифампицину штаммов Mycobacterium tuberculosis составляют 0,03-0,06 мкг/мл, то есть в пределах концентраций, которые поддерживаются в крови в течение 24 ч после однократного приема внутрь 300 мг препарата. Минимальная бактерицидная концентрация (МБК) в 2-4 раза превышает МПК для тех же штаммов микобактерий. Такой уровень концентраций антибиотика в крови обнаруживается в течение 6-12 ч после приема вышеуказанной дозы [1], [3], [4].

Важным свойством рифабутина, определяющим возможность его применения при туберкулезе, обусловленном резистентными к рифампицину микобактериями, является отсутствие полной перекрестной устойчивости возбудителей к этим антибиотикам. Показано, что более 35% резистентных к рифампицину микобактерий сохраняют чувствительность к рифабутину. Эффективность рифабутина подтверждена на модели экспериментального туберкулеза у мышей, вызванного резистентными к рифампицину штаммами, когда препарат, применяемый из расчета средних суточных доз для человека (300-400 мг), способствовал быстрой элиминации микобактерий [5].

Рифабутин превышает по активности рифампицин в отношении клинических штаммов атипичных микобактерий (Mycobacterium avium-intracellulare complex-MAC) [6]. Значения МПК90 (минимальной концентрации, подавляющей рост 90% микобактерий) рифабутина для большинства штаммов этих видов колеблется в пределах 1,0-2,0 мкг/мл. Чувствительность к рифабутину атипичных микобактерий (Mycobacterium kansasii, Mycobacterium fortuitum, Mycobacterium gordonae, Mycobacterium haemophilum) существенно ниже, чем у MAC (МПК90 в зависимости от вида 2,5-8 мкг/мл). Mycobacterium chelonae и Mycobacterium simiae умеренно чувствительны или устойчивы [7].

Большинство штаммов Mycobacterium leprae также проявляют высокую чувствительность к рифабутину. По степени активности in vitro и при экспериментальной лепре белых мышей рифабутин, как было установлено, существенно превосходит рифампицин. Наблюдаемое синергическое действие в отношении микобактерий лепры при сочетанном применении рифабутина с фторхинолонами (спарфлоксацин, ломефлоксацин, норфлоксацин, офлоксацин, перфлоксацин, ципрофлоксацин, левофлоксацин или моксифлоксацин) является более выраженным, чем при комбинированном применении рифампицина с этой группой препаратов [8].

Одним из наиболее важных показаний к применению рифабутина на сегодняшний день является туберкулез у ВИЧ-инфицированных пациентов и у больных СПИДом (ВИЧ/СПИД-ассоциированный туберкулез) [9].

В отношении других микробных видов активность рифабутина изучена значительно меньше, чем для микобактерий, однако известно, что по действию на многие условно-патогенные виды грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов рифабутин аналогичен рифампицину. Рифабутин активен в отношении Staphylococcus aureus, коагулазонегативных Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus saprophyticus, Staphylococcus haemolyticus, Streptococcus pyogenes и Streptococcus viridans (МПК 0,005мкг/мл) [10]. К рифабутину чувствительны Streptococcus pneumoniae и анаэробные кокки; штаммы Enterococcus faecalis проявляют к рифабутину лишь умеренную чувствительность (МПК 25 мкг/мл) [11].

Рифабутин активен в отношении метициллинорезистентных штаммов золотистых (MRSA) и коагулазонегативных (MRCNS) стафилококков, однако, как и в случае с рифампицином, устойчивость стафилококков к рифабутину in vitro и in vivo развивается очень быстро, практически после однократного контакта с препаратом. Предотвратить ее развитие можно при сочетанном применении рифабутина с фузидином, фторхиполонами или эритромицином. Такие комбинации могут эффективно использоваться при лечении тяжелых инфекций, вызываемых метициллинорезистентными штаммами золотистых (MRSA) и коагулазонегативных (MRCNS) стафилококков [12].

Для рифабутина характерно быстрое развитие устойчивости у пневмококков, особенно в случаях частого его применения при лечении туберкулеза, МАС-микобактериозов (Mycobacterium aviumintracellulare complex). Среди грамположительных бактерий к рифабутину высокочувствительны Clostridium spp., в том числе Closlridium difficile. Рифабутин проявляет высокую активность в отношении нейссерий (Neisseria meningilidis, Neisseria gonorrhoeae), хотя клинические данные о возможности его применения при данных инфекциях практически отсутствуют [11].

Большой интерес представляют данные о высокой чувствительности к рифабутину Helicobacter pylori [13], [14], [15]; значения МПК90 рифабутина для данного микроорганизма составляет 0,007 мкг/мл.

По степени активности в отношении Helicobacter pylori рифабутин существенно превосходит рифампицин [13]. Такое свойство рифабутина, как стабильность при широких колебаниях значений рН, дает основание рассматривать его как активный компонент в составе комплексной терапии язвенной болезни.

Имеются данные о высокой активности рифабутина (МПК - 0,008 мкг/мл), превосходящей действие рифампицина, в отношении Chlamydia trachomatis. Более того, для рифабутина характерно медленное формирование устойчивости хламидий, тогда как к рифампицину in vitro устойчивость формируется в присутствии субингибирующих концентраций в течение нескольких пассажей [16].

В эксперименте in vivo достоверно установлено, что рифабутин является высокоэффективным препаратом при лечении токсокоплазмоза [17]. Эта особенность антибиотика является важной, поскольку антибиотикотерапия токсокоплазмоза вызывает серьезные трудности. Доза рифабутина 100-200 мг в течение 10 дней защищает 100% мышей при экспериментальном токсоплазмозе. Эта доза существенно превышает применяемую при лечении туберкулеза или МАС-инфекции (Mycobacterium aviumintracellulare complex), однако она может быть снижена при его применении в комбинации с сульфадиазином, пириметамином или клиндамицином (там же). В работе [17] показано также, что рифабутин (в дозе 50 мг/кг) в комбинации с субтерапевтическими дозами пириметамина или клиндамицина предупреждал гибель 40 и 90% животных соответственно.

Рифабутин активен также в отношении многих грамотрицательных бактерий, в частности, в отношении Pseudmonas aeruginosa (синегнойная палочка), причем его активность в отношении данного возбудителя, как было показано, повышается при совместном применении с полимиксином В [18].

На микробную клетку рифабутин действует бактерицидно. Для Mycobaclerium avium и Mycobacterium intracellulare, активно пролиферирующих внутри клетки, бактерицидный эффект препарата в большей степени коррелирует с клинической эффективностью, чем значения МПК. При изучении динамики гибели Mycobacterium avium значения МБК (минимальной бактерицидной концентрации, вызывающей гибель 99% бактериальных клеток) для рифабутина составляли 8 мкг/мл, тогда как МПК (минимальная подавляющая концентрация) составляла менее 0,03 мкг/мл [6]. В большей степени активность рифабутина характеризует значение соотношения МБК/МПК, которое для Mycobacterium avium колеблется от 8 до 128. При определении МБК рифабутина in vitro в динамической системе, моделирующей концентрации антибиотика в крови при приеме внутрь, путем подсчета числа КОЕ (колониеобразующих единиц) после экспозиции штамма Mycobacterium intracellulare с 5 мкг/мл антибиотика показано снижение числа жизнеспособных особей, начиная с 6 дня контакта при полной гибели культуры к 8 дню. Отношение МБК к МПК рифабутина в отношении референтного штамма Mycobacterium tuberculosis составило 4, при значении МБК 0,125 мкг/мл [19].

Относительная активность in vitro рифабутина по сравнению с рифампицином колеблется в пределах от 2 до 20%. Уровни антибиотика в плазме для рифабутина, превосходящие МПК для чувствительных к рифампицину штаммов Mycobacterium tuberculosis, поддерживаются в течение 24 ч после приема внутрь 300 мг; концентрации, соответствующие МБК, обнаруживаются в течение 6-12 ч после однократного приема рифампицина в той же дозе [20].

Значения МБК и МПК рифабутина и, следовательно, отношения МБК/МПК для других видов бактерий (Legionella spp., Chlamidya trachomatis, Slaphilococcus aureus) отличались не более чем в 2 раза [1].

Рифабутин характеризуется продолжительным постантибиотическим эффектом, проявляющимся в подавлении микробного роста после короткого срока экспозиции культуры с антибиотиком и последующего его удаления из питательной среды. Продолжительность постантибиотического эффекта зависела от вида микроорганизма, концентрации препарата, продолжительности экспозиции. При экспозиции культуры MAC с рифабутином в течение 1-2 ч при концентрациях препарата, в 2-4 превышающих МБК, продолжительность постантибиотического эффекта колебалась от 21,5 до 47,5 ч [6].

Возможность усиления антимикробной активности рифабутина при его сочетании с другими антибактериальными препаратами наиболее детально изучена в отношении Mycobacterium aviumintracellulare complex (MAC), что обусловлено трудностями лечения заболеваний, вызываемых этими возбудителями. In vivo рифабутин, применяемый в монотерапии при генерализованной МАС-инфекции, характеризовался умеренной активностью, проявляющейся лишь в снижении обсемененности легких и селезенки мышей, не защищая их от гибели. При профилактическом назначении эффективность рифабутина была сравнима с действием кларитромицина или азитромицина [1].

Активность рифабутина в комбинациях с другими противотуберкулезными препаратами изучали в различных системах, используя при обработке результатов в ряде случаев определение индекса фракционной ингибирующей концентрации (ФИК) (сумма МПК препаратов в комбинации по отношению к МПК каждого препарата в отдельности), а также индекса фракционной бактерицидной концентрации (ФБК) (сумма МБК каждого препарата в комбинации, деленная на МБК каждого препарата в отдельности). Установлено синергическое действие рифабутина с этамбутолом для 43-100% штаммов MAC (ФИК- или ФБК-индекс 0,5) [21].

При комбинации рифабутина с кларитромицином наблюдали значительное повышение чувствительности штаммов MAC, выделенных у больных с ВИЧ-инфекцией [22].

Наиболее активным против Mycobacterium avium-inlracellulare complex в системе мышиных макрофагов были сочетания рифабутина с этамбутолом и ципрофлок-сацином/амикацином (91 и 100% гибель клеток соответственно). Синергидной в отношении MAC штаммов оказалась также комбинация рифабутина с тиасетазоном [23].

Аддитивный или синергический эффекты при совместном применении рифабутина и этамбутола были обнаружены в отношении Mycobacterium kansasii [24].

Комбинации рифабутина и этамбутола с клофазимином или цефазолином, а также рифабутина с цефазолином и стрептомицином проявляли синергизм против штаммов Mycobacterium paratuberculosis [25].

Рифабутин относится к числу немногих антибактериальных препаратов, высокоэффективных в лечении инфекций, вызываемых внутриклеточно локализованными возбудителями, в частности в лечении микобактериозов. В основе такой высокой активности рифабутина лежит его быстрое проникновение в клетку, в частности в макрофаг, происходящее без нарушения фагоцитарной функции. Соотношение между внутри- и внеклеточными концентрациями рифабутина в макрофагах мышей составляют от 9:1 до 15:1 по сравнению с аналогичным показателем 5:1 для рифампицина [26].

В зависимости от используемых концентраций рифабутин, как было показано в литературе, проявлял ингибирующую или бактерицидную активность против размножающихся в культуре мышиных макрофагов Mycobacterium avium-inlraccllulare complex и Mycobacterium xenopi [27], [28].

При экспозиции в течение 2-5 дней атипичных микобактерий, выделенных у больных СПИДом, с терапевтическими концентрациями рифабутина, достигаемыми в плазме крови после его приема в виде пероральной лекарственной формы, наблюдался бактериостатический эффект с выраженным снижением числа КОЕ (колониеобразующих единиц) [29].

При развившейся инфекции Mycobacterium avium-intracellulare complex у мышей действие рифабутина проявляется в выраженном снижении числа жизнеспособных микобактерий в легких и селезенке;

по данному показателю действие рифабутина превосходит аналогичное действие рифампицина, рифапентина или азитромицина [1].

При профилактике микобактериозов у инфицированных мышей, предварительно вакцинированных вакциной Кальметта-Герена, защитное (профилактическое) действие рифабутина проявлялось при введении данного антибиотика в дозе 10 мг/день в течение 1 недели, в то время как рифампицин оказывал аналогичное защитное действие лишь после 12 недель его применения в той же дозе [22].

В отношении штаммов Helicobacter pylori, устойчивых к кларитромицину и тинидазолу, наиболее эффективной оказалась трехкомпонентная терапия, включающая прием ингибитора протонной помпы (пантопразола), амоксициллина и рифабутина [14].

Несмотря на столь широкий спектр антибактериальной активности, клиническое применение рифабутина ограничивается тем, что рифабутин, как это уже было отмечено выше, малорастворим в воде, изза чего препаратов рифабутина, пригодных для парентерального (внутривенного и/или внутримышечного) введения нуждающемуся в этом пациенту, на сегодняшний день не существует.

В то же время, традиционно выпускаемые коммерчески доступные пероральные лекарственные формы рифабутина (как правило, на сегодняшний день рифабутин выпускается в форме желатиновых капсул) характеризуются низкой биодоступностью, в связи с чем дозы данного антибиотика, необходимые для эффективной антибактериальной терапии, оказываются достаточно высокими, что обусловливает не только существенные побочные эффекты в отношении органов пищеварительной системы (диарея, изжога, несварение желудка, потеря аппетита и тошнота), но и такие побочные эффекты, как лихорадка, появление кожного зуда и кожных высыпаний, тромбоцитопения (по данным FDA); показано, что терапия с использованием традиционных пероральных форм рифабутина может также сопровождаться появлением "гриппоподобных" симптомов [30] (ранее похожие симптомы описывались в литературе также и у пациентов, получавших антибиотик рифампицин).

В связи с этим актуальной является задача разработки растворимой лекарственной формы рифабутина, пригодной для внутривенного введения нуждающемуся в этом пациенту (при ее растворении в соответствующем фармацевтически приемлемом носителе), при этом малотоксичной и обладающей эффективностью не меньшей, чем традиционные пероральные формы данного антибиотика.

Одним из широко применяемых в технологии фармацевтических композиций и лекарственных форм способов повышения растворимости труднорастворимых лекарственных веществ является использование циклодекстринов, образующих с указанными труднорастворимыми веществами субстанциями комплексы включения.

Циклодекстрины представляют собой класс циклических олигосахаридов, получаемых ферментативным расщеплением крахмалов и состоящих из 6 (-циклодекстрины, -CD), 7 (-циклодекстрины, CD) или 8 (-циклодекстрины, -CD) остатков -D(+)-глюкопиранозы (декстрозы), соединенных в макроциклы -D-1,4-гликозидными связями таким образом, что молекула циклодекстрина имеет форму усеченного конуса с гидрофобной внутренней полостью. При обработке крахмала микробным ферментом циклодекстринглюканотрансферазой могут быть также получены так называемые крупнокольцевые (large-ring) циклодекстрины, содержащие девять, десять, одиннадцать и более (до 30-60) остатков глюкозы в цикле - так называемые -циклодекстрины, -циклодекстрины, -циклодекстрины и т.д.). Структурные формулы трех основных типов циклодекстринов (-CD, -CD, -CD) представлены на фиг. 1.

Коническая форма молекулы циклодекстрина стабилизирована водородными связями между ОНгруппами, а также -D-1,4-гликозидными связями. Все ОН-группы в циклодекстринах находятся на внешней поверхности молекулы. Поэтому внутренняя полость циклодекстринов является гидрофобной и способна образовывать в водных растворах комплексы включения с различными молекулами органической и неорганической природы. В комплексах включения кольцо циклодекстрина является молекулойхозяином", включённое вещество называют "гостем".

Комплексы включения в водных растворах диссоциируют на циклодекстрин и исходное вещество, проявляя основные свойства последнего. При нагревании выше 50-60°С комплексы обычно распадаются полностью и обычно восстанавливают свою структуру при охлаждении.

Образование циклодекстринами комплексов включения с различными лекарственными веществами позволяет придавать лекарственным веществам новые полезные свойства, например повышать их растворимость, физическую и химическую стабильность и прочее. Полезные для создания растворимых лекарственных форм труднорастворимых лекарственных веществ свойства циклодекстринов более подробно раскрыты в источниках [31]-[48].

В частности, показано, что образование комплексов включения "лекарственное средствоциклодекстрин" способно повышать физико-химическую стабильность лекарственного средства в растворе, а также защищать ряд лекарственных веществ от биодеградации.

Циклодекстрины также используют в фармацевтической промышленности для маскирования горького/неприятного вкуса лекарственного вещества, уменьшения летучести лекарственного вещества, получения лекарственных препаратов для перорального или парентерального применения с контролируемым высвобождением и т.д.

В международной публикации РСТ [49], а также в работе [50] описаны комплексы включения антибиотика рифампицина с -циклодекстрином, полученные методом распылительного высушивания и предназначенные для внутрилегочного введения при лечении туберкулеза; в публикации [49] показано также, что комплексы включения рифампицина с -циклодекстрином характеризовались более высокой скоростью растворения в среде с рН 7,4 (соответствует физиологическому значению рН) и с рН 5,2 (соответствует значению рН в альвеолярных макрофагах), в сравнении со "свободным" рифампицином, не входящим в комплексы включения. Также в рамках публикации [49] было показано в исследовании in vivo (на крысах), что рифампицин в составе комплексов включения (с -циклодекстрином и сукралозой) обладал более высокой чрескожной проницаемостью, в сравнении со "свободным" рифампицином.

Известно, однако, что рифампицин хорошо растворим в водной среде (растворимость рифампицина -4при 25°С составляет 1400 мг/л), в то время как растворимость рифабутина в воде гораздо ниже. Применение циклодекстринов и/или их производных для повышения растворимости рифабутина с целью создания коллоидных форм данного антибиотика, пригодных для внутривенного введения пациенту, ранее не изучалось.

Следует также отметить, что среди различных видов циклодекстринов именно -циклодекстрины, использованные в работе [49], обладают наиболее высокой токсичностью. Так, в исследованиях in vitro [51] именно для -циклодекстринов была показана наиболее высокая гемолитическая активность. В работе [39] также было показано гемолитическое действие циклодекстринов, наиболее выраженное согласно данной работе для -циклодекстрина и его производных - диметил--циклодекстрина и триметил-циклодекстрина, в значительно меньшей степени для гидроксипропил--циклодекстрина, циклодекстрина, -циклодекстрина, дигидроксипропил--циклодекстрина.

Как считается, гемолитическая активность циклодекстринов связана в основном с их способностью солюбилизировать липиды клеточных мембран. Косвенно это предположение подтверждается существованием положительной корреляции между гемолитической активностью отдельных циклодекстринов и их способностью солюбилизировать холестерин, являющийся одним из основных компонентов биологических мембран [39], [41].

Кроме того, в отношении -циклодекстрина и его производного метил--циклодекстрина было показано в литературе, что они способны индуцировать каспаззависимый апоптоз кератиноцитов человека путем солюбилизации холестерина клеточной мембраны; для -циклодекстрина, -циклодекстрина и 2гидроксипропил--циклодекстрина подобный эффект не был показан [52].

Указанные выше недостатки характерны и для комплексов включения, образованных циклодекстринами с антибиотиком рифампицином, описанных в работе [53].

В последние годы наночастицы на основе биодеградируемых полимеров (полилактидов (PLA, PLGA), полиалкилцианоакрилатов (РАСА, РВСА, РНСА, PIHCA и др.)) стали рассматриваться как перспективные коллоидные носители лекарственных средств (в частности, труднорастворимых или практически нерастворимых в водной среде лекарственных средств).

Наночастицы, в общем случае, можно определить как тип коллоидных систем доставки лекарственных средств, представляющих собой твердые частицы размером менее 1 мкм, образованных природными или синтетическими полимерами.

В зависимости от технологии их синтеза среди наночастиц можно выделить наносферы, имеющие полимерную матрицу, в которой терапевтически активный и/или диагностический агент находится в диспергированном виде, и нанокапсулы, имеющие ядро, содержащее терапевтически активный и/или диагностический агент в жидкой фазе, и окружающую ее оболочку из биодеградируемого полимера. В отдельных случаях терапевтически активный и/или диагностический агент также может быть адсорбирован на поверхности указанных наночастиц, которая может быть дополнительно модифицирована (такая модификация в ряде случаев позволяет изменять не только физико-химические свойства наночастиц, но и их биораспределение в организме).

В литературе показано, что наночастицы обеспечивают высокоэффективный транспорт адсобированных лекарственных веществ в макрофаги. Попадая в кровеносную систему, наночастицы доставляются вместе с током крови к "целевым" органам (которыми в случае туберкулеза являются, в первую очередь, легкие, селезенка, печень) и фагоцитируются резидентными макрофагами и циркулирующими моноцитами. Во внутриклеточной среде наночастицы подвергаются биодеградации под действием ферментов и выделяют заключенное в них лекарственное вещество, что позволяет достичь высоких внутриклеточных концентраций и, таким образом, обеспечить повышение терапевтической эффективности. Наночастицы, как было показано, способны накапливаться в организме в очагах патологии, для которых характерны повышенная проницаемость капилляров и нарушения лимфотока. Эти свойства наночастиц, наиболее полно выраженные при внутривенном введении, легли в основу представления о возможном повышении эффективности антибактериальных лекарственных средств при помощи наночастиц. В частности, было показано, что наночастицы существенно повышают эффективность антибиотиков при лечении экспериментальных бактериальных инфекций, характеризующихся внутриклеточной локализацией возбудителя, включая туберкулез [54], а также сальмонеллез или листериоз [55].

В патенте РФ [56], полученном ранее научным коллективом ООО "Научно-Производственный Комплекс "Наносистема", раскрыто лекарственное средство для лечения бактериальных (внутриклеточных) инфекций, которое содержит рифабутин, сорбированный в матрице полимерных наночастиц, холестерилфосфат калия, или гликохолат натрия, или гексадецила дигидрофосфат, или -токоферилсукцинат, а также водорастворимый полимерный стабилизатор (имеющий молекулярную массу не более 70 кДа и выбранный из группы, включающей поливиниловый спирт, поливинилпирролидон, полисорбат и сывороточный альбумин) и наполнители. Полимеры, использованные для получения наночастиц размером 100-800 нм, включают полимер/полимеры молочной кислоты и/или сополимер/сополимеры молочной и гликолевой кислот при содержании гликолевой кислоты в указанных сополимерах до 50 мол.%; при этом молекулярная масса указанных полимеров и сополимеров составляет от 5 до 300 кДа. Указанное средство, раскрытое в патенте [56], обеспечивает пролонгированное действие рифабутина, повышение его биодоступности и соответственно эффективности лечения бактериальных инфекций.

В евразийском патенте [57], также полученном ранее научным коллективом ООО "НаучноПроизводственный Комплекс "Наносистема", раскрыта фармацевтическая композиция для лечения туберкулеза и заболеваний, опосредованных Helicobacter pilory, на основе полимерных частиц размером 100-800 нм, содержащих антибиотик рифабутин в терапевтически эффективном количестве и вспомогательные вещества, пригодная для внутривенного введения нуждающемуся в этом пациенту, отличающаяся тем, что в качестве вспомогательных веществ содержит полимер/полимеры молочной кислоты и/или сополимер/сополимеры молочной и гликолевой кислот при содержании гликолевой кислоты в сополимерах до 50 мол.% с дополнительной карбоксильной группой или без дополнительной карбоксильной группы на конце молекулы или сополимеры полимеров молочной кислоты или сополимеров молочной или гликолевой кислот с полиэтиленгликолем; при этом молекулярная масса полимеров и сополимеров составляет от 2 до 200 кДа, причем композиция представляет собой лиофилизат, который при добавлении воды или физиологического раствора образует устойчивую суспензию с размером частиц 0,1-0, мкм.

Указанная композиция дополнительно содержит водорастворимый природный или синтетический полимерный стабилизатор с молекулярной массой не более 70 кДа и, в случае необходимости, пластификатор липидной природы и наполнители при определенном количественном соотношении компонентов.

Однако дальнейшие исследования наносомальной лекарственной формы рифабутина на основе полилактидов показали, что указанная данная лекарственная форма обладает высокой степенью токсичности, причем данная токсичность обусловлена не самим рифабутином, а именно высокой концентрацией входящего в состав наночастиц биодеградируемого полимера (PLGA или PLA), что ограничивает возможность дальнейшей разработки и клинического применения таких наночастиц.

В евразийском патенте [58], также принадлежащем ООО "Научно-Производственный Комплекс "Наносистема", раскрыта фармацевтическая композиция для лечения туберкулеза и заболеваний, опосредованных Helicobacter pylori, отличающаяся тем, что представляет собой лиофилизат рифабутина, солюбилизированного человеческим сывороточным альбумином, характеризующийся средним размером частиц от 4 до 10 нм, а при добавлении фармацевтически приемлемого разбавителя или носителя - пригодный для внутривенного введения нуждающемуся в этом пациенту устойчивый раствор, характеризующийся средним размером частиц от 4 до 10 нм, а также способ получения такой фармацевтической композиции (лиофилизата рифабутина, солюбилизированного человеческим сывороточным альбумином), отличающийся тем, что водную смесь рифабутина, альбумина и органического растворителя при температуре от 0 до +40°С диспергируют, подвергают гомогенизации высоким давлением с получением наноэмульсии, удаляют из полученной наноэмульсии органический растворитель, фильтруют, добавляют криопротектор, замораживают и лиофилизируют, причем указанную водную смесь рифабутина и альбумина получают путем растворения 2-5% (м/о) альбумина в деминерализованной воде, последующего добавления к указанному раствору альбумина 2-5% (о/о) органического растворителя и рифабутина в количестве от 0,2 до 20,0 мас.%, и способ лечения туберкулеза и заболеваний, опосредованных Helicobacter pylori, включающий внутривенное введение терапевтически эффективного количества такой фармацевтической композиции нуждающемуся в этом пациенту.

Хотя композиция в соответствии с [58] не содержит потенциально токсичных биоразлагаемых полимеров, тем не менее человеческий сывороточный альбумин, необходимый для получения такой композиции, будучи одним из компонентов плазмы крови человека, может быть инфицирован вирусными инфекциями, имеющими парентеральный путь передачи (ВИЧ, гепатиты В и С и др.); кроме того, в ряде случаев внутривенное введение пациенту препаратов на основе альбумина плазмы крови человека может вызывать такие побочные эффекты, как крапивница, озноб, повышение температуры, одышка, тахикардия, снижение артериального давления, боли в поясничной области.

Применение же для солюбилизации (т.е. повышения растворимости) рифабутина полностью синтетических соединений циклодекстринов позволяет избежать указанных выше недостатков, присущих растворимой форме рифабутина, раскрытой в патенте [58].

Также следует учесть, что в случае использования коммерчески доступных растворов альбумина для инфузий оказывается необходимым дополнительный этап очистки указанных растворов от содержащихся в них вспомогательных компонентов, что увеличивает трудоемкость и стоимость производства такой композиции.

В публикации РСТ [59], предлагаемой нами в качестве ближайшего аналога настоящего изобретения, описаны наночастицы на основе биодеградируемого полимера и циклодекстрина (или производного циклодекстрина), содержащие биологически активное вещество (в частности, гидрофобное биологически активное вещество). В качестве биодеградируемого полимера в соответствии с [59] используется сополимер метилвинилового эфира и малеинового ангидрида (PVM/MA), в качестве циклодекстрина или его производного используется -циклодекстрин, или 2-гидроксипропил--циклодекстрин, или 6монодезокси-6-моноамин--циклодекстрин.

-6Биологически активное вещество в соответствии с [59] может представлять собой небольшую биологически активную молекулу, а также белок, или пептид, или нуклеозид, или нуклеотид, или олигонуклеотид, или полинуклеотид, или нуклеиновую кислоту, или лекарственное средство, или аллерген, или антиген, или гидрофобное вещество, или представлять собой субстрат Р-гликопротеина. В частности, лекарственное средство согласно [59] может представлять собой актиномицин D, альбендазол, амитриптилин, ампренавир, аторвастатин, бунитролол, камптотецин, карведилол, целиролол, циклоспорин, клотримазол, колхицин, кортизон, даунорубицин, дебризоквин, дексаметазон, дигитоксин, дигоксин, дилтиазем, доцетаксел, домперидон, доксорубицин, эпирубицин, эритромицин, эстрадиол, этопозид, фенитоин, фексофенадин, FK-506, фторурацил, гентамицин, гризеофулвин, иматиниб, индинавир, итраконазол, левофлоксацин, лозартан, ловастатин, мебендазол, метилпреднизолон, метотрексат, мибефрадил, морфин, нелфинавир, ондасетрон, паклитаксел, празиквантел, преднизолон, преднизон, хинидин, рапамицин, рифампицин, саквинавир, сиролимус, сульфаметизол, ритонавир, такролимус, талинолол, тенипозид, терфенадин, топотекан, триамцинолон, верапамил, винбластин или винкристин.

Также [59] раскрывает фармацевтическую композицию, включающую указанные наночастицы, содержащие биодеградируемый полимер (такой как PVM/MA), циклодекстрин или его производное и биологически активное вещество (такое как актиномицин D, альбендазол, амитириптилин, ампренавир, аторвастатин, бунитролол, камптотецин, карведилол, целиролол, циклоспорин, клотримазол, колхицин, кортизон, даунорубицин, дебризоквин, дексаметазон, дигитоксин, дигоксин, дилтиазем, доцетаксел, домперидон, доксорубицин, эпирубицин, эритромицин, эстрадиол, этопозид, фенитоин, фексофенадин, FK-506, фторурацил, гентамицин, гризеофулвин, иматиниб, индинавир, итраконазол, левофлоксацин, лозартан, ловастатин, мебендазол, метилпреднизолон, метотрексат, мибефрадил, морфин, нелфинавир, ондасетрон, паклитаксел, празиквантел, преднизолон, преднизон, хинидин, рапамицин, рифампицин, саквинавир, сиролимус, сульфаметизол, ритонавир, такролимус, талинолол, тенипозид, терфенадин, топотекан, триамцинолон, верапамил, винбластин или винкристин), а также фармацевтически приемлемый эксципиент, носитель или адъювант, и способ получения указанных наночастиц, включающий совместное инкубирование в органическом растворителе биодеградируемого полимера (такого как PVM/MA) и комплекса включения (циклодекстрин или его производное: биологически активное вещество), с последующей десольватацией указанного биодеградируемого полимера в водно-спиртовом растворе, либо (в виде альтернативы) включающий инкубирование наночастиц указанного биодеградируемого полимера в водном растворе, содержащем комплекс включения (циклодекстрин или его производное: биологически активное вещество).

В качестве наиболее предпочтительных циклодекстринов согласно [59] рассматриваются циклодекстрин, или 2-гидроксипропил--циклодекстрин, или 6-монодезокси-6-моноамин-циклодекстрин, или -циклодекстрин, или 2-гидроксипропил--циклодекстрин, или их смеси.

Хотя использование сополимера метилвинилового эфира и малеинового ангидрида (PVM/MA) в составе наночастиц для доставки лекарственных средств описано не только в международной публикации РСТ [59], но и в более ранних публикациях данных авторов [60], однако хорошо известно, что, хотя сополимеры малеинового ангидрида и исследовались клинически (при этом было показано, в частности, что такие полимеры сами по себе также обладают терапевтической активностью, а именно противоопухолевой, противовоспалительной, иммунопотенцирующей и интерферониндуцирующей активностью [61]), однако их применение в медицинских целях, в том числе для изготовления фармацевтических композиций, оказалось невозможным ввиду их высокой токсичности [62], [63].

Так, при использовании сополимера метилвинилового эфира и малеинового ангидрида (PVM/MA) наблюдались токсические эффекты, типичные для многих синтетических анионных полимеров - пирогенность, тромбоцитопения, ингибирование микросомальных ферментов, сенсибилизация к эндотоксинам, токсическое повреждение печени, органомегалия, а также угнетение ретикулоэндотелиальной системы [64].

Более того, из литературы известно, что даже более безопасные и значительно лучше изученные в токсикологическом отношении, чем PVM/MA, полимеры (например, (со)полимеры молочной и гликолевой кислот PLGA и/или PLA) при их использовании в виде наночастиц могут проявлять токсичность.

Так, в токсикологическом исследовании [65] синтезированных ранее коллективом авторов ООО "Научно-Производственный Комплекс "Наносистема" наносомальных форм рифабутина, полученных на основе полилактидов (PLGA или PLA) и не содержащих циклодекстринов (лекарственные формы рифабутина, описанные в евразийских патентах [56]-[58]), было показано, с одной стороны, ослабление токсических свойств, присущих самой субстанции рифабутина, а с другой - появление новых видов токсичности, обусловленных именно тем, что малое количество рифабутина было инкорпорировано в наночастицы из медленно биоразлагаемого полимера PLGA или PLA.

Кроме того, гибридные наночастицы, описанные в международной публикации РСТ [58], состоят скорее из биодеградируемого полимера (PVM/MA), чем из циклодекстринов, и характеризуются низкой нагрузкой по лекарственному веществу (менее 20%); следует также отметить, что материалы [58] не содержат каких-либо указаний на возможность применения таких наночастиц для лечения внутриклеточных инфекций, в частности для лечения микобактериозов (включая туберкулез).

Все вышесказанное ограничивает возможность использования наночастиц, раскрытых в [58], для создания коллоидных (наносомальных) форм рифабутина, пригодных для внутривенного введения пациенту.

Учитывая сказанное выше, было бы предпочтительным создание такой лекарственной формы рифабутина, которая сочетала бы в себе преимущества комплексов включения с циклодекстринами с одной стороны, и коллоидных носителей, таких как наночастицы - с другой, не содержа при этом биодеградируемых полимеров, которые могут обусловливать дополнительные виды токсичности, была бы безопасной в токсикологическом отношении и имела бы эффективность не меньшую, чем известные на сегодняшний день лекарственные формы данного антибиотика.

В отношении рифабутина такие безопасные (в токсикологическом отношении) и высокоэффективные лекарственные формы рифабутина, в частности пригодные для внутривенного введения лекарственные формы, ранее не исследовались.

В рамках настоящего изобретения коллективом авторов ООО "Научно-Производственный Комплекс "Наносистема" была синтезирована фармацевтическая композиция для лечения микобактериозов и геликобактерной инфекции на основе диспергированных в фармацевтически приемлемом носителе наночастиц циклодекстрина размером от 100 до 1000 нм, содержащих терапевтически эффективное количество диспергированного в них рифабутина, не содержащая полимера; указанная композиция, как было показано в рамках настоящей работы, пригодна как для внутривенного введения пациенту (при добавлении фармацевтически приемлемого носителя и/или разбавителя), так и для изготовления твердых пероральных лекарственных форм.

Таким образом, в рамках настоящего изобретения предлагается фармацевтическая композиция для лечения микобактериозов и геликобактерной инфекции на основе диспергированных в фармацевтически приемлемом носителе наночастиц циклодекстрина размером от 100 до 1000 нм, содержащих терапевтически эффективное количество диспергированного в них рифабутина, а также фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, отличающаяся тем, что указанные наночастицы не содержат полимера.

Указанная фармацевтическая композиция может представлять собой как лиофилизат при диспергировании в фармацевтически приемлемом носителе, образующий суспензию, пригодный для внутривенного и/или внутримышечного введения в терапевтически эффективном количестве нуждающемуся в этом пациенту, так и порошок, пригодный для изготовления твердых пероральных лекарственных форм (таких как таблетки, капсулы или драже).

Фармацевтически приемлемый носитель, пригодный для использования в соответствии с заявляемым изобретением, может представлять собой либо 0,9% водный раствор хлорида натрия, либо 0,01водный раствор полисорбата-80, либо 0,05-5% водный раствор полоксамера-188, либо 0,05-5% водный раствор полоксамера-407; дополнительно указанный фармацевтически приемлемый носитель может содержать небольшое количество аскорбиновой кислоты.

В рамках настоящей работы была показана не меньшая (а в ряде случаев и более высокая) эффективность пероральной и внутривенной лекарственных форм рифабутина на основе наночастиц циклодекстрина, полученных в рамках настоящего изобретения, в лечении острой микобактериальной инфекции (экспериментальная "мышиная" модель острого туберкулеза, вызванная внутривенным введением микобактерий Mycobacterium tuberculosis, штамм H37Rv), а также безопасность указанной формы в токсикологическом отношении в сравнении с субстанцией рифабутина.

Микобактериоз в соответствии с заявляемым изобретением представляет собой микобактериоз, обусловленный одним или несколькими возбудителями, выбранными из Mycobacterium tuberculosis, или Mycobacterium bovis, или Mycobactcrium kansasii, или Mycobaclerium scrofulaceum, или Mycobacterium avium-intracellulare complex, или Mycobacterium leprae, или Mycobacterium paratuberculosis.

Геликобактерная инфекция в соответствии с заявляемым изобретением представляет собой инфекцию, вызванную Helicobacter pylori.

При необходимости поверхность наночастиц, образующих заявляемую фармацевтическую композицию, может быть дополнительно модифицирована одним или несколькими поверхностно-активными веществами (ПАВ); такая модификация, как показано в литературе [66]-[68], позволяет изменять такие параметры наночастиц, как продолжительность циркуляции наночастиц в организме, биораспределение лекарственного вещества, продолжительность и выраженность терапевтического эффекта, обеспечивать "направленную" доставку наночастиц в "целевые" органы (органы-мишени) и т.п.

Пригодные для указанной цели ПАВ включают в себя, в частности (но не ограничиваясь данным перечнем), полоксамер-101, полоксамер-105, полоксамер-108, полоксамер-122, полоксамер-123, полоксамер-124, полоксамер-181, полоксамер-182, полоксамер-183, полоксамер-184, полоксамер-185, полоксамер-188, полоксамер-212, полоксамер-215, полоксамер-217, полоксамер-231. полоксамер-238, полоксамер-282, полоксамер-288, полоксамер-331, полоксамер-401. полоксамер-407, сорбитан моностеарат 80), сорбитан монопальмитат (SPAN 40), сорбитан триолеат (SPAN 85) или их смеси.

Наиболее предпочтительными для использования в рамках заявляемого изобретения поверхностноактивными веществами являются полисорбат-80 (торговая марка Tween® 80), полоксамер-188 (торговая марка Pluronic® F-68) и полоксамер-407.

Полоксамеры (см. общую структурную формулу полоксамеров на фиг. 2) представляют собой сополимеры полиоксиэтилена и полиоксипропилена, существуют в виде жидкостей, паст или в твердом виде, применяются в фармацевтике с конца 1950 г. [68]; при этом каждый из полоксамеров характеризуется определенным соотношением числа звеньев полиоксиэтилена и полиоксипропилена.

В литературе было показано ранее, что модификация поверхности (покрытие) наночастиц на основе биоразлагаемого полимера (сополимера молочной и гликолевой кислот и/или полимера молочной кислоты), содержащих фармакологически активное вещество, полоксамером-188 позволяет как пролонгировать время циркуляции таких наночастиц в крови, так и усиливать фармакологический эффект данного вещества, например, доставляя активное вещество в селезенку [69] и в лимфатические узлы [70], а также может применяться для создания лекарственных форм на основе полимерных наночастиц с постепенным (замедленным) высвобождением лекарственного вещества [71]-[73].

Пригодный для создания фармацевтической композиции в рамках заявляемого изобретения циклодекстрин может быть выбран из -циклодекстрина, 2-гидроксипропил--циклодекстрина, 6монодезокси-6-моноамина--циклодекстрина, -циклодекстрина, 2-гидроксипропил--циклодекстрина, сульфобутил--циклодекстрина или их смеси, при этом количественное соотношение рифабутин:циклодекстрин в заявляемой фармацевтической композиции может составлять от 1:1 до 1:5.

Композиция в соответствии с заявляемым изобретением может также дополнительно (т.е. при необходимости) содержать криопротектор, выбранный из 1-50% глюкозы, 1-50% лактозы, 1-50% маннита или 1-50% трегалозы.

Также в рамках настоящего изобретения нами заявляется способ получения фармацевтической композиции по изобретению, отличающийся тем, что:

а) навеску циклодекстрина или его фармацевтически приемлемого(ых) производного(ых) растворяют в растворителе при интенсивном перемешивании;

б) добавляют к полученному раствору навеску рифабутина;

в) перемешивают;

г) гомогенизируют;

д) добавляют полученную дисперсию к водному раствору поверхностно-активного вещества при интенсивном перемешивании;

е) гомогенизируют;

ж) удаляют растворитель;

з) центрифугируют;

и) высушивают.

В рамках настоящего изобретения высушивание (этап (и)) может осуществляться как при помощи лиофильной сушки, так и при помощи распылительной сушки.

Дополнительно указанный способ может включать в себя также нагревание реакционной смеси, и/или обработку реакционной смеси ультразвуком, и/или обработку реакционной смеси микроволновым излучением (СВЧ-излучение), которые могут осуществляться на этапе (в).

Указанный способ может также (при необходимости) включать в себя добавление криопротектора (выбранного предпочтительно из 1-50% глюкозы, 1-50% лактозы, 1-50% маннита или 1-50% трегалозы);

в этом случае криопротектор добавляют после стадии центрифугирования (этап (з)).

Растворитель в соответствии с заявляемым изобретением предпочтительно удаляют при помощи отгонки на роторном испарителе (при пониженном давлении).

Также в соответствии с заявляемым изобретением мы заявляем способ лечения микобактериоза, отличающийся тем, что внутривенно и/или внутримышечно вводят терапевтически эффективное количество фармацевтической композиции по изобретению в виде суспензии в фармацевтически приемлемом носителе нуждающемуся в этом пациенту;

способ лечения микобактериоза, отличающийся тем, что перорально вводят терапевтически эффективное количество фармацевтической композиции по изобретению в виде порошка или в виде твердой пероральной лекарственной формы нуждающемуся в этом пациенту;

способ лечения геликобактерной инфекции, отличающийся тем, что внутривенно и/или внутримышечно вводят терапевтически эффективное количество фармацевтической композиции по изобретению в виде суспензии в фармацевтически приемлемом носителе нуждающемуся в этом пациенту;

способ лечения геликобактерной инфекции, отличающийся тем, что перорально вводят терапевтически эффективное количество фармацевтической композиции по изобретению в виде порошка или в виде твердой пероральной лекарственной формы нуждающемуся в этом пациенту.

Следует учитывать, что в рамках настоящего изобретения микобактериоз может быть обусловлен bovis, или Mycobacterium kansasii, или Mycobacterium scrofulaceum, или Mycobacterium aviumintracellulare complex, или Mycobacterium leprae, или Mycobacterium paratuberculosis; геликобактерная инфекция может быть обусловлена Helicobacter pylori.

Представленные ниже примеры, относящиеся к получению фармацевтической композиции в соответствии с настоящим изобретением, а также к подтверждению ее более высокой эффективности в лечении острой экспериментальной микобактериальной инфекции, обусловленной Mycobacterium tuberculosis, не ограничивают объем притязаний, а приводятся лишь для иллюстрации настоящего изобретения.

Квалифицированному в данной области специалисту должно быть понятно также, что заявляемая фармацевтическая композиция на основе наночастиц (нанокристаллов) циклодекстрина с инкорпорированным в них рифабутином может также с успехом применяться и для лечения других инфекций, "охваченных" спектром антибактериальной активности рифабутина [1], в частности для лечения микобактериоза, обусловленного Mycobacterium leprae, микобактериоза, обусловленного Mycobacterium bovis, микобактериоза, обусловленного Mycobacterium kansasii, микобактериоза, обусловленного Mycobacterium scrofulaceum, или Mycobacterium avium-intracellulare complex, или Mycobacterium leprae, или Mycobacterium paratuberculosis, а также для лечения геликобактерной инфекции; таким образом, спектр антибактериальной активности композиции определяется не новой лекарственной формой, раскрытой в рамках настоящей заявки, а спектром антибактериальной активности самого рифабутина [1].

Дополнительно следует также отметить, что предложенный в рамках настоящего изобретения способ синтеза наночастиц циклодекстрина с инкорпорированным в них рифабутином позволяет обойтись без использования высокотоксичных хлорорганических растворителей (хлористого метилена и др.), которые используются, например, в синтезе наносомальных форм рифабутина согласно [53] или [62] и остаточные количества которых могут сохраняться в готовой лекарственной форме, полученной в соответствии с [53] или [62]; в заявляемом способе синтеза в качестве органических растворителей могут быть использованы этанол, ацетон или N-метилпирролидон.

Пример 1. Получение (синтез) наночастиц циклодекстрина с инкорпорированным в них рифабутином с использованием лиофильного высушивания, их физико-химические характеристики.

Навеску рифабутина и циклодекстрина (выбранного из -циклодекстрина (-ЦД), циклодекстрина (-ЦД), 2-гидроксипропил--циклодекстрина (2-ГП--ЦД) или сульфобутил-циклодекстрина (SBE--ЦД) заливали растворителем (этанол, ацетон, диметилсульфоксид (ДМСО) или метилпирролидон), оставляли на магнитной мешалке при интенсивном перемешивании в течение 4 суток. Затем обрабатывали на ультразвуковой бане в течение 15 мин, добавляли водный раствор Pluronic® F-68 (полоксамер-188), дважды гомогенизировали с помощью УЗ-гомогенизатора и отгоняли растворитель при пониженном давлении. Далее отделяли крупные агломераты центрифугированием, к супернатанту добавляли криопротектор (глюкозу, лактозу, маннит или трегалозу), разливали по флаконам ( мл/флакон), замораживали при температуре -70°С и лиофильно высушивали.

Для каждого образца и для каждого разведения определяли средний диаметр наночастиц (среднее значение ± стандартное отклонение) и индекс полидисперсности наночастиц (PDI, среднее значение ± стандартное отклонение).

В ходе эксперимента варьировались (при получении различных партий препарата) концентрации рифабутина, виды используемого циклодекстрина (-циклодекстрин, -циклодекстрин, 2гидроксипропил--циклодекстрин, сульфобутил--циклодекстрина, 2-гидроксипропил--циклодекстрин), весовое соотношение "рифабутин:циклодекстрин", вид используемых растворителей (этиловый спирт, диметилсульфоксид (ДМСО), N-метилпирролидон или ацетон), а также наличие ПАВ (предпочтительно 0,1-1% Pluronic F-68) или его соответствие.

Физико-химические характеристики синтезированных в соответствии с настоящим примером наночастиц циклодекстрина (ЦД) с инкорпорированным в них рифабутином (Rb) (включая концентрацию рифабутина (%), вид использованного циклодекстрина (-циклодекстрин (-ЦД), сульфобутил-циклодекстрина (SBE--ЦД), -циклодекстрин (-ЦД), 2-гидроксипропил--циклодекстрин (2-ГП--ЦД)) и его концентрацию (%), соотношение рифабутин:циклодекстрин для каждой партии наночастиц в соответствии с изобретением, вид использованного растворителя, использованное поверхностно-активное вещество (ПАВ) и его концентрацию (%), условия измерения, вид использованного криопротектора и его концентрацию (%), средний диаметр наночастиц и индекс полидисперсности (PDI)) представлены в табл.

Физико-химические характеристики наночастиц в соответствии с примером Пример 2. Получение (синтез) наночастиц циклодекетрина с инкорпорированным в них рифабутином с использованием распылительного высушивания, их физико-химические характеристики.

Осуществляли синтез наночастиц циклодекстрина с инкорпорированным в них рифабутином аналогично примеру 1, однако на завершительном этапе синтеза частицы подвергали не лиофильному, а распылительному высушиванию.

При получении различных партий препарата варьировались концентрации рифабутина, виды используемого циклодекетрина (-циклодекстрин, -циклодекстрин, 2-гидроксипропил--циклодекстрин, - 11 сульфобутил--циклодекстрина, 2-гидроксипропил--циклодекстрин), весовое соотношение "рифабутин:циклодекстрин", вид используемых растворителей (этиловый спирт, N-метилпирролидон или ацетон), а также наличие ПАВ (предпочтительно 0,1-1% Pluronic F-68) или его соответствие. Для каждого образца определяли средний диаметр наночастиц (среднее значение ± стандартное отклонение) и индекс полидисперсности наночастиц (PDI, среднее значение ± стандартное отклонение).

В ходе эксперимента варьировали (при получении различных партий препарата) концентрации рифабутина, виды используемого циклодекстрина (-циклодскстрин, -циклодекстрин, 2-гидроксипропилциклодекстрин. сульфобутил--циклодекстрина, 2-гидроксипропил--циклодекстрин), весовое соотношение "рифабутин:циклодекстрин", вид используемых растворителей (этиловый спирт, диметилсульфоксид (ДМСО), N-метилпирролидон или ацетон), а также наличие ПАВ (предпочтительно 0,1-1% Pluronic F-68) или его соответствие.

Физико-химические характеристики некоторых синтезированных в соответствии с настоящим примером наночастиц циклодекстрина (ЦД) с инкорпорированным в них рифабутином (Rb) (включая концентрацию рифабутина (%), вид использованного циклодекстрина (-циклодекстрин (-ЦД), сульфобутил--циклодекстрина (Е--ЦД), -циклодекстрин (-ЦД), 2-гидроксипропил--циклодекстрин (2-ГП-ЦД)) и его концентрацию (%), соотношение рифабутин:циклодекстрин для каждой партии наночастиц в соответствии с изобретением, вид использованного растворителя, использованное поверхностноактивное вещество (ПАВ) и его концентрацию (%), условия измерения, вид использованного криопротектора и его концентрацию (%), средний диаметр наночастиц и индекс полидисперсности (PDI)) представлены в табл. 2.

Физико-химические характеристики наночастиц в соответствии с примером В результате проведенной серии экспериментов (примеры 1, 2) было установлено, что для получения фармацевтической композиции в соответствии с изобретением (композиция на основе наночастиц циклодекстрина с инкорпорированным в них рифабутином) пригодно как распылительное, так и лиофильное высушивание.

Также было установлено, что оптимальным для получения наночастиц (нанокристаллов) в соответствии с изобретением, содержащим рифабутин, является соотношение рифабутин:циклодекстрин, равное 1:1-1:1,5; для -циклодекстрина это соотношение составляет 1:1,25, для 2-гидроксипропил-циклодекстрина приблизительно 1:1.

Наиболее оптимальным растворителем в результате эксперимента был признан диметилсульфоксид (ДМСО), однако, поскольку ДМСО сложно удалить полностью из готового препарата (фармацевтической композиции) в соответствии с изобретением, решено было использовать в качестве органического растворителя этанол.

Наиболее предпочтительными циклодекстринами для использования в составе фармацевтической композиции по изобретению в соответствии с результатами, полученными в рамках примера 1, были Один из образцов заявляемой фармацевтической композиции рифабутина, синтезированный в рамках примеров 1, 2 с использованием наночастиц 2-гидроксипропил--циклодекстрина с включенным в них рифабутином, был исследован в рамках настоящей работы на эффективность в лечении экспериментального туберкулеза у мышей, вызванного Mycobacterium tuberculosis. Методика исследования эффективности и результаты представлены в примере 3 (внутривенное введение) и примере 4 (пероральное введение).

Пример 3. Изучение эффективности наносомальной фармацевтической композиции рифабутина в соответствии с изобретением в лечении острого экспериментального туберкулеза у мышей, вызванного инфекцией Mycobacterium tuberculosis (штамм H37Rv), при внутривенном введении.

Цель эксперимента состояла в сравнении лечебного эффекта заявляемой фармацевтической композиции рифабутина (наночастицы 2-гидроксипропил--циклодекстрина с инкорпорированным в них рифабутином в соответствии с настоящим изобретением) при внутривенном введении и субстанции рифабутина (при пероральном введении) при лечении острого экспериментального туберкулеза у мышей.

Эксперименты проводились на экспериментальных животных - 100 мышах (n = 100) - самках линии Balb/c в возрасте 7-8 недель, весом 20-22 г. Взятые в исследование животные были инфицированы микобактериями туберкулеза (Mycobacterium tuberculosis, штамм H37Rv) в дозе 5,6107 КОЕ/мышь путем введения суспензии микобактерий в боковую хвостовую вену животных.

Как суспензию субстанции рифабутина ("Rb"), так и раствор его фармацевтической композиции ("Rb-ЦД НЧ") в соответствии с изобретением (образец № 12 по табл. 1) готовили не более чем за 1 ч до начала терапии (в соответствии с паспортными рекомендациями и со способом синтеза, раскрытым в примере 1). Для приготовления суспензии субстанции рифабутина к 10 мг субстанции рифабутина добавляли 100 мкл 90 об.% этанола, разбавляли стерильной водой (до 4 мл) до конечной концентрации 2, мг/мл. Композицию рифабутина в соответствии с настоящим изобретением ("Rb-ЦД НЧ") разбавляли в физиологическом растворе (0,9% раствор хлорида натрия), содержащем небольшое количество аскорбиновой кислоты, и разводили водой до конечной концентрации 2,5 мг/мл.

Лечение начинали на 7 день после заражения и продолжали в течение 4 недель.

На протяжении данного срока, 3 раза в неделю животным опытной группы вводили внутривенно (i.v.) в боковую хвостовую вену фармацевтическую композицию рифабутина в соответствии с изобретением ("Rb-ЦД НЧ"), в дозе 100 мкг/мышь (20 животных) или 500 мкг/мышь (20 животных) (внутривенно). Животным, входящим в группу сравнения, вводили перорально (per os) (в объеме 0,2 мл) раствор субстанции рифабутина в дозе 100 мкг/мышь (20 животных) или 500 мкг/мышь (20 животных). Животным контрольной группы (20 животных) вводили внутривенно (в боковую хвостовую вену) по 0,2 мл физиологического раствора.

На следующий день после окончания лечения производились эвтаназия животных, их вскрытие, изъятие и гомогенизация внутренних органов (легкие, селезенка); цельные гомогенаты (0-е разведение) и первое десятикратное разведение гомогенатов (для животных, получавших внутривенно фармацевтическую композицию рифабутина в соответствии с изобретением и для животных, получавших перорально раствор рифабутина) высевали на питательную среду "Мидлбрук 7H11 агар"; для животных контрольной группы производился высев на "Мидлбрук 7H11 агар" первого (десятикратного) и второго (стократного) разведений гомогената. Подсчет числа КОЕ производился через 21 день после посева; для каждого значения брали десятичный логарифм (lg (КОЕ)); результаты для каждой группы животных, для каждого из органов (легкие, селезенка) представлены в табл. 3 (КОЕ/орган, в виде: среднее значение ± стандартное отклонение) и на фиг. 3.

Обсемененность органов мышей, зараженных М. tuberculosis H37Rv, после внутривенного лечения композицией рифабутина в соответствии с изобретением Таким образом, вводимая внутривенно "циклодекстриновая" форма рифабутина ("Rb-ЦД НЧ"), созданная в рамках настоящего изобретения, как это видно из данных, представленных в табл. 3 и на фиг. 3, была эффективнее субстанции рифабутина, введенной перорально при лечении экспериментального туберкулеза мышей. Отклонения между группами достоверны в обеих используемых дозах (100 и мкг/мышь). Наибольшая разница между группами наблюдалась при высевах из легочной ткани.

соответствии с изобретением в лечении острого экспериментального туберкулеза у мышей, вызванного инфекцией Mycobacterium tuberculosis (штамм H37Rv), при пероральном введении.

По аналогии с примером 2 цель эксперимента состояла в сравнении лечебного эффекта заявляемой фармацевтической композиции рифабутина (наночастицы 2-гидроксипропил--циклодекстрина с инкорпорированным в них рифабутином в соответствии с настоящим изобретением), при пероральном введении указанной композиции (в виде порошка) и субстанции рифабутина (также при пероральном введении) при лечении острого экспериментального туберкулеза у мышей.

Характеристики и количество животных (вид животных, средняя масса тела), методика их инфицирования микобактериями туберкулеза (Mycobacterium tuberculosis, штамм H37Rv), а также схема эксперимента соответствовали примеру 3.

Аналогично примеру 3, лечение животных начинали на 7 день после заражения, но продолжали в течение 8 недель. На протяжении данного срока, 3 раза в неделю, животным вводили перорально, в объеме 0,2 мл, в дозах 500 и 100 мкг/мышь либо суспензию рифабутина ("Rb"), либо композицию рифабутина в соответствии с изобретением ("Rb-ЦД НЧ, per os", образец № 12 по табл. 1) (по 20 животных на каждую дозу, на каждую из форм рифабутина); контрольной группе (20 животных) вводили перорально по 0,2 мл физиологического раствора.

На следующий день после окончания лечения производились эвтаназия животных, их вскрытие, изъятие и гомогенизация внутренних органов (легкие, селезенка); цельные гомогенаты (0-е разведение) и первое десятикратное разведение гомогенатов (для животных, получавших антибиотик рифабутин в той или иной форме) высевали на питательную среду "Мидлбрук 7H11 агар"; для животных контрольной группы (20 животных) производился высев на "Мидлбрук 7H11 агар" первого (десятикратного) и второго (стократного) разведений гомогената.

Подсчет числа КОЕ производился через 21 день после посева; для каждого значения брали десятичный логарифм (lg (КОЕ)); результаты для каждой группы животных, для каждого из органов (легкие, селезенка) представлены в табл. 4 (КОЕ/орган, в виде: среднее значение ± стандартное отклонение) и на фиг. 4.

Обсемененность органов мышей, зараженных М. tuberculosis H37Rv, после перорального лечения композицией рифабутина в соответствии с изобретением Из представленных в примере 4, в табл. 4 и на фиг. 4 данных можно видеть, что вводимая перорально фармацевтическая композиция рифабутина в соответствии с настоящим изобретением оказалась эффективнее субстанции рифабутина, введенной тем же способом, в лечении острого экспериментального туберкулеза у мышей. Отклонения между группами достоверны в двух используемых дозах (100 и мкг/мышь). Наибольшая разница между группами наблюдалась при высевах из легочной ткани. При пероральном введении фармацевтической композиции рифабутина в соответствии с изобретением в дозе 500 мкг/мышь наблюдался эффект (феномен) стерилизации в легочной ткани.

Таким образом, в рамках настоящего изобретения удалось создать растворимую лекарственную форму антибиотика рифабутина, пригодную как для парентерального, так и для перорального введения нуждающемуся в этом пациенту, на основе наночастиц циклодекстрина, содержащую рифабутин в концентрации 4±1 мг/мл; было показано, что по эффективности такая растворимая форма рифабутина не уступает эффективности вводимой перорально (в тех же дозах) субстанции рифабутина, а в отношении элиминации М. tuberculosis в селезенке даже превосходит ее, что и составляет неожиданный технический результат настоящего изобретения.

1. Цыбанев А.А., Соколова Г.Б. Противотуберкулезный антибиотик пролонгированного действия рифабутин. Антимикробный спектр, особенности фармакодинамики и фармакокинетики. - Антибиотики и химиотерапия, 1999; 44(8), с. 30-36. Доступно в сети Интернет (на 29.09.2010):

http://nature.web.ru/db/msg.html?mid=1180884&uri=index.html;

http://nature.web.ru/db/msg.html?mid=1180884&uri=index2.html;

http://nature.web.ru/db/msg.html?mid=1180884&uri=index3.html.

2. Ungheri D., Delia Brunna C., Sanfilippo A. Studies on the mechanism of action of spiropiperidylrifamycin on LM427 rifampicin-resistant M. tuberculosis. - Drugs under Experimental and Clinical Research, 1984; 10: 681-689: 37: 7685-7694.

3. Grosset J.H. New approaches in anlimycobaclerial chemotherapy. - Drugs Today, 1988; 24: 291-301;

4. Heifets L.B., Lindholm-Levi P.J., Iseman M. Rifabutin: minimal inhibitory concentration for Mycobacterium tuberculosis. - The American Review of Respiratory Diseases, 1988; 137: 719-721.

5. Arme Y.A. Antimaycobacterial activity in vivo of LM 427 (Rifabutin). - The American Review of Respiratory Diseases, 1988; 138: 1254-1267.

6. Brogden R.N., Futton A. Rifabutin. A review of its antimicrobial activity, pharmaco-kinetic properties and therapeutic efficacy. – Drugs, 1994; 47: 6: 983-1009.

7. Yajko D.M., Nassos P.S., Hadley W.K. Therapeutic implications of inhibition versus killing of Mycobacterium avium complex by antimicrobial agents. - Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 1987; 31: 117Dhople A.M., Ibanes M.A. In vitro activity of three new fluoroquinolones and synergy with ansamycins against Mycobacterium leprae. - The Journal of Antimicrobial Chemotherapy, 1993; 32: 445-449.

9. Centers for Disease Control and Prevention (2000) Updated guidelines for the use of rifabutin or rifampin for the treatment and prevention of tuberculosis among HIV-infected patients taking protease inhibitors or nonnucleoside reverse transcriptase inhibitors. - MMWR Morb. Mortal Wkly Rep. 49(9), 185 9. Available online: www.cdc.gov/nchstp/tb/ (at 29.09.2010).

10. Kunin C.M. Antimicrobial activity of rifabutin. - Clinical infectious diseases : an official publication of the Infectious Diseases Society of America, 1996; 22: Suppl. 1: 3-14.

11. Kan N., Baldwin J., Prince H.N. et al. A comparative study of rifabutin and other antibiotics against a spectrum of nonmycobacterial microorganism. - 9th Meeting of the American Society of Microbiology, 1994;

Abstr A-37, USA.

12. Wood С.A. Rifampicin-resistant Staphylococcus bacteriemia in patient with AIDS receiving rifabutin. Lancet, 1994; 343: 919-926.

13. Rossi R., Jabes D., Della Bruna C. In vitro activity in rifabutin, potential antibiotic in the therapy of Helicobacter pylori. - 6th International Congress of Infectious Diseases. Prague, 1994; Abstr. 48.

14. Toracchio S., Capodicasa S., Soraja D.B., Cellini L., Marzio L. Rifabutin based triple therapy for eradication of H. pylori primary and secondary resistant to tinidazole and clar-ithromycin. - Digestive and Liver Diseases, 2005 Jan.; 37(1): 33-8.

15. Canducci F., Ojetli V., Pola P., Gasbarrini G., Gasbarrini A. Rifabutin-based Helicobacter pylori eradication "resque therapy". - Alimentary Pharmacology & Therapeutics, 2000; 14: 311-316.

16. Treharne J.D., Yearshy P.L., Ballard R.C. Chlamydia trachomatis susceptibility and resistance to rifampicin and rifabutin. - The Journal of Antimicrobial Chemotherapy, 1989; 33: 1393-1394.

17. Aranjo F.G., Sliter Т., Remington J.S. Rifabutin is active in murine model toxo-plasmosis. - Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 1994; 38: 570-575.

18. Vaara M. Comparative activity of rifabutin and rifampicin against gramnegative bacteria that have damaged or defected outer membranes. - The Journal of Antimicrobial Chemotherapy, 1993; 31: 799-801.

19. Heifets L.B., Lindholm-Levy P.J., Flory М.А. Bactericidal activity in vitro of rifabutin against M.

avium and M. tuberculosis. - The American Review of Respiratory Diseases, 1990; 141: 626-630.

20. Truffot-Peruot C., Giroir A.M., Maichuk I., Grosset J. A study of the minimal inhibitory concentration of rifabutin (ansamycin LM 427) for Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium xenopi and Mycobacterium avium-intracellulare. - Revue des Maladies Respiratoires, 1988; 5: 401-406.

21. Kent R.J., Bakhtiar M., Shanson D.C. The in vitro bactericidal activities of combinations of antimicrobial agents against clinical isolates of Mycobacterium avium-intracellulare. - The Journal of Antimicrobial Chemotherapy, 1992; 30: 643-650.

22. Mascellino M.T., Yona E., Fattarini L. et al. In vitro activity of clarithromycin alone or 10 combinations with other antimicrobial agents against Mycobacterium avium-intracellulare complex strains isolated from AIDS patients. - Journal of Chemotherapy, 1991; 3: 357-362.

23. Seydel J.K., Schaper K.Y., Rusch-Gerdes S. Development of effective drug combinations for the inhibition of multiple resistant Mycobacterium, especially of the Mycobacterium avium complex. - Chemotherapy, 1992; 38: 159-168.

24. Hjelm U., Kaudtova J., Kubin M., Hoffner S.E. Susceptibility of Mycobacterium kansasii to ethambutol with rifamycin, ciprofloxacin and isoniazid. - European Journal of Clinical Microbiology & Infectious Diseases, 1992; 11: 51-54.

25. Chiodim R.J. Bactericidal activities of various antimicrobial agents against human and animal isolates of Mycobacterium paratuberculosis. - Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 1990; 34: 366-367.

26. Van Der Awera Т., Matsumoto Т., Husson M. Intraphagocytic penetration of antibiotics. - Journal of Antimicrobial Chemotherapy, 1988, 22: 185-192.

27. Rastogi N., Polar M.C., David H.L. Action of antituberculosis and -lactam drugs against extra- and intracellularly growing Mycobacterium avium-intracellulare. - Ann Inst Pasteur (Microbiologie), 1988; 139: 225Rastogi N., Blom-Potar M.C., David H.L. Drug action against intracellular growth of Mycobacterium xenopi. - Curr. Microbiol., 1989, 19: 83-89.

29. Fantorini L., Hu C.Q., Jin S.H. et al. Activity of antimicrobial agents against Mycobacterium avium intracellulare complex (VFC) strains isolated in Italy from AIDS patients. - Zentralblatt Bacteriol., 1992; 276: 512Matteelli A., et al. (2005) Tolerability of twice-weekly rifabutin-isoniazid combinations versus daily isoniazid for latent tuberculosis in HIV-infected subjects: a pilot study. - Int. J. Tuberc Lung Dis, 3, 1043 6.

31. Szejtli J. Cyclodextrin Technology (J.E.D. Davies. series ed.). - Kluwer Academic Publishers, Dordrecht, the Netherlands, 1988.

32. Duchene D. Cyclodextrins and Their Industrial Uses. - Editions de Sante, Paris, 1987.

33. Frmming K., Szejtli J. Cyclodextrins in Pharmacy. - Kluwer Academic Publishers, Dordrecht, the Netherlands, 1994.

34. Uekama K., Ilirayama F., Irie T. Application of cyclodextrins in pharmaceutical preparations. - Drug Targeted Delivery, 3, p. 411-456, 1994.

35. Albers E., Muller B.W. Cyclodextrin derivatives in pharmaceutics. - Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 12, p. 311-337, 1995.

36. Loftsson T. Effects of cyclodextrins on the chemical stability of drugs in aqueous solutions. - Drug Stability, 1, p. 22-33, 1995.

37. Loftsson Т., Brewster M.E. Pharmaceutical applications of cyclodextrins. 1. Drug solubilization and stabilization. - Journal of Pharmaceutical Sciences, 85, p. 1017-1025, 1996.

38. Rajewski R.A., Stella V.J. Pharmaceutical applications of cyclodextrins. 2. In vivo drug delivery. Journal of Pharmaceutical Sciences, 85, p. 1142-1168, 1996.

39. Irie Т., Uekama K. Pharmaceutical applications of cyclodextrins. - III. Toxicological issues and safety evaluation. - Journal of Pharmaceutical Sciences, 86, p. 147-162, 1997.

40. Stella V.J., Rajewski R.A. Cyclodextrins: their future in drug formulation. - Pharmaceutical Research, 14, p. 556-567, 1997.

41. Thompson D.O. Cyclodextrins - enabling excipients: their present and future use in Pharmaceuticals. Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 14, p. 1-104, 1997.

42. Stella V.J., Rao V.M., Zannou E.A., Zia V. Mechanisms of drug release from cyclodextrin complexes.

- Advanced Drug Delivery Reviews, 36, p. 3-16, 1999.

43. Szente L., Szejtli J. Highly soluble cyclodextrin derivatives: chemistry, properties, and trends in development. - Advanced Drug Delivery Reviews, 36, p. 17-28, 1999.

44. Mosher G.L., Thompson D.O. Complexation and cyclodextrins. - Encyclopedia of Pharmaceutical Technology, 2nd edition, J. Swarhrick and J.C. Boylan, editors, p. 531-538, Marcel Dekker, Inc., New York, 2002.

45. Stefansson E., Loftssson T. Cyclodextrins in eye drop formulations. - Journal of Inclusion Phenomena and Macrocyclic Chemistry, 44, p. 23-27, 2003.

46. Rao V.M., Stella V.J. When can cyclodextrins be considered for solubilization purposes? - Journal of Pharmaceutical Sciences, 92, p. 927-932, 2003.

47. Challa R., Ahuja A., Ali J., Khar R.K. Cyclodextrins in drug delivery: An updated review. - AAPS Pharm. Sci Tech., 6, E329-E357, 2005.

48. Stella V.J., He Q. Cyclodextrins. - Toxicological Pathology, 2008; 36; 30. Available on-line:

http://tpx.sagepub.com/cgi/content/abstract/36/1/30 (at 29.09.2010).

49. WO 2004/041284 A1 "Inclusion complex of anti-tubercular rifampicin with beta-cyclodextrin or 2hydroxypropyl beta-cyclodextrin and a process for producing the same", заявитель COUNCIL OF SCIENTIFIC AND INDUSTRIAL RESEARCH [IN], авторы изобретения RAO, Kakulapati, Rama [IN], BIIANUMATHI, Nanduri [IN], YADAV, Jhillu [IN] и KRISHNAVENI, Neclam, Srilakshmi [IN]; опубликовано 21.05.2004.

50. Patil J.S., Suresh S. Physicochemical characterization, in vitro release and permeation studies of respirable rifampicin-cyclodexlrin inclusion complexes. - Indian Journal of Pharmaceutical Sciences, 2009, Nov-Dec;

71 (6): p.638-643. Available on-line: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2846468/?tool=pubmed (at 29.09.2010).

51. Leroy-Lechat F., Wouessidjewe D., Andreux J.-P., Puisieux F., Duchene D. Evaluation of the cytotoxicity of cyclodextrins and hydroxypropylated derivatives. - International Journal of Pharmaceuticals, 101, p. 97Schnfelder U., Radestock A., Eisner P., Hipler U.C. Cyclodextrin-induced apop-tosis in human keratinocytes is caspase-8 dependent and accompanied by mitochondrial cyto-chrome с release. Exp. Dermatol., 15, p. 883-890, 2006.

53. Mehta S.K., Bhasin K.K., Mehta N, Dham S. Behavior of rifampicin in association with betacyclodextrin in aqueous media: a spectroscopic and conductometric study. - Colloid and Polymer Science (2005) 283: 532-538.

54. Pandey R., Zahoor A., Sharma S., Khuller G.K. Nanoparticle encapsulated an-titubercular drugs as a potential oral drug delivery system against murine tuberculosis. - Tuberculosis (Edinburgh, Scotland) 2003;

nanoparticles: research and applications. - International Journal of Antimicrobial Agents 2000 Jan; 13(3): 155Review.

56. RU 2337711 C1 "Средство для лечения бактериальных инфекций", патентообладатель ООО "Научно-Производственный Комплекс "Наносистема", авторы изобретения Гельперина Светлана Эммануиловна [RU], Максименко Ольга Олеговна [RU], Шипуло Елена Владимировна [RU], Ванчугова Людмила Витальевна [RU], опубликовано 10.11.2008 (бюллетень № 31).

57. ЕА 012121 В1 "Фармацевтическая композиция для лечения туберкулеза и заболеваний, опосредованных Helicobacter pylori, на основе полимерных наночастиц, способ ее получения и способы лечения", патентообладатель ООО "НИК "Наносистема" [RU], авторы изобретения Гельперина Светлана Эммануиловна [RU], Максименко Ольга Олеговна [RU], Шипуло Елена Владимировна [RU], Ванчугова Людмила Витальевна [RU], опубликовано 28.08.2009 (бюллетень ЕАПВ 4'2009).

58. ЕА 013569 В1 "Фармацевтическая композиция рифабутина для лечения туберкулеза и заболеваний, опосредованных HELICOBACTER PYLORI. Способ ее получения и способ лечения", патентообладатель ООО "НПК "Наносистема" [RU], авторы изобретения Гельперина Светлана Эммануиловна [RU], Максименко Ольга Олеговна [RU], Шипуло Елена Владимировна [RU], Ванчугова Людмила Витальевна [RU], Бабий Владимир Евстахиевич [RU], Игнатьев Алексей Владимирович [RU], опубликовано 30.06.2010 (бюллетень ЕАПВ 3'2010).

59. WO 2008/129106 А2 "Nanoparticles comprising a cyclodextrin and a biologically active molecule and uses thereof", заявители: INSTITUTO CIENTIFICO Y TECNOLOGICO DE NAVARRA, S.A [ES]; SALMAN NASHAM H.A. [ES]; IRACHE GARRETA JUAN MANUEL [ES]; CAMPANERO MARTINEZ MIGUEL ANGE [ES], авторы изобретения: SALMAN NASHAM H.A. [ES]; IRACHE GARRETA JUAN MANUEL [ES]; CAMPANERO MARTINEZ MIGUEL ANGE [ES], опубликовано 30.10.2008.

60. Arbs P., Wirth M., Arangoa M.A., Gabor F., Irache J.M. Gantrez A.N. as a new polymer for the preparation of ligand-nanoparticle conjugates. - Journal of Controlled Release, 2002, Oct 30; 83(3): 32l-30.

61. Breslow D.S. Biologically active synthetic polymers. - Pure and Applied Chemistry, vol. 46, pages 110-113, Pergamon Press, 1976.

62. Regelson W., Holland J.F. Effect of an anionic polyelectrolyte (polyethylene sulfonate) in patients with cancer. Clinical pharmacology of a macromolecule. - Clinical Pharmacology and Therapeutics, 1962, Nov-Dec;

3: 730-749.

63. Regelson W., in Water-Soluble Polymers, Polymer Science and Technology. - vol. 2 (edited by N.M.

Bikales), pages 161-177, Plenum Press, New York (1973).

64. Finter N.B., ed. Interferons and Interferon Inducers. - North-Holland, Amsterdam, 1973, pages 324, 369, 384.

65. Переверзева Э.Р., Трещалин И.Д., Максименко О.О., Гельперина С.Э. Изменение токсических свойств рифабутина при применении его в коллоидной лекарственной форме. - 3-й съезд токсикологов России, 2-5 декабря 2008 г., Москва. Тезисы докладов. - Министерство здравоохранения и соц. развития Российской Федерации. - М., 2008, 556 с.

66. Stolnik S., Dunn S.E., Garrett M.C., Davies M.C., Coombes A.G.A., Taylor D.C., Irving M.P., Purkiss S.C., Tadros T.F., Davis S.S. & Illum L. Surface modification of poly(lactide-co-glycolide) nanospheres by biodegradable poly(lactide)-poly(ethylene glycol) co-polymers. - Pharmaceutical Research, 11, 1994, pages 1800Moghimi S.M., Hunter A.C., Murray J.C. Long-Circulating and Target-Specific Nanoparticles: Theory to Practice. - Pharmacol. Reviews, 53: 283-318, 2001.

68. Moghimi S.M., Hunter A.C. Poloxamers and poloxamines in nanoparticle engineering and experimental medicine. - Tibtech (Oct. 2000), vol. 18, p. 412-420.

69. Moghimi, S.M. et al. Non-phagocytic uptake of intravenously injected microspheres in rat spleen: influence of particle size and hydrophilic coating. - Biochem. Biophys. Res. Commun., 1991, 177: 861-866.

70. Moghimi, S.M. et al. Surface engineered nanospheres with enhanced drainage into lymphatics and uptake by macrophages of the regional nodes. - FEBS Lett., 1994, 344: 25-30.

71. Morikawa, K. et al. Enhancement of therapeutic effects of recombinant interleukin-2 on a transplantable rat fibrosarcoma by the use of a sustained release vehicle, Pluronic gel. - Cancer, 1987, 47: 37-41.

72. Fults, K.A., Johnson, T.P. Sustained-release of urease from a poloxamer gel matrix. - J. Parenter. Sci.

Technol., 1990, 44: 58-65.

73. Katakam, M. et al. Controlled release of human growth hormone in rats following parenteral administration of poloxamer gels. - J. Control. Release, 1997, 49: 21-26.

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Фармацевтическая композиция для лечения микобактериозов и геликобактерной инфекции на основе диспергированных в фармацевтически приемлемом носителе наночастиц циклодекстрина размером от 100 до 1000 нм, свободных от полимера и содержащих терапевтически эффективное количество диспергированного в них рифабутина, а также фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества.

2. Фармацевтическая композиция по п.1, отличающаяся тем, что она представляет собой лиофилизат, а при диспергировании в фармацевтически приемлемом носителе - суспензию для внутривенного и/или внутримышечного введения в терапевтически эффективном количестве нуждающемуся в этом пациенту.

3. Фармацевтическая композиция по п.1, отличающаяся тем, что она представляет собой порошок для изготовления твердых пероральных лекарственных форм.

4. Фармацевтическая композиция по п.3, отличающаяся тем, что твердые пероральные лекарственные формы представляют собой таблетки, капсулы или драже.

5. Фармацевтическая композиция по любому из пп.1-4, отличающаяся тем, что поверхность указанных наночастиц дополнительно модифицирована одним или несколькими поверхностно-активными веществами, выбранными из группы, включающей полоксамер-101, полоксамер-105, полоксамер-108, полоксамер-122, полоксамер-123, полоксамер-124, полоксамер-181, полоксамер-182, полоксамер-183, полоксамер-184, полоксамер-185, полоксамер-188, полоксамер-212, полоксамер-215, полоксамер-217, полоксамер-231, полоксамер-238, полоксамер-282, полоксамер-288, полоксамер-331, полоксамер-401, полоксамер-407, сорбитан моностеарат (SPAN 60), сорбитан тристеарат (SPAN 65), сорбитан монолаурат (SPAN 20), сорбитан моноолеат (SPAN 80), сорбитан монопальмитат (SPAN 40), сорбитан триолеат (SPAN 85) или их смеси.

6. Фармацевтическая композиция по п.1, отличающаяся тем, что циклодекстрин или его фармацевтически приемлемое(ые) производное(ые) выбирают из -циклодекстрина, 2-гидроксипропил-циклодекстрина, сульфобутил--циклодекстрина, 6-монодезокси-6-моноамина--циклодекстрина, циклодекстрина, 2-гидроксипропил--циклодекстрина или их смеси.

7. Фармацевтическая композиция по п.1, отличающаяся тем, что количественное соотношение (рифабутин:циклодекстрин) составляет от 1:1 до 1:5.

8. Фармацевтическая композиция по п.1, отличающаяся тем, что дополнительно содержит криопротектор, выбранный из 1-50% глюкозы, 1-50% лактозы, 1-50% маннита или 1-50% трегалозы.

9. Фармацевтическая композиция по п.1, отличающаяся тем, что фармацевтически приемлемый носитель представляет собой 0,9% водный раствор хлорида натрия, или 0,01-0,1% водный раствор полисорбата-80, или 0,05-5% водный раствор полоксамера-188, или 0,05-5% водный раствор полоксамераФармацевтическая композиция по п.9, отличающаяся тем, что фармацевтически приемлемый носитель дополнительно содержит аскорбиновую кислоту.

11. Фармацевтическая композиция по любому из пп.1-10, отличающаяся тем, что микобактериоз обусловлен одним или несколькими возбудителями, выбранными из Mycobacterium tuberculosis, или Mycobacterium bovis, или Mycobacterium kansasii, или Mycobacterium scrofulaceum, или Mycobacterium avium-intracellulare complex, или Mycobacterium leprae, или Mycobacterium paratuberculosis.

12. Фармацевтическая композиция по п.11, отличающаяся тем, что микобактериоз представляет собой ВИЧ/СПИД-ассоциированный микобактериоз.

13. Фармацевтическая композиция по п.12, отличающаяся тем, что ВИЧ/СПИД-ассоциированный микобактериоз обусловлен Mycobacterium avium-intracellulare complex.

14. Фармацевтическая композиция по п.12, отличающаяся тем, что ВИЧ/СПИД-ассоциированный микобактериоз обусловлен Mycobacterium tuberculosis.

15. Способ получения фармацевтической композиции по любому из пп.1-14, отличающийся тем, что:

а) навеску циклодекстрина или его фармацевтически приемлемого(ых) производного(ых) растворяют в растворителе при интенсивном перемешивании;

б) добавляют к полученному раствору навеску рифабутина;

в) перемешивают;

г) гомогенизируют;

д) добавляют полученную дисперсию к водному раствору поверхностно-активного вещества при интенсивном перемешивании;

е) гомогенизируют;

ж) удаляют растворитель;

з) центрифугируют;

и) высушивают.

16. Способ по п.15, отличающийся тем, что на этапе в) дополнительно осуществляют нагревание реакционной смеси, и/или обработку реакционной смеси ультразвуком, и/или обработку реакционной смеси микроволновым излучением СВЧ.

17. Способ по п.15, отличающийся тем, что в качестве циклодекстрина или его фармацевтически приемлемого (приемлемых) производного (производных) используют -циклодекстрин, циклодекстрин, 2-гидроксипропил--циклодекстрин, сульфобутил--циклодекстрин, 6-монодезокси-6моноамина--циклодекстрин, -циклодекстрин, 2-гидроксипропил--циклодекстрин или их смеси.

18. Способ по п.15, отличающийся тем, что в качестве растворителя используют ацетон, или этанол, или диметилсульфоксид, или N-метилпирролидон.

19. Способ по п.15, отличающийся тем, что растворитель на этапе ж) удаляют при помощи отгонки на роторном испарителе (при пониженном давлении).

20. Способ по п.15, отличающийся тем, что гомогенизацию осуществляют при помощи обработки ультразвуком или при помощи гомогенизатора высокого давления.

21. Способ по п.15, отличающийся тем, что после центрифугирования (этап з)) добавляют криопротектор.

22. Способ по п.21, отличающийся тем, что криопротектор выбирают из 1-50% глюкозы, 1-50% лактозы, 1-50% маннита или 1-50% трегалозы.

23. Способ по п.15, отличающийся тем, что водный раствор поверхностно-активного вещества имеет концентрацию 0,05-5%.



Pages:   || 2 |

Похожие работы:

«Олег Семенович Кулиненков Фармакологическая помощь спортсмену: коррекция факторов, лимитирующих спортивный результат Фармакологическая помощь спортсмену: коррекция факторов, лимитирующих спортивный результат: Советский спорт; Москва; 2007 ISBN 978-9718-0280-8 Аннотация Системный подход к факторам, ограничивающим работоспособность спортсмена, позволяет четко выстроить схему фармакологической поддержки его здоровья и значительно повысить спортивный результат. Предназначается спортивным врачам,...»

«RU 2 402 345 C2 (19) (11) (13) РОССИЙСКАЯ ФЕДЕРАЦИЯ (51) МПК A61K 36/48 (2006.01) A61K 8/97 (2006.01) A61Q 19/00 (2006.01) B01D 11/02 (2006.01) A61P 3/00 (2006.01) A61P 17/00 (2006.01) ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА ПО ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ, ПАТЕНТАМ И ТОВАРНЫМ ЗНАКАМ (12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ (21), (22) Заявка: 2008107117/15, 27.02.2008 (72) Автор(ы): Абдурахманов Эльдар Рустамович (UZ), (24) Дата начала отсчета срока действия патента: Сыров Владимир Николаевич (UZ) 27.02. (73)...»

«PЕТИНОИДЫ Альманах Выпуск 12 RETINOIDS Almanac Volume 12 ОТКРЫТИЕ ПАМЯТНИКА А.И. БАБУХИНУ В ОРЛЕ ФНПП “РЕТИНОИДЫ” Москва 2001 Альманах “РЕТИНОИДЫ” - это непериодическое тематическое издание, содержащее публикации об экспериментальных и клинических исследованиях ретиноидов отечественного производства. Альманах адресован врачам-дерматологам, специалистам, занимающимся изучением фармакологических и лечебных свойств витамина A и ретиноидов, а также аптечным работникам. Альманах финансирует и издает...»

«Вестник ГЕРОНТОЛОГИЧЕСКОГО ОБЩЕСТВА Российской Академии наук Информационный бюллетень № 1-2 (146- 147) январь-февраль 2010 г. В номере: Наши поздравления Отчеты региональных ПРЕЗИДИУМ отделений Научные встречи Предстоящие конференции ПРАВЛЕНИЯ ГЕРОНТОЛОГИЧЕСКОГО Книжная полка Диссертации по геронтологии и гериатрии О БЩЕСТВА при РАН 1-й номер Успехов геронтологии в переводе на английский язык Пpезидент: В.Н. АНИСИМОВ пpофессор, д.м.н., НАШИ ПОЗДРАВЛЕНИЯ НИИ онкологии им. Н.Н. Петpова, ПРЕМИИ...»

«007562 Область изобретения Данное изобретение относится к ацетамидному производному модафинилу. Модафинил (C15H15NO2S) представляет собой 2-(бензгидрилсульфинил)ацетамид, он также известен как 2дифенилметил)сульфинил]ацетамид. Предпосылки создания изобретения Было описано, что модафинил имеет ряд нейропсихофармакологических эффектов, характеризующихся наличием возбуждения с гиперфункцией и гиперкинезией; и отсутствием стереотипии (за исключением случаев применения высоких доз) и потенциальной...»

«009334 Настоящее изобретение относится к меченным радиоактивными изотопами производным хинолина, проявляющим антагонистическую активность по отношению к метаботропному глутаматному рецептору, в частности активность по отношению к mGlu1-рецептору, и к получению таких производных; изобретение, кроме того, относится к композициям, содержащим такие производные, а также к их применению для диагностики, в частности для маркировки и идентификации сайтов метаботропного глутаматного рецептора и для...»

«СТОМАТОЛОГИЧЕСКИЙ БИЗНЕС ЗДРАВООХРАНЕНИЕ, СФЕРА ОБСЛУЖИВАНИЯ, ИНСТРУМЕНТНОЕ ПРОИЗВОДСТВО, ФАРМАЦЕВТИКА. ПРОИЗВОДСТВО МЕДИЦИНСКИХ ПРЕПАРАТОВ, ТОРГОВЛЯ, МЕДИЦИНА ПРЕДПРИНИМАТЕЛЬСТВО СТОМАТОЛОГИЯ АГЕНТСТВО ДЕЛОВОЙ ИНФОРМАЦИИ МОНИТОР iCENTER.ru 3 (28) МАЙ 2009 Стоматологический бизнес Периодичность выхода: TOP NEWS МОНИТОР ЭКСПЕРТИЗА ежемесячно по Индексу цитируемости Учредитель ООО ГРОТЕК Генеральный директор Андрей Мирошкин Demi. Новое поколение полимеризаторов c. Издатель KaVo INTRAsurg – новые...»

«Боб Капелли при участии Джералда Р. Цисевски АСТАКСАНТИН Природный Астаксантин: король каротиноидов Изобилие Природного Астаксантина в микроводоросли гематококкус Москва НПО Источник долголетия 2008 УДК 615 ББК 53.69 К 20(амер) Bob Capelli with Gerald R. Cysewski Natural Astaxanthin: King of Carotenoids Капелли Боб, Цисевски Джералд Р. К 20 Природный Астаксантин: король каротиноидов / Пер. с англ. М.Ворсановой. — М.: НПО Источник долголетия, 2008. — 160 с. ISBN 978-5-7380-0276-2 Издание...»

«015514 B1 Евразийское (19) (11) (13) патентное ведомство ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОМУ ПАТЕНТУ (12) (51) Int. Cl. A61K 31/353 (2006.01) (45) Дата публикации и выдачи патента A61K 31/357 (2006.01) 2011.08.30 A61P 25/18 (2006.01) (21) A61P 25/24 (2006.01) Номер заявки (22) Дата подачи заявки 2006.12. ПРИМЕНЕНИЕ БЕНЗОКОНДЕНСИРОВАННЫХ ГЕТЕРОЦИКЛИЧЕСКИХ (54) СУЛЬФАМИДНЫХ ПРОИЗВОДНЫХ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ МАНИАКАЛЬНОГО СИНДРОМА И БИПОЛЯРНОГО РАССТРОЙСТВА (31) 60/751,493; 11/612,222 (56) MARYANOFF В.E. ET...»

«Учебно-методическое обеспечение для подготовки кадров по программам высшего профессионального образования для тематического направления ННС Нанобиотехнологии _ Учебно-методическое обеспечение для подготовки магистров по программам высшего профессионального образования направления подготовки Нанотехнология с профилем подготовки Нанобиотехнологии И.В. Спичак, Н.В. Автина УЧЕБНО-МЕТОДИЧЕСКИЙ КОМПЛЕКС ДЛЯ МАГИСТРОВ ПО ДИСЦИПЛИНЕ ОСНОВЫ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЙ ТЕХНОЛОГИИ УДК 339 ББК 52.82 С 72 С 72 Спичак,...»

«015463 B1 Евразийское (19) (11) (13) патентное ведомство ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОМУ ПАТЕНТУ (12) (51) Int. Cl. C07D 487/04 (2006.01) (45) Дата публикации и выдачи патента C07D 519/00 (2006.01) 2011.08.30 A61K 31/4985 (2006.01) (21) A61P 35/00 (2006.01) Номер заявки (22) Дата подачи заявки 2006.11. КОНДЕНСИРОВАННОЕ БИЦИКЛИЧЕСКОЕ СОЕДИНЕНИЕ - ИНГИБИТОР (54) mTOR, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ, ЕГО СОДЕРЖАЩАЯ, И СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ РАКА (31) 60/737,581; 60/854,247 (56) WO-A- WO-A- (32)...»

«СОДЕРЖАНИЕ ОБЩЕСТВЕННОЕ ЗДРАВООХРАНЕНИЕ О СОВЕРШЕНСТВОВАНИИ ПЛАНИРОВАНИЯ, МОНИТОРИНГА И ФИНАНСИРОВАНИЯ НАУЧНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ В ЗДРАВООХРАНЕНИИ В КАЗАХСТАНЕ: НА ПУТИ К РЕФОРМЕ Аканов А.А. НОВОЕ ОБЩЕСТВЕННОЕ ЗДРАВООХРАНЕНИЕ В КАЗАХСТАНЕ Аканов А.А., Кульжанов М.К., Камалиев М.А. ОСНОВНЫЕ НАПРАВЛЕНИЯ СТРАТЕГИИ И ТАКТИКИ РАЗВИТИЯ СИСТЕМЫ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ Алхамкызы Р., Камалиев М.А. О СОСТОЯНИИ И ПЕРСПЕКТИВАХ РАЗВИТИЯ ПОСЛЕВУЗОВСКОГО МЕДИЦИНСКОГО И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОГО ОБРАЗОВАНИЯ В РЕСПУБЛИКЕ КАЗАХСТАН...»

«RU 2 501 555 C2 (19) (11) (13) РОССИЙСКАЯ ФЕДЕРАЦИЯ (51) МПК A61K 31/03 (2006.01) A61K 31/085 (2006.01) A61K 31/192 (2006.01) A61P 19/06 (2006.01) ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА ПО ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ (12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ (21)(22) Заявка: 2012110592/15, 13.03.2009 (72) Автор(ы): О'НЕЙЛ Джеймс Деннен (US), (24) Дата начала отсчета срока действия патента: БАМАТ Майкл К. (US), 13.03.2009 ВОН БОРСТЕЛ Рейд В. (US), ШАРМА Шалини (US), Приоритет(ы): АРУДЧАНДРАН Рамачандран (US) (30)...»







 
© 2014 www.kniga.seluk.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Книги, пособия, учебники, издания, публикации»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.