WWW.KNIGA.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Книги, пособия, учебники, издания, публикации

 

017159 B1

Евразийское

(19) (11) (13)

патентное

ведомство

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОМУ ПАТЕНТУ

(12)

(51) Int. Cl. A61K 38/26 (2006.01) (45) Дата публикации и выдачи патента A61K 38/17 (2006.01) 2012.10.30 C07K 14/605 (2006.01) (21) Номер заявки 200970274 (22) Дата подачи заявки 2007.09.

ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ, СПОСОБНАЯ УВЕЛИЧИВАТЬ

(54)

АКТИВНОСТЬ GLP-1 У ЧЕЛОВЕКА, И СПОСОБЫ ЕЕ ПРИМЕНЕНИЯ

(56) US-B1- (31) 60/825,472; 60/868, (32) 2006.09.13; 2006.12. (33) US (43) 2009.08. (86) PCT/US2007/ (87) WO 2008/033888 2008.03. (71)(73) Заявитель и патентовладелец:

СМИТКЛАЙН БИЧАМ

КОРПОРЕЙШН (US) (72) Изобретатель:

Буш Марк А., Мэттьюз Джессика И., Уолкер Сьюзан Е. (US) B (74) Представитель:

Медведев В.Н. (RU) Настоящее изобретение относится к способам и фармацевтическим композициям, связанным (57) с введением гипогликемических средств и/или агонистов GLP-1, причем средние значения максимальной концентрации в плазме (Cmax) и/или площади под кривой (AUC) для гипогликемического средства увеличены и/или длительно сохраняются.

B Область техники Настоящее изобретение относится к способам и фармацевтическим композициям для введения гипогликемических средств с длительным действием и схемам лечениям с использованием соединений, обладающих активностью GLP-1, и/или агонистов GLP-1.

Предпосылки создания изобретения Гипогликемические средства можно использовать при лечении сахарного диабета как типа I, так и типа II для понижения концентрации глюкозы в крови. Для лечения сахарного диабета в качестве возможных терапевтических средств подразумевались инсулинотропные пептиды. Инсулинотропные пептиды включают, но без ограничения, гормоны инкретины, например желудочный ингибирующий пептид (GIP) и глюкагонподобный пептид-1 (GLP-1), а также их фрагменты, варианты и/или конъюгаты. Инсулинотропные пептиды также включают, например, экзендин 3 и экзендин 4. GLP-1 представляет собой гормон инкретин длиной 36 аминокислот, секретируемый L-клетками в кишечнике в ответ на проглатывание пищи. Показано, что GLP-1 стимулирует секрецию инсулина физиологическим и глюкозозависимым образом, снижает секрецию глюкагона, ингибирует опорожнение полости желудка, снижает аппетит и стимулирует пролиферацию -клеток. В не являющихся клиническими экспериментах GLP-1 активирует продолжающуюся компетенцию -клеток путем стимуляции транскрипции генов, важных для глюкозозависимой секреции инсулина, и активирования неогенеза -клеток (Meier et al. Biodrugs. 2003;

17(2): 93-102).

У здорового индивидуума GLP-1 играет важную роль, регулируя уровни глюкозы в крови после приема пищи путем стимуляции глюкозозависимой секреции инсулина поджелудочной железой, что приводит к увеличению абсорбции глюкозы на периферии. GLP-1 также подавляет секрецию глюкагона, что приводит к снижению продукции глюкозы печенью. Кроме того, GLP-1 задерживает опорожнение полости желудка и замедляет сокращение тонкой кишки, задерживая абсорбцию пищи.

У людей с сахарным диабетом типа II (T2DM) нормальное повышение GLP-1 после приема пищи отсутствует или снижено (Vilsboll T. et al., Diabetes 2001, 50: 609-613). Следовательно, одним из обоснований для введения экзогенного GLP-1, гормона инкретина или миметика GLP-1 является увеличение, замещение или дополнение эндогенного GLP-1 для увеличения связанной с приемом пищи секреции инсулина, снижения секреции глюкагона и/или замедления сокращения желудочно-кишечного тракта.

Встречающийся в природе GLP-1 имеет очень короткий период полувыведения (5 мин). Следовательно, в настоящее время не осуществимо экзогенное введение встречающегося в природе GLP-1 в качестве терапевтического лечения сахарного диабета. Коммерчески доступные миметики инкретинов, такие как экзенатид (Byetta), улучшают контроль гликемии путем снижения концентраций глюкозы натощак и после приема пищи при подкожном введении (5 мкг или 10 мкг BID) пациентам с T2DM.

Таким образом, существует неудовлетворенная потребность в способах введения гипогликемических средств, для которых средние значения площади под кривой (AUC) для гипогликемических средств являются длительно сохраняющимися или иначе являются улучшенными, тем самым требуя менее частых инъекций при сохранении терапевтической пользы.

Краткое описание чертежей Фиг. 1 - фармакокинетические профили SEQ ID NO: 1 у субъектов с сахарным диабетом типа II.

Средний (95%) график зависимости концентрации в плазме (нМ, ELISA) от времени (в часах);

фиг. 2 - концентрация SEQ ID NO: 1 - коробчатые диаграммы воздействий (AUC(0-)) по месту инъекции (живот, нога и рука) и дозе у субъектов с сахарным диабетом типа II;

фиг. 3 - SEQ ID NO: 1.

Краткое изложение сущности изобретения В одном варианте осуществления настоящего изобретения обеспечиваются способы увеличения активности GLP-1 у нуждающегося в этом человека, которые включают введение указанному человеку композиции, содержащей по меньшей мере один полипептид, обладающий активностью GLP-1, причем указанный полипептид обеспечивает максимальную концентрацию в плазме указанного полипептида, составляющую по меньшей мере приблизительно 0,6 нМ, и значение плошади под кривой для указанного полипептида, которое составляет по меньшей мере приблизительно 3,5 нМ день, в течение периода, составляющего одну неделю.





В другом варианте осуществления настоящего изобретения обеспечиваются способы увеличения активности GLP-1 у нуждающегося в этом человека, которые включают введение указанному человеку композиции, содержащей по меньшей мере один агонист GLP-1, причем указанный по меньшей мере один агонист GLP-1 обеспечивает максимальную концентрацию в плазме указанного по меньшей мере одного агониста GLP-1, составляющую по меньшей мере приблизительно 21,2 пМ, и значение площади под кривой для указанного по меньшей мере одного агониста GLP-1, которое составляет по меньшей мере приблизительно 149 пМ день, в течение периода, составляющего одну неделю.

Как здесь используется, термин агонист GLP-1 означает любое соединение или композицию, способное стимулировать и/или имеющее по меньшей мере одну активность GLP-1, включающее, но без его фрагмент, вариант и/или конъюгат.

Как здесь используется, термин гормон инкретин означает любой гормон, который увеличивает секрецию инсулина или иначе повышает уровень инсулина. Одним из примеров гормона инкретина является GLP-1. GLP-1 является инкретином, секретируемым L-клетками кишечника в ответ на проглатывание пищи. У здорового индивидуума GLP-1 играет важную роль, регулируя уровни глюкозы в крови после приема пищи путем стимуляции глюкозозависимой секреции инсулина поджелудочной железой, что приводит к увеличению абсорбции глюкозы на периферии. GLP-1 также подавляет секрецию глюкагона, что приводит к снижению продукции глюкозы печенью. Кроме того, GLP-1 замедляет время опорожнения полости желудка и замедляет сокращение тонкой кишки, задерживая абсорбцию пищи. GLP- активирует продолжающуюся компетенцию -клеток путем стимуляции транскрипции генов, причастных к глюкозозависимой секреции инсулина, и активирования неогенеза -клеток (Meier et al. Biodrugs.

2003; 17(2): 93-102).

Как здесь используется, термин активность GLP-1 означает одну или несколько активностей встречающегося в природе GLP-1 человека, включающих, но без ограничения, снижение глюкозы в крови и/или плазме, стимуляцию глюкозозависимой секреции инсулина или иначе повышение уровня инсулина, подавление секреции глюкагона, снижение фруктозамина, увеличение доставки и метаболизма глюкозы в головном мозге, задерживание опорожнения полости желудка и активирование компетенции и/или неогенеза -клеток. Любая из этих активностей и другая активность, связанная с активностью GLP-1, может быть вызвана непосредственно или опосредованно композицией, обладающей активностью GLP-1, или агонистом GLP-1. В качестве примера, композиция, обладающая активностью GLP-1, может непосредственно или опосредованно стимулировать глюкозозависимую продукцию инсулина, в то время как стимуляция продукции инсулина может непосредственно снижать уровни глюкозы в плазме у млекопитающего.

Как здесь используется, миметик инкретина представляет собой соединение, способное увеличивать секрецию инсулина или иначе повышать уровень инсулина. Миметик инкретина может быть способен стимулировать секрецию инсулина, увеличивать неогенез -клеток, ингибировать апоптоз -клеток, ингибировать секрецию глюкагона, задерживать опорожнение полости желудка и вызывать насыщение у млекопитающего. Миметик инкретина может включать, но без ограничения, любой полипептид, обладающий активностью GLP-1, включающий, но без ограничения, экзендин 3 и экзендин 4, в том числе любые их фрагменты, и/или варианты, и/или конъюгаты.

Как здесь используется, термин гипогликемическое средство означает любое соединение или композицию, содержащую соединение, способное снижать глюкозу в крови.

Гипогликемическое средство может включать, но без ограничения, любой агонист GLP-1, в том числе гормоны инкретины или миметики инкретинов, GLP-1 и/или его фрагмент, вариант и/или конъюгат. Другие гипогликемические средства включают, но без ограничения, лекарственные средства, которые увеличивают секрецию инсулина (например, сульфонилмочевины (SU) и меглитиниды), ингибируют разрушение GLP-1 (например, ингибиторы DPP-IV), увеличивают коэффициент использования глюкозы (например, глитазоны, тиазолидиндионы (TZD) и/или агонисты pPAR), снижают продукцию глюкозы печенью (например, метформин) или задерживают абсорбцию глюкозы (например, ингибиторы глюкозидазы). Примеры сульфонилмочевин включают, но без ограничения, ацетогексамин, хлорпропамид, толазамид, глипизид, гликлазид, глибенкламид (глибурид), гликвидон и глимепирид. Примеры глитазонов включают, но без ограничения, росиглитазон и пиоглитазон.

Полинуклеотид(ы), как правило, относятся к любому полирибонуклеотиду или полидезоксирибонуклеотиду, который может быть не модифицированной РНК или ДНК или модифицированной РНК или ДНК. Полинуклеотид(ы) включает, без ограничения, одно- и двухцепочечную ДНК, ДНК, которая является смесью одно- и двухцепочечных участков или одно-, двух- и трехцепочечных участков, одно- и двухцепочечную РНК и РНК, которая является смесью одно- и двухцепочечных участков, гибридные молекулы, включающие ДНК и РНК, которые могут быть одноцепочечными или типичнее двухцепочечными, или трехцепочечными участками, или смесью одно- и двухцепочечных участков. Кроме того, полинуклеотид, как здесь используется, следует понимать как трехцепочечный участок, включающий РНК или ДНК или как РНК, так и ДНК. Цепи в таких участках могут быть из одной и той же молекулы или из различных молекул. Участки могут включать не больше одной или нескольких молекул, но типичнее они включают в себя только участок некоторых из молекул. Одной из молекул трехспирального участка часто является олигонуклеотид. Используемый здесь термин полинуклеотид(ы) также включает описанные выше ДНК или РНК, которые включают одно или несколько модифицированных оснований. Таким образом, ДНК или РНК с остовами, модифицированными для стабильности или по другим причинам, являются полинуклеотидом(ами), как этот термин здесь предусмотрен. Более того, ДНК или РНК, включающие необычные основания, такие как инозин, или модифицированные основания, такие как тритилированные основания, для указания как раз двух примеров, являются полинуклеотидами, как этот термин здесь используется. Понятно, что было осуществлено большое множество модификаций ДНК и -2РНК, которые служат множеству полезных целей, известных квалифицированным в данной области техники специалистам. Термином полинуклеотид(ы), как он здесь используется, охватываются такие химически, ферментативно или метаболически модифицированные формы полинуклеотидов, а также химические формы ДНК и РНК, характерные для вирусов и клеток, включающих, например, простые и сложные клетки. Термином полинуклеотид(ы) также охватываются короткие полинуклеотиды, часто упоминаемые как олигонуклеотид(ы).

Полипептид относится к любому пептиду или белку, содержащему две или более аминокислот, соединенных друг с другом пептидными связями или модифицированными пептидными связями, т.е. пептидным изостерам. Полипептид относится как к коротким цепям, обычно упоминаемым как пептиды, олигопептиды или олигомеры, так и к более длинным цепям, обычно упоминаемым как белки. Полипептиды могут содержать аминокислоты, отличные от 20 кодируемых генами аминокислот. Полипептиды включают аминокислотные последовательности, модифицированные или с помощью природных процессов, таких как посттрансляционный процессинг, или с помощью методов химических модификаций, которые хорошо известны в данной области техники. Такие модификации вполне описаны в текстах, служащих в качестве основы для обсуждения, и более подробных монограммах, а также в объемистой научной литературе. Модификации могут встречаться где угодно в полипептиде, в том числе пептидном остове, боковых цепях аминокислот или амино- или карбоксильных концах. Понятно, что один и тот тип модификации может присутствовать в одинаковых или варьирующих степенях в нескольких сайтах данного полипептида. Также данный полипептид может содержать множество типов модификаций. Полипептиды могут быть разветвленными в результате убиквитирования, и они могут быть циклическими, с разветвлением или без него. Циклические, разветвленные и разветвленные циклические полипептиды могут быть следствием посттрансляционных природных процессов или могут быть получены синтетическими способами. Модификации включают ацетилирование, ацилирование, ADP-рибозилирование, аминирование, ковалентное присоединение флавина, ковалентное присоединение составляющей в виде гема, ковалентное присоединение нуклеотида или производного нуклеотида, ковалентное присоединение липида или липидного производного, ковалентное присоединение фосфотидилинозита, образование поперечных связей, циклизацию, образование дисульфидных связей, деметилирование, образование ковалентных поперечных связей, образование цистеина, образование пироглутамата, формилирование, гамма-карбоксилирование, гликозилирование, образование GPI-привязки, гидроксилирование, йодирование, метилирование, миристиолирование, окисление, протеолитический процессинг, фосфорилирование, пренилирование, рацемизацию, котрансляционное включение селена, сульфатирование, опосредуемое транспортной РНК добавление аминокислот к белкам, такое как аргинилирование и убиквитирование.

См., например, PROTEINS - STRUCTURE AND MOLECULAR PROPERTIES, 2nd Ed., T.E. Creighton, W.H. Freeman and Company, New York, 1993 и Wold, F., Posttranslational Protein Modifications: Perspectives and Prospects, pgs. 1-12 in POSTTRANSLATIONAL COVALENT MODIFICATIONS OF PROTEINS, B.C.

Johnson, Ed., Academic Press, New York, 1983; Seifter et al., "Analysis for protein modifications and nonprotein cofactors", Meth. Enzymol. (1990) 182: 626-646 и Rattan et al., "Protein Synthesis: Posttranslational Modifications and Aging", Ann NY Acad. Sci. (1992) 663: 48-62.

Вариант, как этот термин здесь используется, представляет собой полинуклеотид или полипептид, который отличается от исходного полинуклеотида или полипептида, соответственно, но сохраняет существенные свойства. Типичный вариант полинуклеотида отличается по нуклеотидной последовательности от другого, исходного полинуклеотида. Изменения нуклеотидной последовательности варианта могут изменять или могут не изменять аминокислотную последовательность полипептида, кодируемого исходным полинуклеотидом. Изменения нуклеотидов могут приводить к заменам, добавлениям, делециям аминокислот, слияниям и укорочениям полипептида, кодируемого исходной последовательностью, как обсуждается ниже. Типичный вариант полипептида отличается по аминокислотной последовательности от другого, исходного полипептида. Как правило, различия ограничены, так что последовательности исходного полипептида и варианта весьма схожи в общем и идентичны во многих участках. Вариант и исходный полипептид могут отличаться по аминокислотной последовательности одной или несколькими заменами, добавлениями, делециями в любой комбинации. Замещенный или введенный остаток аминокислоты может быть или может не быть остатком, кодируемым генетическим кодом. Вариант полинуклеотида или полипептида может быть встречающимся в природе, таким как аллельный вариант, или он может быть вариантом, для которого не известно, чтобы он встречался в природе. Не встречающиеся в природе варианты полинуклеотидов и полипептидов могут быть получены с помощью мутационных методов или с помощью прямого синтеза. Варианты могут также включать, но без ограничения, полипептиды или их фрагменты, имеющие химическую модификацию одной или нескольких боковых групп их аминокислот. Химическая модификация включает, но без ограничения, добавление химических составляющих, создание новых связей и удаление химических составляющих Модификации при боковых группах аминокислот включают, но без ограничения, ацилирование -аминогрупп лизинов, Nалкилирование аргинина, гистидина или лизина, алкилирование карбоксильных групп глютаминовой или аспарагиновой кислоты и деамидирование глютамина или аспарагина. Модификации концевой аминогруппы включают, но без ограничения, удаление аминогруппы, N-модификации группой низшего алкила, двумя группами низших алкилов и ацильной группой. Модификации концевой карбоксильной группы включают, но без ограничения, приводящие к образованию амида, низшего алкиламида, диалкиламида и низшего алкилового эфира модификации. Кроме того, одна или несколько боковых групп или концевых групп могут быть защищены защитными группами, известными занимающимся белками химикам со средним уровнем компетентности.

Как здесь используется, фрагмент, когда используется со ссылкой на полипептид, представляет собой полипептид, имеющий аминокислотную последовательность, которая является той же самой, что и часть, но не вся аминокислотная последовательность полного, встречающегося в природе полипептида.

Фрагменты могут быть свободностоящими или быть включены в более большой полипептид, в котором они образуют часть или участок в виде одного непрерывного участка в одном более большом полипептиде. В качестве примера, фрагмент встречающейся в природе GLP-1 будет включать от 7 до 36 аминокислот от встречающихся в природе аминокислот 1-36. Кроме того, фрагменты полипептида могут также быть вариантами встречающейся в природе частичной последовательности. Например, фрагмент GLP-1, включающий аминокислоты 7-30 встречающегося в природе GLP-1, может также быть вариантом, имеющим замены аминокислот в пределах его частичной последовательности.

Как здесь используется, термин конъюгат или конъюгированный относится к двум молекулам, которые связаны друг с другом. Например, первый полипептид может быть ковалентно или нековалентно связан со вторым полипептидом. Первый полипептид может быть ковалентно связан с помощью химического линкера или может быть генетически связан со вторым полипептидом, причем первый и второй полипептид делят общий полипептидный остов.

Как здесь используется, термин последовательно ориентированные относится к двум или более полипептидам, которые граничат друг с другом в качестве части одной и той молекулы. Они могут быть связаны или ковалентно, или нековалентно. Два или более последовательно ориентированных полипептидов могут образовывать часть одного и того же полипептидного остова. Последовательно ориентированные полипептиды могут иметь прямую или обратную ориентацию и/или могут быть отделены другими аминокислотными последовательностями.

Как здесь используется, термин снижать или снижение глюкозы в крови или плазме относится к уменьшению количества глюкозы в крови, измеряемого в крови пациента после введения гипогликемического средства. Снижения глюкозы в крови или плазме можно определить и оценить для каждого индивидуума или в виде среднего изменения для группы субъектов. Кроме того, средние изменения глюкозы в крови или плазме можно определить и оценить для группы подвергнутых лечению субъектов в виде среднего изменения от базовой линии и/или в виде среднего изменения по сравнению со средним изменением глюкозы в крови или плазме в группе субъектов, которым вводили плацебо.

Как здесь используется, термин увеличение активности GLP-1 относится к увеличению любой и всех из активностей, связанных со встречающимся в природе GLP-1. В качестве примера, увеличение активности GLP-1 можно определить после введения по меньшей мере одного полипептида, обладающего активностью GLP-1, субъекту и сравнить с активностью GLP-1 у того же субъекта до введения полипептида, обладающего активностью GLP-1, или в сравнении со вторым субъектом, которому вводится плацебо.

Как здесь используется, термин болезни, связанные с повышенной глюкозой в крови, относится, но без ограничения, к сахарному диабету типа I и типа II, непереносимости глюкозы, гипергликемии и болезни Альцгеймера.

Как здесь используется, термин совместное введение относится к введению двух или более соединений одному и тому же пациенту. Совместное введение таких соединений может быть одновременным или приблизительно в одно и то же время (например, в пределах одного и того же часа), или оно может быть в пределах нескольких часов или дней друг от друга. Например, первое соединение может вводиться один раз в неделю, в то время как второе соединение совместно вводится ежедневно.

Как здесь используется, максимальная концентрация в плазме или Cmax означает наивысшую измеряемую концентрацию вещества (например, полипептида, обладающего активностью GLP-1, или агониста GLP-1) в плазме млекопитающего после введения вещества млекопитающему.

Как здесь используется, площадь под кривой или AUC представляет собой площадь под кривой на графике зависимости концентрации вещества в плазме от времени. AUC может быть мерой интеграла мгновенных концентраций, взятого в интервале времени, и имеет единицы масса время/объем, которые можно также выразить в виде молярная концентрация время, например нМ день. AUC обычно рассчитывают с помощью метода трапеций (например, линейного, линейного log). AUC обычно устанавливают для интервала времени от нуля до бесконечности, и указываются другие интервалы времени (например, AUC (t1, t2), где t1 и t2 являются временем начала и конца для интервала). Таким образом, AUC0-24ч, как здесь используется, относится к AUC в течение 24-часового периода, a AUC0-4ч относится к AUC в течение 4-часового периода.

Как здесь используется, средневзвешенная AUC представляет собой AUC, поделенную на интервал времени, взятый для расчета AUC. Например, средневзвешенная AUC0-24ч будет представлять AUC0-24ч, поделенную на 24 ч.

Как здесь используется, доверительный интервал или CI представляет собой интервал, в котором измерение или испытание соответствует установленной вероятности p, где p относится к 90 или 95% CI и рассчитывается или для среднего арифметического, среднего геометрического, или, по меньшей мере, среднего наименьших квадратов. Как здесь используется, среднее геометрическое представляет собой среднее обратно преобразованных через возведение в степень значений в виде натуральных логарифмов, а среднее наименьших квадратов может также быть или может не быть средним геометрическим, но происходить из модели дисперсионного анализа (ANOVA), в которой используются определенные эффекты.

Как здесь используется, коэффициент вариации (CV) является мерой дисперсии, и он определяется как отношение стандартного отклонения к среднему значению. Его сообщают в виде процента (%) путем умножения вышеуказанного расчета на 100% (%CV).

Как здесь используется, Tmax относится к времени, определяемому для достижения максимальной концентрации вещества в плазме млекопитающего после введения этого вещества млекопитающему.

Как здесь используется, период полувыведения из сыворотки или плазмы относится к времени, требуемому для подвергания метаболизму или удаления из сыворотки или плазмы млекопитающего с помощью нормальных биологических процессов половины количества вещества, введенного млекопитающему.

В одном аспекте настоящего изобретения обеспечиваются способы увеличения активности GLP-1 у человека, которые включают введение указанному человеку композиции, содержащей по меньшей мере один полипептид, обладающий активностью GLP-1, причем указанный полипептид обеспечивает максимальную концентрацию в плазме указанного полипептида, составляющую по меньшей мере приблизительно 0,6 нМ, и значение площади под кривой для указанного полипептида, которое составляет по меньшей мере приблизительно 3,5 нМ день, в течение периода, составляющего одну неделю.

Как понятно в данной области техники, различные способы можно использовать для сбора, определения и оценки фармакокинетических данных, таких как концентрация активного компонента в крови, плазме и/или другой ткани. Как также понятно в данной области техники, различные способы можно использовать для сбора, определения и оценки различных фармакодинамических данных, таких как, но без ограничения, уровни глюкозы, инсулина, С-пептида, глюкагонов и других биомаркеров в крови и/или плазме, и/или другой ткани. В соответствии с настоящим изобретением по меньшей мере одним полипептидом, обладающим активностью GLP-1, может быть агонист GLP-1. Агонисты GLP-1 можно выбрать из группы, состоящей из гормона инкретина и/или его фрагмента, варианта и/или конъюгата и миметика инкретина и/или его фрагмента, варианта и/или конъюгата. В группу гормонов инкретинов включены GLP- человека и/или его фрагменты, варианты и/или конъюгаты.

Вариант осуществления настоящего изобретения включает полипептид, который может быть, но без ограничения, GLP-1 или его фрагментом, вариантом и/или конъюгатом. Фрагменты, и/или варианты, и/или конъюгаты GLP-1 настоящего изобретения обычно обладают по меньшей мере одной активностью GLP-1. GLP-1 или его фрагмент, вариант и/или конъюгат могут включать сывороточный альбумин человека. Сывороточный альбумин человека может быть конъюгирован с GLP-1 или его фрагментом и/или вариантом. Гормон инкретин (такой как GLP-1) и/или миметик инкретина (такой как экзендин 3 и экзендин 4) и/или их фрагменты и/или варианты могут быть конъюгированы с сывороточным альбумином человека благодаря химическому линкеру до инъекции или могут быть химически связаны со встречающимся в природе сывороточным альбумином человека in vivo (см., например, патенты США №№ 6593295 и 6329336, полностью включенные сюда посредством ссылки). В альтернативном случае сывороточный альбумин человека можно генетически слить с GLP-1, и/или его фрагментом, и/или вариантом, или другим агонистом GLP-1, таким как экзендин 3 или экзендин 4 и/или их фрагменты и/или варианты.

Примеры GLP-1 и его фрагментов и/или вариантов, генетически слитых с сывороточным альбумином человека, предоставлены в следующих PCT-заявках: WO 2003/060071, WO 2003/59934, WO 2005/003296, WO 2005/077042 (полностью включенных сюда посредством ссылки).

Полипептиды, обладающие активностью GLP-1, могут включать по меньшей мере один фрагмент и/или вариант GLP-1 человека. Два встречающихся в природе фрагмента GLP-1 человека представлены в SEQ ID NO: 2.

(в дальнейшем обозначаемый GLP-1(7-36)). Фрагменты GLP-1 могут включать, но без ограничения, молекулы GLP-1, включающие аминокислоты 7-36 GLP-1 человека (GLP-1(7-36)), или альтернативно состоящие их этих аминокислот. Варианты GLP-1 или их фрагменты могут включать, но без ограничения, одну, две, три, четыре, пять или более аминокислотных замен в GLP-1 дикого типа или во встречающихся в природе фрагментах GLP-1, показанных в SEQ ID NO: 2. Варианты GLP-1 или фрагменты GLP-1 могут включать, но без ограничения, замены остатка аланина, аналогичного аланину 8 GLP-1 дикого типа, при этом такой аланин мутируют в глицин (в дальнейшем обозначаемый A8G) (см., например, мутанты, раскрытые в патенте США № 5545618, полностью включенном сюда посредством ссылки).

В некоторых аспектах по меньшей мере один фрагмент и вариант GLP-1 включает GLP-1(7-36) (A8G) ) и генетически слит с сывороточным альбумином человека. В дальнейшем варианте осуществления полипептиды настоящего изобретения включают одну, две, три, четыре, пять или более последовательно ориентированных молекул GLP-1 и/или его фрагментов и/или вариантов, слитых с N- или Cконцом сывороточного альбумина человека или его варианта. В других вариантах осуществления имеются такие полипептиды A8G, слитые с N- или C-концом альбумина или его варианта. Пример двух последовательно ориентированных фрагментов и/или вариантов GLP-1(7-36)(A8G)), слитых с N-концом сывороточного альбумина человека, включает SEQ ID NO: 1, которая представлена на фиг. 3. В другом аспекте по меньшей мере один фрагмент и вариант GLP-1 включает по меньшей мере два GLP-1(7A8G)), последовательно и генетически слитых с сывороточным альбумином человека. По меньшей мере два GLP-1(7-36)(A8G)) могут быть генетически слиты с N-концом сывороточного альбумина человека.

По меньшей мере один полипептид, обладающий активностью GLP-1, может включать SEQ ID NO: 1.

Варианты GLP-1(7-37) можно обозначить, например, в виде Glu22-GLP(7-37)OH, что обозначает вариант GLP-1, в котором глицин, обнаруживаемый в норме в положенли 22 GLP-1(7-37)OH, заменен глютаминовой кислотой; Val-Glu-GLP(7-37)OH обозначает соединение GLP-1, в котором аланин, обнаруживаемый в норме в положении 8, и глицин, обнаруживаемый в норме в положении 22 GLP-1(7-37)OH, замены валином и глютаминовой кислотой соответственно. Примеры вариантов GLP-1 включают, но без ограничения, -6Варианты GLP-1 могут также включать, но без ограничения, GLP-1 или фрагменты GLP-1, имеющие химическую модификацию одной или нескольких боковых групп их аминокислот. Химическая модификация включает, но без ограничения, добавление химических составляющих, создание новых связей и удаление химических составляющих. Модификации боковых групп аминокислот включают, но без ограничения, ацилирование -аминогрупп лизинов, N-алкилирование аргинина, гистидина или лизина, алкилирование карбоксильных групп глютаминовой или аспарагиновой кислоты и деамидирование глютамина или аспарагина. Модификации концевой аминогруппы включают, но без ограничения, удаление аминогруппы, N-модификации группой низшего алкила, двумя группами низших алкилов и ацильной группой. Модификации концевой карбоксильной группы включают, но без ограничения, приводящие к образованию амида, низшего алкиламида, диалкиламида и низшего алкилового эфира модификации.

Кроме того, одна или несколько боковых групп или концевых групп могут быть защищены защитными группами, известными занимающимся белками химикам со средним уровнем компетентности.

Фрагменты или варианты GLP-1 могут также включать полипептиды, в которых одна или несколько аминокислот добавлены к N-концу и/или C-концу GLP-1(7-37)OH указанного фрагмента или варианта. Аминокислоты в GLP-1, к N-концу или C-концу которого добавлены аминокислоты, обозначают тем же числом, что и соответствующую аминокислоту в GLP-1(7-37)OH. Например, N-концевая аминокислота соединения GLP-1, полученного добавлением двух аминокислот к N-концу GLP-1(7-37)OH, находится в положении 5; а C-концевая аминокислота соединения GLP-1, полученного добавлением одной аминокислоты к C-концу GLP-1(7-37)OH, находится в положении 38. Таким образом, положение 12 занимает фенилаланин, а положение 22 занимает глицин в обоих этих соединениях GLP-1, как и в GLP-1(7-37)OH.

Аминокислоты 1-6 GLP-1 с аминокислотами, добавленными к N-концу, могут быть одинаковыми с аминокислотой в соответствующем положении GLP-1(1-37)OH или быть консервативной заменой аминокислоты в соответствующем положении GLP-1(1-37)OH. Аминокислоты 38-45 GLP-1 с аминокислотами, добавленными к C-концу, могут быть одинаковыми с аминокислотой в соответствующем положении -7глюкагона или экзендина 4 или быть консервативной заменой аминокислоты в соответствующем положении глюкагона или экзендина 4.

В другом аспекте настоящего изобретения композицию, содержащую по меньшей мере один полипептид, обладающий активностью GLP-1, вводят человеку от одного раза в день до одного раза в месяц и могут вводить один раз в день, один раз каждые два дня, один раз каждые три дня, один раз каждые семь дней, один раз каждые четырнадцать дней, один раз каждые четыре недели и/или один раз в месяц. В другом аспекте человеку вводят первую дозу и вторую дозу композиции, содержащей по меньшей мере один полипептид, обладающий активностью GLP-1. Указанные первая и вторая дозы могут быть одинаковыми или могут быть различными. Каждая доза по меньшей мере одного полипептида, обладающего активностью GLP-1, может включать от приблизительно 0,25 мкг до приблизительно 1000 мг указанного по меньшей мере одного полипептида, обладающего активностью GLP-1. Дозы могут включать, но без ограничения, 0,25 мкг, 0,25, 1, 3, 6, 16, 24, 48, 60, 80, 104, 200, 400, 800 мг вплоть до приблизительно мг указанного по меньшей мере одного полипептида, обладающего активностью GLP-1.

В другом аспекте настоящего изобретения композиция, содержащая по меньшей мере один полипептид, обладающий активностью GLP-1, обеспечивает максимальную концентрацию в плазме, составляющую по меньшей мере от приблизительно 0,6 до приблизительно 319 нМ полипептида, обладающего активностью GLP-1, и значение площади под кривой, составляющее по меньшей мере от приблизительно 3,5 до приблизительно 193,6 нМ день, в течение периода, составляющего одну неделю, для полипептида, обладающего активностью GLP-1. В некоторых случаях период полувыведения из сыворотки полипептида, обладающего активностью GLP-1, составляет от приблизительно 4 до приблизительно 7 дней. В другом аспекте значение Tmax полипептида, обладающего активностью GLP-1, составляет от приблизительно 1 дня до приблизительно 5 дней. В некоторых случаях композиция, содержащая по меньшей мере один полипептид, обладающий активностью GLP-1, обеспечивает максимальную концентрацию в плазме, составляющую по меньшей мере от приблизительно 8 до приблизительно 54 нМ, указанного по меньшей мере одного полипептида, обладающего активностью GLP-1, и значение AUC (неделя 1), составляющее по меньшей мере от приблизительно 29 нМ день до приблизительно 245 нМ день, в течение периода, составляющего одну неделю, для указанного по меньшей мере одного полипептида, обладающего активностью GLP-1. В другом аспекте композиция, содержащая указанный по меньшей мере один полипептид, обладающий активностью GLP-1, обеспечивает максимальную концентрацию в плазме, составляющую по меньшей мере от приблизительно 8 до приблизительно 54 нМ указанного по меньшей мере одного полипептида, обладающего активностью GLP-1, и значение AUC (0-) после однократной дозы, составляющее по меньшей мере от приблизительно 99 до приблизительно 637 нМ день, после однократной дозы указанного по меньшей мере одного полипептида, обладающего активностью GLP-1.

Любой человек, которому вводится композиция, содержащая по меньшей мере один полипептид, обладающий активностью GLP-1, в соответствии с настоящим изобретением может иметь гипергликемию, непереносимость глюкозы и/или сахарный диабет, который может быть T2DM. Также обеспечиваются способы, в которых указанный по меньшей мере один полипептид, обладающий активностью GLPснижает глюкозу в плазме у указанного человека, причем средневзвешенное значение AUC0-24ч для глюкозы в плазме значительно уменьшено в течение периода времени, составляющего приблизительно одну неделю, по сравнению с плацебо после введения указанной композиции, содержащей указанный по меньшей мере один полипептид, обладающий активностью GLP-1, в популяционной группе людей с T2DM. Средневзвешенная AUC0-24ч для глюкозы в плазме, которую можно определить в виде изменения от базовой линии, по сравнению с изменением у субъектов, которым вводили плацебо, может быть уменьшена на от приблизительно 20 мг/дл с 95% доверительным интервалом (-32,4, -7,8) до по меньшей мере приблизительно 49 мг/дл с 95% доверительным интервалом (-76,6, -21,4) или более в течение курса, составляющего по меньшей мере одну неделю после введения по меньшей мере одной дозы указанной композиции, содержащей по меньшей мере один полипептид, обладающий активностью GLP-1, в популяционной группе людей с T2DM. Снижение глюкозы в плазме может зависеть от дозы. Кроме того, указанный по меньшей мере один полипептид, обладающий активностью GLP-1, снижает глюкозу в плазме у указанного человека, причем глюкоза в плазме натощак может быть значительно снижена в течение периода времени, составляющего приблизительно одну неделю после введения указанной композиции, содержащей по меньшей мере один полипептид, обладающий активностью GLP-1, в популяционной группе людей с T2DM. Среднее значение глюкозы в плазме натощак может быть уменьшено в популяционной группе людей с T2DM на от приблизительно 7 мг/дл с 95% доверительным интервалом (-25,9, +11,2) до приблизительно 50,7 мг/дл с 95% доверительным интервалом (-75,4, -26,0) или более при определении в виде изменения от базовой линии по сравнению с плацебо. Среднее значение глюкозы в плазме натощак может быть уменьшено на от приблизительно 4 мг/дл с 95% доверительным интервалом (-16,5, +8,2) до приблизительно 35 мг/дл с 95% доверительным интервалом (-54,1, -15,6) или более при определении в виде изменения от базовой линии. Кроме того, глюкоза в плазме после приема пищи (средняя AUC0-4ч) может быть снижена на от приблизительно 6 мг/дл с 95% доверительным интервалом сравнению с базовой линией в течение курса, составляющего по меньшей мере одну неделю после введения по меньшей мере одной дозы указанной композиции, содержащей по меньшей мере один полипептид, обладающий активностью GLP-1, в популяционной группе людей с T2DM. Также обеспечиваются способы, в которых указанный полипептид, обладающий активностью GLP-1, снижает фруктозамин в плазме у указанного человека, поскольку изменение от базовой линии по сравнению с плацебо у указанного человека уменьшено по меньшей мере на приблизительно 34 мкМ/л в течение курса, составляющего по меньшей мере две недели после введения по меньшей мере одной дозы указанной композиции, содержащей указанный по меньшей мере один полупептид, обладающий активностью GLP-1. Полипептиды настоящего изобретения, обладающие активностью GLP-1, можно вводить подкожно в ногу, руку или живот указанного человека.

Здесь также обеспечиваются применения по меньшей мере одного полипептида, обладающего активностью GLP-1, для производства лекарственного средства для лечения заболеваний, связанных с повышенной глюкозой в крови, включающих, но без ограничения, сахарный диабет типа II, причем указанный полипептид готовят для введения так, чтобы он обеспечивал максимальную концентрацию в плазме указанного полипептида, составляющую по меньшей мере приблизительно 0,6 нМ, и значение площади под кривой для указанного полипептида, которое составляет по меньшей мере приблизительно 3,5 нМ день, в течение периода, составляющего одну неделю.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения обеспечиваются способы увеличения активности GLP-1 у человека, которые включают введение указанному человеку композиции, содержащей по меньшей мере один агонист GLP-1, причем указанный по меньшей мере один агонист GLP- обеспечивает максимальную концентрацию в плазме указанного по меньшей мере одного агониста GLPсоставляющую по меньшей мере от приблизительно 21,2 до приблизительно 51,6 пМ или более, и значение площади под кривой для указанного по меньшей мере одного агониста GLP-1, которое составляет по меньшей мере от приблизительно 149 до приблизительно 361 пМ день, в течение периода, составляющего одну неделю.

В одном аспекте агонист GLP-1 обеспечивает максимальную концентрацию в плазме указанного по меньшей мере одного агониста GLP-1, составляющую по меньшей мере приблизительно 1,4 нМ, и значение площади под кривой для указанного по меньшей мере одного агониста GLP-1, которое составляет по меньшей мере приблизительно 8 нМ день, в течение периода, составляющего одну неделю. Агонист GLP-1 выбирают из группы, состоящей из гормона инкретина и/или его фрагмента, варианта и/или конъюгата и миметика инкретина и/или его фрагмента, варианта и/или конъюгата. В другом аспекте период полувыведения из сыворотки по меньшей мере одного агониста GLP-1 составляет от приблизительно 4 до приблизительно 7 дней. Значение Tmax указанного по меньшей мере одного агониста GLP-1 составляет от приблизительно 1 дня до приблизительно 5 дней.

В одном аспекте настоящего изобретения человек, подвергаемый лечению по меньшей мере одним агонистом GLP-1, может иметь гипергликемию и/или сахарный диабет. Человек может иметь T2DM.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения обеспечиваются способы, в которых указанная композиция, содержащая указанный агонист GLP-1, снижает глюкозу в плазме у указанного человека, причем средневзвешенное значение AUC0-24ч для глюкозы в плазме у указанного человека клинически и статистически значительно уменьшено в течение периода времени, составляющего приблизительно одну неделю после введения указанной композиции, содержащей указанный по меньшей мере один агонист GLP-1. Средневзвешенное значение AUC0-24ч для глюкозы в плазме, которое можно определить в виде изменения от базовой линии, по сравнению с плацебо у указанного человека может быть уменьшено по меньшей мере на приблизительно 5, 10, 15 и/или 20 мг/дл в течение курса, составляющего по меньшей мере одну неделю после введения по меньшей мере одной дозы указанной композиции, содержащей указанный по меньшей мере один агонист GLP-1. В других аспектах указанная композиция, содержащая указанный агонист GLP-1, снижает глюкозу в плазме у указанного человека, причем глюкоза в плазме натощак у указанного человека клинически и статистически значительно снижена в течение периода времени, составляющего приблизительно одну неделю после введения указанной композиции, содержащей указанный по меньшей мере один агонист GLP-1. В другом аспекте обеспечиваются способы, в которых указанная композиция, содержащая указанный агонист GLP-1, снижает глюкозу в плазме у указанного человека, причем глюкоза в плазме после приема пищи снижается после введения по меньшей мере одной дозы указанной композиции, содержащей указанный по меньшей мере один агонист GLP-1.

В другом аспекте настоящего изобретения композицию, содержащую агонист GLP-1, вводят один раз каждые семь дней. В альтернативном случае композицию, содержащую агонист GLP-1, можно вводить один раз в день, один раз каждые два дня, один раз каждые три дня, один раз каждые две недели, один раз каждые четыре недели и/или один раз в месяц. Агонист GLP-1 можно вводить несколькими путями, известными в данной области техники, включающими, но без ограничения, подкожную инъекцию, внутримышечную инъекцию, внутривенную инъекцию, в слизистую оболочку, перорально и/или с помощью ингаляции. В другом аспекте настоящего изобретения композиция, содержащая агонист GLP-1, рецептора, активируемого при пролиферации пероксисом, (PPAR), тиазолидиндиона (например, глитазонов), метформина, инсулина и сульфонилмочевины. В другом аспекте обеспечиваются способы, включающие стадию совместного введения по меньшей мере одного агониста GLP-1 с одним или несколькими соединениями, выбираемыми из группы, состоящей из лиганда рецептора, активируемого при пролиферации пероксисом, (PPAR), тиазолидиндиона, ингибиторов DPP-IV, метформина, инсулина и сульфонилмочевины. Композиция, содержащая по меньшей мере один агонист GLP-1, может содержать одно или несколько из этих соединений помимо по меньшей мере одного полипептида, обладающего активностью GLP-1. Кроме того, обеспечиваются способы снижения уровней глюкозы в крови у нуждающегося в этом человека, которые включают введение указанному человеку композиции, содержащей по меньшей мере один агонист GLP-1, причем указанный человек соблюдает диету для контролирования глюкозы.

Настоящим изобретением также обеспечивается применение по меньшей мере одного агониста GLP-1 для производства лекарственного средства для лечения заболеваний, связанных с повышенной глюкозой в крови, включающих, но без ограничения, сахарный диабет типа II, причем указанный по меньшей мере один агонист GLP-1 готовят для введения так, чтобы он обеспечивал максимальную концентрацию в плазме указанного по меньшей мере одного агониста GLP-1, составляющую по меньшей мере приблизительно 21,2 пМ, и значение площади под кривой для указанного по меньшей мере одного агониста GLP-1, которое составляет по меньшей мере приблизительно 149 пМ день, в течение периода, составляющего одну неделю, Настоящим изобретением обеспечиваются способы лечения заболеваний, связанных с повышенной глюкозой в крови, включающих, но без ограничения, сахарный диабет типа II, используя GLP-1 и обладающие активностью GLP-1 полипептиды, описанные здесь. Также обеспечивается применение агониста GLP-1 и обладающих активностью GLP-1 полипептидов для производства лекарственного средства, которое готовят для введения в каждом из способов лечения, описанных здесь.

Также здесь обеспечиваются фармацевтические композиции, способные увеличивать активность GLP-1 у человека, содержащие обладающий активностью GLP-1 полипептид и/или агонист GLP-1 и приготовленные для способов и применений, описанных здесь.

Квалифицированному специалисту известны различные способы определения и расчета фармакокинетических (например, но без ограничения, Cmax, AUC, Tmax, периода полувыведения из сыворотки) и фармакодинамических (например, но без ограничения, уровней глюкозы в сыворотке, плазме и крови) параметров, описанных здесь. Кроме того, квалифицированному специалисту известны различные способы осуществления статистических сравнений (например, но без ограничения, сравнений изменения от базовой линии после обработки и/или сравнений среди групп обработок) и/или анализа фармакокинетических и фармакодинамических параметров, описанных здесь. Кроме того, квалифицированный специалист знает и способен использовать различные другие способы сбора и анализа фармакокинетических, фармакодинамических и других клинических данных.

Следующие примеры иллюстрируют различные не ограничивающие аспекты этого изобретения.

Для следующих примеров, если не указано иное, SEQ ID NO: 1 готовили в концентрации 25 мг/мл из лиофилизированной формы, содержащей 2,8% маннита, 4,2% трегалозы дигидрата, 0,01% полисорбата 80, 20 мМ фосфатного буфера при pH 7,2. Содержащие SEQ ID NO: 1 композиции разводили водой для инъекции, как только необходимо для соответствующего введения дозы.

Представлено одиночное слепое, контролируемое плацебо исследование возрастающей дозы фармацевтической композиции, содержащей SEQ ID NO: 1 (0,25-104 мг), вводимой подкожно в живот здоровых субъектов.

Для исследования было зарегистрировано тридцать девять здоровых, являющихся мужчинами и женщинами субъектов. Пять групп здоровых субъектов получали дважды один раз в неделю следующие увеличивающиеся дозы фармацевтической композиции, содержащей SEQ ID NO: 1, инъецируемой подкожно в живот: группа 1 (0,25+1 мг); группа 2 (3+6 мг) ; группа 3 (16+24 мг); группа 4 (48+60 мг) и группа 5 (80+104 мг). В группах 1-4 при рандомизации 6 субъектов получали активный компонент, и при рандомизации 2 субъекта получали плацебо. В группе 5 при рандомизации 5 субъектов получали активный компонент, и при рандомизации 2 субъекта получали плацебо.

Таким образом, 29 субъектов получали активное лечение и 10 субъектов получали плацебо. Воздействия фармацевтической композиции, содержащей SEQ ID NO: 1, увеличивались пропорциональным по отношению к большей дозе образом в течение проверяемого диапазона доз. Период полувыведения SEQ ID NO: 1 составлял приблизительно 7 дней для всех доз, при этом Tmax находилось в диапазоне от до 4 дней.

Фармакокинетические параметры у здоровых субъектов, которые получали активный компонент, суммированы в табл. 1. Фармакокинетические данные для субъектов, которые получали плацебо, не суммировались. AUC (неделя 1) представляет площадь под кривой зависимости концентрации от времени, рассчитанную от времени введения первой дозы в течение одной недели после введения первой дозы.

от времени введения второй дозы в течение одной недели после введения второй дозы. Cmax (неделя 1) представляет максимальную измеряемую концентрацию от времени введения первой дозы в течение одной недели после введения первой дозы. Cmax (неделя 2) представляет максимальную измеряемую концентрацию от времени введения второй дозы в течение одной нэдели после введения второй дозы.

Представлено одиночное слепое, контролируемое плацебо, исследование многократных доз у субъектов с T2DM. Для исследования было зарегистрировано пятьдесят четыре являющихся мужчинами и женщинами субъектов. Субъекты или находились на диете для осуществления контроля, или принимали метформин, сульфонилмочевину или комбинацию метформина и сульфонилмочевины. Субъекты, принимающие метформин и/или сульфонилмочевину до начала исследования, прекращали лечение для вымывания этих средств за 2 недели до введения первой дозы. Субъекты получали при рандомизации или плацебо, или фармацевтическую композицию, содержащую SEQ ID NO: 1, с помощью подкожной инъекции в живот один раз в неделю в течение двух недель следующим образом: группа 1 (9+9 мг; 4 плацебо, 14 активных лечений); группа 2 (16+16 мг; 5 плацебо; 12 активных лечений); группа 3 (32+32 мг; плацебо, 14 активных лечений). Сорок субъектов при pандомизации получали активное компонент, и четырнадцать субъектов при рандомизации получали плацебо.

Пятьдесят три субъекта завершили исследование. Один субъект, который в результате рандомизации должен был получать активное лечение в группе 2, был выведен из исследования до введения второй дозы (16 мг). Второй субъект, который в результате рандомизации должен был получать активное лечение в группе 2, получил только первую дозу (16 мг). Этот второй субъект не был включен в фармакокинетические анализы. Три субъекта подвергались введению ошибочной дозы (два субъекта для введения плацебо и один субъект, который в результате рандомизации должен был получать активное лечение в группе 3 (32 мг)). Подвергнутые введению ошибочной дозы субъекты не включались в какие-либо фармакокинетические анализы.

Для всех доз период полувыведения SEQ ID NO: 1 составлял приблизительно 4-6 дней. Tmax находилось в диапазоне от приблизительно 1 до приблизительно 5 дней после введения дозы без четкой зависимости от дозы. Фармакокинетические параметры у субъектов, которые получали активный компонент, суммированы на фиг. 1 и табл. 2. Субъекты, которые в результате рандомизации получали плацебо, не включены в фиг. 1 или табл. 2.

В этом примере представлены фармакодинамические профили субъектов, описанных в примере 2.

Субъекты получали подкожные инъекции доз плацебо или фармацевтической композиции, содержащей SEQ ID NO: 1, вводимых один раз в неделю в течение двух недель следующим образом: группа 1 (9+ мг; 14 плацебо, 4 активных лечений); группа 2 (16+16 мг; 5 плацебо; 12 активных лечений); группа (32+32 мг; 5 плацебо, 14 активных лечений). Дозы вводились субъектам в день 1 и день 8. Оценивались - 11 эффекты SEQ ID NO: 1 на глюкозу и фруктозамин у субъектов с T2DM. Субъекты с T2DM или находились на диете для осуществления контроля, или принимали метформин, сульфонилмочевину или комбинацию метформина и сульфонилмочевины и прекращали лечения для вымывания этих средств за 2 недели до введения первой дозы. Профили глюкозы натощак и в течение 24 ч оценивались на базовой линии и в течение 24 ч после введения первой и второй дозы. Фруктозамин оценивали на базовой линии и при визите в день 13, день 21 и для конечного контроля (в день 56 или день 63) после введения дозы.

В фармакодинамические анализы были включены все субъекты, получившие правильное рандомизированное лечение. Один субъект в группе 2 правильно получил дозу в день 1, но был выведен из исследования до введения второй дозы. Этот субъект был включен в фармакокинетические анализы для получения данных, собранных до дня 1, и был исключен из фармакодинамических сводок после введения дозы в день 8. Два субъекта, которые в результате рандомизации должны были получать плацебо, но ошибочно подверглись срединному введению дозы, были исключены из всех фармакодинамических анализов. Один субъект, который в результате рандомизации должен был получать активный компонент в дозе 32 мг, был подвергнут введению ошибочной дозы и исключен из всех фармакодинамических анализов.

При всех уровнях доз наблюдались клинически и статистически значимые снижения средневзвешенных значений глюкозы в течение 24 ч и концентраций глюкозы в плазме натощак (FPG). Связанные с глюкозой данные продемонстрированы в табл. 3.

Для всех уровней доз наблюдались значительные снижения фруктозамина в день 13 и день 21 после введения дозы. Снижений не ожидали при визите для конечного контроля (в день 56 или день 63) вследствие оцененного периода полувыведения SEQ ID NO: 1. Сравнения фруктозамина у субъектов с T2DM, которые получали активный компонент, по сравнению с получавшими плацебо субъектами суммированы в табл. 4.

Предложено рандомизированное исследование однократной дозы с доступной маркировкой на здоровых добровольцах и субъектах с T2DM. Для этого исследования было зарегистрировано шестьдесят два являющихся мужчинами и женщинами субъекта. Субъекты с T2DM находились или на диете для осуществления контроля, на метформине, или на тиазолидиндионе и продолжали подвергаться своим прежним лечениям в течение исследования. Субъекты с T2DM получали фармацевтическую композицию, содержащую SEQ ID NO: 1, с помощью подкожной инъекции в виде однократных доз, составляющих 16 мг (в живот (N=8); руку (N=7) или ногу (N=7)) или 64 мг (в живот (N=8); руку (N=8) или ногу (N=8)). Здоровые добровольцы получали или 16 мг (N=8), или 64 мг (N=8) активного компонента с помощью подкожной инъекции в живот. Таким образом, 16 здоровых, нормальных добровольцев получали активный компонент, и 46 субъектов с T2DM получали активный компонент.

У субъектов с T2DM воздействия были сравнимыми по всем местам инъекций и увеличивались умеренно пропорциональным по отношению к большей дозе образом. Воздействия были сравнимыми между здоровыми субъектами и субъектами с T2DM. Профили концентраций и коробчатые диаграммы AUC представлены на фиг. 1 и 2 соответственно. Фармакокинетические параметры суммированы в табл.

5. AUC (неделя 1) представляет площадь под кривой зависимости концентрации от времени, рассчитанную от времени введения дозы в течение одной недели после введения дозы. AUC(0-) представляет площадь под кривой зависимости концентрации от времени, рассчитанную от времени введения дозы, экстраполированного до бесконечности на основе скорости элиминации SEQ ID NO: 1. Для шести субъектов, получающих уровень дозы в 16 мг, имеющиеся данные не позволили осуществить оценку скорости элиминации SEQ ID NO: 1. Поэтому экстраполяция до бесконечности была невозможна, и для этих субъектов AUC(0-) не рассчитывали.

В этом примере предоставлены фармакодинамические профили субъектов, описанных в примере 4.

Фармакодинамические профили однократной дозы фармацевтической композиции, содержащей SEQ ID NO:1, подвергались изучению в этом исследовании и включали эффекты SEQ ID NO:1 на глюкозу, инсулин, глюкагон и C-пептид у субъектов с T2DM. Субъекты с T2DM находились или на диете для осуществления контроля, на метформине, или на тиазолидиндионе и продолжали подвергаться своим прежним лечениям в течение исследования. Субъекты получали однократную дозу фармацевтической композиции, содержащей SEQ ID NO: 1, следующим образом: однократные дозы, составляющие 16 или 64 мг, вводили с помощью подкожной инъекции(й) в живот 16 здоровым, нормальным добровольцам или вводили в руку, ногу или живот 46 субъектам с T2DM, как описано в примере 4. Глюкозу натощак оценивали через 48 ч после введения дозы до завтрака. Профили глюкозы после приема пищи (в течение 4 ч) оценивали через 48 ч после введения дозы в течение 4-часового периода после завтрака.

Для каждой введенной дозы снижения глюкозы были единообразными по местам инъекций. Клинически и статистически значимые снижения глюкозы после приема пищи (средневзвешенного значения глюкозы в течение 4 ч) и глюкозы в плазме натощак (FPG) наблюдали при дозе 64 мг. Связанные с глюкозой данные продемонстрированы в табл. 6.

Любая заявка на патент, на приоритет которой притязает эта заявка, также полностью включена сюда посредством ссылки образом, описанным выше для некоторых публикаций и ссылок.

1. Способ увеличения активности GLP-1 у человека, который включает введение указанному человеку композиции, содержащей полипептид с GLP-1 активностью и с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:1, обеспечивающей максимальную концентрацию в плазме указанного полипептида по меньшей мере от приблизительно 8 до приблизительно 54 нМ SEQ ID NO:1 и значение AUC(0-) для указанного полипептида после введения однократной дозы по меньшей мере от приблизительно 99 до приблизительно 637 нМ день.

2. Способ по п.1, дополнительно включающий введение указанному человеку по меньшей мере одной дозы композиции, содержащей полипептид с GLP-1 активностью и с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:1, содержащей от приблизительно 0,25 до приблизительно 104 мг.

3. Способ по п.2, где период полувыведения из сыворотки полипептида с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:1 является от приблизительно 4 до приблизительно 7 дней.

4. Способ по п.2, где значение Tmax полипептида GLP-1 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:1 составляет от приблизительно 1 до приблизительно 5 дней.

5. Способ по п.1, в котором указанный человек имеет гипергликемию.

6. Способ по п.1, в котором указанный человек имеет диабет.

7. Способ по п.1, в котором указанный человек имеет сахарный диабет типа II.

8. Способ по п.2, дополнительно включающий введение полипептида с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:1 один раз в неделю.

9. Способ по п.1, причем средневзвешенное значение AUC0-24ч для глюкозы в плазме, определенное в виде изменения от базовой линии, по сравнению с плацебо у указанного человека клинически и статистически значительно уменьшено в течение периода времени, составляющего приблизительно одну неделю после введения указанной композиции, содержащей полипептид с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:1.

10. Способ по п.9, где средневзвешенное значение AUC0-24ч для глюкозы в плазме, определенного в виде изменения от базовой линии, по сравнению с плацебо у указанного человека снижается по меньшей мере на приблизительно 20 мг/дл в течение курса лечения, составляющего по меньшей мере одну неделю после введения указанной композиции, содержащей полипептид с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:1.

11. Способ по п.1, где клинически и статистически значительно снижается содержание глюкозы в плазме натощак у указанного человека в виде изменения от базовой линии по сравнению с плацебо в течение периода времени, составляющего приблизительно одну неделю после введения указанной композиции, содержащей полипептид с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:1.

12. Способ по п.11, где снижается содержание глюкозы в плазме натощак у указанного человека по меньшей мере приблизительно на 7,0 мг/дл в течение периода времени, составляющего приблизительно одну неделю после введения указанной композиции, содержащей полипептид с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:1.

13. Способ по п.11, где снижается содержание глюкозы в плазме натощак у указанного человека по меньшей мере приблизительно на 4 мг/дл в виде изменения от базовой линии в течение периода времени, составляющего приблизительно одну неделю после введения указанной композиции, содержащей полипептид с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:1.

14. Способ по п.11, где снижается средневзвешенное значение AUC0-4ч для глюкозы в плазме у указанного человека после приема пищи, определенное в виде изменения от базовой линии по меньшей мере на приблизительно 6,0 мг/дл в течение курса лечения, составляющего по меньшей мере одну неделю после введения указанной композиции, содержащей полипептид с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:1.

15. Способ по п.1, где содержание фруктозамина в плазме у указанного человека, определенное как изменение от базовой линии по сравнению с плацебо, снижается по меньшей мере приблизительно на мкМ/л в течение периода, составляющего по меньшей мере две недели после введения указанной композиции, содержащей полипептид с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:1.

16. Способ лечения сахарного диабета типа II у человека, включающий введение указанному человеку фармацевтической композиции, содержащей по меньшей мере один полипептид с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:1, обеспечивающей максимальную концентрацию в плазме, указанного полипептида, составляющую по меньшей мере от приблизительно 8 до приблизительно 54 нМ и значение AUC(0-) для указанного полипептида после введения однократной дозы по меньшей мере от приблизительно 99 до приблизительно 637 нМ день.

17. Способ по п.16, в котором указанная композиция дополнительно включает маннит, трегалозы дигидрат, полисорбат 80 и фосфатный буфер.

18. Способ по п.17, дополнительно включающий введение полипептида с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:1 в концентрации 25 мг/мл.

19. Способ по п.17, дополнительно включающий подкожное введение полипептида с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:1 в дозе от приблизительно 0,25 до приблизительно 104 мг.

20. Фармацевтическая композиция, способная увеличивать активность GLP-1 у человека, содержащая полипептид с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:1 и обеспечивающая максимальную концентрацию в плазме полипептида по меньшей мере от приблизительно 8 до приблизительно нМ и значения AUC(0-) для указанного полипептида после введения однократной дозы человеку, составляющее по меньшей мере от приблизительно 99 до приблизительно 637 нМ день.

Фармакокинетический профиль SEQ ID NO: 1 у субъектов с сахарным диабетом типа II.

Средний (95%) график зависимости концентрации в плазме (нМ, ELISA) от времени (в часах) Воздействие SEQ ID NO: 1 - коробчатые диаграммы воздействий (AUC(0-)) по месту инъекции (живот, нога и рука) и дозе у субъектов с сахарным диабетом типа II


Похожие работы:

«Учебно-методическое обеспечение для подготовки кадров по программам высшего профессионального образования для тематического направления ННС Нанобиотехнологии _ Учебно-методическое обеспечение для подготовки магистров по программам высшего профессионального образования направления подготовки Нанотехнология с профилем подготовки Нанобиотехнологии И.В. Спичак, Н.В. Автина УЧЕБНО-МЕТОДИЧЕСКИЙ КОМПЛЕКС ДЛЯ МАГИСТРОВ ПО ДИСЦИПЛИНЕ ОСНОВЫ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЙ ТЕХНОЛОГИИ УДК 339 ББК 52.82 С 72 С 72 Спичак,...»

«Вестник ГЕРОНТОЛОГИЧЕСКОГО ОБЩЕСТВА Российской Академии наук Информационный бюллетень № 1-2 (146- 147) январь-февраль 2010 г. В номере: Наши поздравления Отчеты региональных ПРЕЗИДИУМ отделений Научные встречи Предстоящие конференции ПРАВЛЕНИЯ ГЕРОНТОЛОГИЧЕСКОГО Книжная полка Диссертации по геронтологии и гериатрии О БЩЕСТВА при РАН 1-й номер Успехов геронтологии в переводе на английский язык Пpезидент: В.Н. АНИСИМОВ пpофессор, д.м.н., НАШИ ПОЗДРАВЛЕНИЯ НИИ онкологии им. Н.Н. Петpова, ПРЕМИИ...»

«015514 B1 Евразийское (19) (11) (13) патентное ведомство ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОМУ ПАТЕНТУ (12) (51) Int. Cl. A61K 31/353 (2006.01) (45) Дата публикации и выдачи патента A61K 31/357 (2006.01) 2011.08.30 A61P 25/18 (2006.01) (21) A61P 25/24 (2006.01) Номер заявки (22) Дата подачи заявки 2006.12. ПРИМЕНЕНИЕ БЕНЗОКОНДЕНСИРОВАННЫХ ГЕТЕРОЦИКЛИЧЕСКИХ (54) СУЛЬФАМИДНЫХ ПРОИЗВОДНЫХ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ МАНИАКАЛЬНОГО СИНДРОМА И БИПОЛЯРНОГО РАССТРОЙСТВА (31) 60/751,493; 11/612,222 (56) MARYANOFF В.E. ET...»

«ФГБОУ ВПО Самарская ГСХА Издание 2013-10 Положение о кафедре Эпизоотология, патология и фармакология СМК 03-52-2013 Лист 1 из 16 УТВЕРЖДАЮ Ректор академии А. М. Петров _ 2013 г. ПОЛОЖЕНИЕ О КАФЕДРЕ ЭПИЗООТОЛОГИЯ, ПАТОЛОГИЯ И ФАРМАКОЛОГИЯ Учт. экз № 1 Кинель 2013 ФГБОУ ВПО Самарская ГСХА Издание 2013- Положение о кафедре Эпизоотология, патология и фармакология СМК 03-52- Лист 2 из ПРЕДИСЛОВИЕ 1. Положение вводится в действие с момента его утверждения и действует до отмены. 2. Положение...»

«015562 B1 Евразийское (19) (11) (13) патентное ведомство ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОМУ ПАТЕНТУ (12) (51) Int. Cl. A61K 38/18 (2006.01) (45) Дата публикации и выдачи патента A61P 7/06 (2006.01) 2011.08.30 (21) Номер заявки 200870261 (22) Дата подачи заявки 2006.02.14 ПРИМЕНЕНИЕ ПЕПТИДНЫХ СОЕДИНЕНИЙ ТРО И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ (54) КОМПОЗИЦИЙ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ АНЕМИИ (43) 2009.02.27 (56) WO-A-95/ WO-A-2004/ (86) PCT/US2006/ WO-A-2005/ (87) WO 2007/094781 2007.08. CASE В. С. ЕТ AL.: The...»

«СПРАВОЧНО АНАЛИТИЧЕСКОЕ ИЗДАНИЕ ДЛЯ МЕДИЦИНСКИХ И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ РАБОТНИКОВ ДЫХАНИЕ МОЗГА НОБЕН® идебенон НООТРОПНОЕ Е МНЕМОТРОПНОЕ НОЕ Н АКТИВИРУЮЩЕЕ ДЕЙСТВИЕ КОРРЕКТОР МИТОХОНДРИАЛЬНЫХ НАРУШЕНИЙ: - ВОССТАНАВЛИВАЕТ КЛЕТОЧНОЕ ДЫХАНИЕ - ПОВЫШАЕТ УРОВЕНЬ ЭНЕРГООБМЕНА КЛЕТКИ - ОКАЗЫВАЕТ ВЫРАЖЕННОЕ АНТИОКСИДАНТНОЕ ДЕЙСТВИЕ - УЛУЧШАЕТ ЭМОЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ - ПОЛОЖИТЕЛЬНО ВЛИЯЕТ НА ВЕГЕТАТИВНУЮ

«015463 B1 Евразийское (19) (11) (13) патентное ведомство ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОМУ ПАТЕНТУ (12) (51) Int. Cl. C07D 487/04 (2006.01) (45) Дата публикации и выдачи патента C07D 519/00 (2006.01) 2011.08.30 A61K 31/4985 (2006.01) (21) A61P 35/00 (2006.01) Номер заявки (22) Дата подачи заявки 2006.11. КОНДЕНСИРОВАННОЕ БИЦИКЛИЧЕСКОЕ СОЕДИНЕНИЕ - ИНГИБИТОР (54) mTOR, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ, ЕГО СОДЕРЖАЩАЯ, И СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ РАКА (31) 60/737,581; 60/854,247 (56) WO-A- WO-A- (32)...»

«016517 B1 Евразийское (19) (11) (13) патентное ведомство ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОМУ ПАТЕНТУ (12) (51) Int. Cl. C12N 7/01 (2006.01) (45) Дата публикации и выдачи патента C12N 15/44 (2006.01) 2012.05.30 C07K 16/10 (2006.01) (21) A61K 39/145 (2006.01) Номер заявки A61P 31/16 (2006.01) (22) Дата подачи заявки 2011.04. РЕКОМБИНАНТНАЯ ПСЕВДОАДЕНОВИРУСНАЯ НАНОЧАСТИЦА, (54) ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ ИЛИ ТЕРАПИИ ГРИППА (ВАРИАНТЫ), СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ ИЛИ ТЕРАПИИ ГРИППА (43)...»

«RU 2 402 345 C2 (19) (11) (13) РОССИЙСКАЯ ФЕДЕРАЦИЯ (51) МПК A61K 36/48 (2006.01) A61K 8/97 (2006.01) A61Q 19/00 (2006.01) B01D 11/02 (2006.01) A61P 3/00 (2006.01) A61P 17/00 (2006.01) ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА ПО ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ, ПАТЕНТАМ И ТОВАРНЫМ ЗНАКАМ (12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ (21), (22) Заявка: 2008107117/15, 27.02.2008 (72) Автор(ы): Абдурахманов Эльдар Рустамович (UZ), (24) Дата начала отсчета срока действия патента: Сыров Владимир Николаевич (UZ) 27.02. (73)...»

«PЕТИНОИДЫ Альманах Выпуск 12 RETINOIDS Almanac Volume 12 ОТКРЫТИЕ ПАМЯТНИКА А.И. БАБУХИНУ В ОРЛЕ ФНПП “РЕТИНОИДЫ” Москва 2001 Альманах “РЕТИНОИДЫ” - это непериодическое тематическое издание, содержащее публикации об экспериментальных и клинических исследованиях ретиноидов отечественного производства. Альманах адресован врачам-дерматологам, специалистам, занимающимся изучением фармакологических и лечебных свойств витамина A и ретиноидов, а также аптечным работникам. Альманах финансирует и издает...»

«СТОМАТОЛОГИЧЕСКИЙ БИЗНЕС ЗДРАВООХРАНЕНИЕ, СФЕРА ОБСЛУЖИВАНИЯ, ИНСТРУМЕНТНОЕ ПРОИЗВОДСТВО, ФАРМАЦЕВТИКА. ПРОИЗВОДСТВО МЕДИЦИНСКИХ ПРЕПАРАТОВ, ТОРГОВЛЯ, МЕДИЦИНА ПРЕДПРИНИМАТЕЛЬСТВО СТОМАТОЛОГИЯ АГЕНТСТВО ДЕЛОВОЙ ИНФОРМАЦИИ МОНИТОР iCENTER.ru 3 (28) МАЙ 2009 Стоматологический бизнес Периодичность выхода: TOP NEWS МОНИТОР ЭКСПЕРТИЗА ежемесячно по Индексу цитируемости Учредитель ООО ГРОТЕК Генеральный директор Андрей Мирошкин Demi. Новое поколение полимеризаторов c. Издатель KaVo INTRAsurg – новые...»

«Олег Семенович Кулиненков Фармакологическая помощь спортсмену: коррекция факторов, лимитирующих спортивный результат Фармакологическая помощь спортсмену: коррекция факторов, лимитирующих спортивный результат: Советский спорт; Москва; 2007 ISBN 978-9718-0280-8 Аннотация Системный подход к факторам, ограничивающим работоспособность спортсмена, позволяет четко выстроить схему фармакологической поддержки его здоровья и значительно повысить спортивный результат. Предназначается спортивным врачам,...»

«PЕТИНОИДЫ Альманах Выпуск 3 RETINOIDS Almanac Volume 3 РАДЕВИТ Radevitum ФНПП “Ретиноиды” - 1996 Альманах “ Ретиноиды” - это непериодическое тематическое издание, содержащее публикации об экспериментальных и клинических исследованиях ретиноидов отечественного производства. Альманах адресован врачам-дерматологам, специалистам, занимающимся изучением фармакологических и лечебных свойств витамина А и ретиноидов, а также аптечным работникам. Альманах финансирует и издает ФНПП “Ретиноиды”. Точка...»

«016410 B1 Евразийское (19) (11) (13) патентное ведомство ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОМУ ПАТЕНТУ (12) (51) Int. Cl. A61K 31/395 (2006.01) (45) Дата публикации и выдачи патента A61K 31/438 (2006.01) 2012.04.30 A61K 47/40 (2006.01) (21) A61K 9/19 (2006.01) Номер заявки A61K 9/14 (2006.01) B82B 3/00 (2006.01) (22) Дата подачи заявки A61P 31/04 (2006.01) 2010.11.13 A61P 1/04 (2006.01) ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ НА ОСНОВЕ НАНОЧАСТИЦ (54) ЦИКЛОДЕКСТРИНА, СОДЕРЖАЩИХ РИФАБУТИН, СПОСОБ ЕЕ...»

«СПРАВОЧНО АНАЛИТИЧЕСКОЕ ИЗДАНИЕ СПРАВОЧНО АНАЛИТИЧЕСКОЕ ИЗДАНИЕ ДЛЯ МЕДИЦИНСКИХ И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ РАБОТНИКОВ ДЫХАНИЕ МОЗГА НОБЕН® идебенон НООТРОПНОЕ Е МНЕМОТРОПНОЕ НОЕ Н АКТИВИРУЮЩЕЕ ДЕЙСТВИЕ КОРРЕКТОР МИТОХОНДРИАЛЬНЫХ НАРУШЕНИЙ: - ВОССТАНАВЛИВАЕТ КЛЕТОЧНОЕ ДЫХАНИЕ - ПОВЫШАЕТ УРОВЕНЬ ЭНЕРГООБМЕНА КЛЕТКИ - ОКАЗЫВАЕТ ВЫРАЖЕННОЕ АНТИОКСИДАНТНОЕ ДЕЙСТВИЕ - УЛУЧШАЕТ ЭМОЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ -...»







 
© 2014 www.kniga.seluk.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Книги, пособия, учебники, издания, публикации»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.