WWW.KNIGA.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Книги, пособия, учебники, издания, публикации

 

Усовершенствованный быстрый судебнотоксикологический поисковый анализ с помощью

системы ГХ/МСД, оснащенной детектором соединений

азота и фосфора (NPD), и банка данных для

деконволюции (DRS) с информацией о 725 веществах

Брюс Квимби, фирма Agilent Technologies, 2850 Centerville Road, Wilmington, DE, USA

Бюллетень по решению прикладных задач в области судебной токсикологии

Номер документа: 5989-8582EN

13 мая 2008 г.

Перевод: Б. Лапина (ИнтерЛаб) Фирма Agilent не несет ответственности за ошибки, допущенные в этом документе; за случайные или последственные ущербы, связанные с оформлением, содержанием или использованием данного материала.

Информация, описания и характеристики, приведенные в этой публикации, могут изменяться без предварительного уведомления.

Авторское право зарегистрировано фирмой Agilent Technologies в 2008 году.

Резюме Перед лабораториями, выполняющими судебно-токсикологический поисковый анализ, стоит задача просмотра большого количества целевых (интересующих) веществ в образцах на фоне помех со стороны сложных матриц. В таких ситуациях широко используются методы ГХ-масс-спектрометрии. Ионизация электронным ударом и сканирование во всем диапазоне масс дают много выгодных возможностей широкодиапазонного поиска. К таким возможностям относятся следующие:

неограниченное число целевых веществ; подтверждение опознания во всем спектральном диапазоне; библиотечный поиск для идентификации тех химических соединений, которые не были отнесены к целевым. Последние усовершенствования технологии проведения анализов с помощью систем ГХ/МС существенно повысили число выявляемых интересующих веществ и значительно сократили время, затрачиваемое на обработку одного образца.

С помощью описанной здесь системы, проводился поиск 725 веществ в образцах.

Использовался созданный фирмой Agilent банк спектральных данных для судебной токсикологии (этому банку присвоен каталожный № G1674AA). Продолжительность просмотра данных существенно сокращена созданным фирмой Agilent программным обеспечением для получения сообщения результатов деконволюции (это программное обеспечение обозначается английским сокращением DRS). Регенерирование колонки прогревом для удаления высококипящих веществ подменено продувкой колонки в обратном направлении (реализуемым быстрее и снижающем потребность в профилактическом обслуживании хроматографа и масс-спектрометра).

Затраты времени на анализ сокращены быстрой хроматографической разгонкой (период между очередными введениями образца равен 9,75 мин); одновременным сбором данных в режиме сканирования, режиме регистрации индивидуальных ионов (SIM), и параллельной регистрацией детектором соединений азота и фосфора (NPD). Информация, зарегистрированная в ходе сканирования, подвергается деконволюции и используется для опознания любого из 725 интересующих веществ. Данные, приобретенные в режиме регистрации индивидуальных ионов (SIM), используются при поиске следовых количеств веществ, не обнаруживаемых в режиме сканирования. Отклик термоионного детектора на азот дает возможность распознать химические соединения азота, не относящиеся к интересующим (целевым); подтвердить идентификацию таких веществ и (при необходимости) способствует количественному анализу. При анализе образцов цельной крови, система дает возможность найти все вещества, обнаруживаемые традиционным способом при значительно сниженных затратах времени.

Введение Методы быстрого поискового анализа с помощью ГХ/МС играют важную роль в токсикологической лаборатории. При постоянном появлении новых лекарственных средств и токсинов, перечень интересующих веществ легко может превысить несколько сотен. Для тех химических соединений, которые можно анализировать с помощью газовой хроматографии, очень хорошо подходит система ГХ/МСД, работающая в режиме сканирования полного диапазона и использующая ионизацию электронным ударом. Этот вариант решения задач дает несколько преимуществ:

• Используется специально предназначенное, надежное и знакомое оборудование • Может контролироваться любое число интересующих веществ • Перечень искомых веществ не ограничен числом прослеживаемых множественных реакций (MRM), как при пользовании методами тандемной масс-спектрометрии (MS/MS) • Даже через годы, архивированная информация, зарегистрированная в режиме полного сканирования, может быть просмотрена ради обнаружения новых целевых веществ • Подтверждение опознания основано на спектрограммах, снятых в полном диапазоне • Вещества, не относящиеся к целевым, могут быть идентифицированы за счет поиска в спектральной библиотеке NIST и в других библиотеках, стандартных для интересующей области исследований • Степень подавления ионизации матрицей не представляет собой столь большую сложность, как при пользовании методами ЖХ/МС Несмотря на то, что методы ГХ/МС характеризуются рассмотренными выше преимуществами, существуют и ограничения традиционного подхода. По мере увеличения появляющихся на экране целевых веществ, сложность задач, связанных с разработкой методов анализа, обслуживанием и внедрением методов растет очень быстро.

Из-за этих соображений, часто ограничивается цель поисковых методов, применяемых в токсикологических лабораториях.

Методы ГХ/МС (как правило) были созданы для анализа от 10 до 100 индивидуальных веществ. Предполагается, что целевое вещество действительно обнаружено, если найдены целевой ион и два или три подтверждающих ионов, имеющих требуемое соотношение интенсивностей при попадании пика вещества в заведомо определенное поле допуска по времени удерживания. Правильность опознания может быть дополнительно подтверждена сопоставлением спектрограммы вершины пика со справочной библиотечной спектрограммой.





Помехи со стороны матрицы обычно сводятся к минимуму за счет совместной оптимизации подготовки образца; параметров, определяющих работу газового хроматографа и масс-спектрометра. В случае методов, предназначенных для анализа только нескольких типов матриц, выбираемые для идентификации ионы могут быть подобраны таким образом, что будут сводить влияние матрицы к минимуму. Когда метод предполагает анализ ограниченного числа целевых веществ, перекалибровка коэффициентов чувствительности, времен удерживания, соотношений интенсивностей подтверждающих ионов может проводиться благодаря введению нескольких калибровочных смесей.

Необходимость в методах быстрого просмотра большого числа целевых веществ в различных сложных матрицах поставила разработчиком задачу преодоления целого ряда трудностей. При поиске сотен интересующих веществ, приходится учитывать несколько факторов:

• Пользование подготовкой образца для снижения помех со стороны матрицы теперь ограничено (поскольку исчерпывающие этапы очистки могут привести к непреднамеренному удалению целевых веществ). Снижаемая таким образом степень очистки может приводить к весьма возросшему мешающему воздействию матрицы.

• Выполнять перекалибровку коэффициентов чувствительности, времен удерживания и соотношения интенсивностей подтверждающих ионов становится сложнее (из-за большого числа целевых веществ).

• Методы могут использоваться многими лабораториями, которые не имеют доступа к стандартам всех целевых веществ.

• Время, затрачиваемое на просмотр данных о содержании сотен интересующих веществ в сложных матрицах может оказаться неприемлемо большим.

• Даже при пользовании очень большими банками спектральных данных, возможно присутствие в образцах тех целевых веществ, ведения о которых в банках отсутствуют.

В последние годы, стали доступными несколько приемов, помогающих преодолеть указанный выше набор осложняющих обстоятельств. Программа фиксации времен удерживания (RTL) дает получение фактических времен удерживания, точно совпадающих в результатах, полученных на разных приборах, и с указанными в банке данных [1]. Этим устраняется необходимость в перекалибровке индивидуальных времен удерживания и программируемых по времени событий (таких, как переход к другим группам веществ при регистрации индивидуальных ионов (SIM). Внедрение надежных и инертных делителей потока (созданных благодаря использованию технологии капиллярных потоков [CFT]) создало возможность параллельного сбора информации масс-спектрометром и детектором соединений азота и фосфора [2]. Хроматограммы, получаемые с помощью детектора (NPD), обнаруживают содержащие азот вещества (включая те, которые не попадают в перечень целевых химических соединений, регистрируемых масс-спектрометром). Появилась выгодная возможность обнаружения содержащих фосфор интересующих веществ (т.е. получено альтернативное средство выполнения количественного анализа).

Внедрение возможности параллельного анализа в режимах регистрации индивидуальных ионов (SIM) и сканирования дало возможность снимать спектрограммы в полном спектральном диапазоне и получать данные в режиме SIM в процессе разделения одного образца [2, 3]. Итоги сканирования могут быть использованы для просмотра всего перечня целевых веществ (благодаря сопоставлению с банком данных), а результаты работы в режиме SIM – для быстрого поиска малого набора наиболее важных веществ (таких, как фентанил) при очень низких уровнях концентраций.

Одним из наиболее важных средств, снижающих затраты времени на просмотр данных, является созданное фирмой Agilent программное обеспечение для получения сообщения результатов деконволюции (DRS) [4]. Используются усовершенствованные способы пересчета (деконволюция) для извлечения спектрограмм интересующих веществ из фона, вводимого сливающимися (не разделенными) пиками. Извлеченная спектрограмма (после этого) сопоставляется с библиотечной (для определения, имеется ли интересующее вещество в образце). Если нужно, обнаружение может быть подтверждено поиском в главной спектральной библиотеке NIST. Весь процесс автоматизирован и вводит наибольшую экономию времени, затрачиваемого на расшифровку данных. Работа с программным обеспечением DRS существенно снижает число ложно положительных и ложно отрицательных опознаний.

Поскольку программным обеспечением DRS используется спектрограмма, снятая во всем спектральном диапазоне (а не только 4 хроматограммы извлеченных ионов), удается найти интересующее вещество при наличии помех (когда традиционный подход неизбежно дал бы плохие результаты). Кроме того (поскольку используется полная спектрограмма, а не распознание по точному соотношению интенсивностей целевого и подтверждающих ионов), нет необходимости в частом обновлении данных о таких соотношениях. Это очень выгодно для анализа целевых веществ, которые встречаются весьма редко (но поиск которых все равно выполняется).

В данной публикации описывается пользование сочетанием указанных выше подходов с поиском в новом созданном фирмой Agilent банке данных, содержащем сведения о веществах (банке данных для судебной токсикологии, имеющем каталожный № G1674AA), в целях быстрой проверки присутствия или отсутствия целевых веществ.

Вместе с этим банком данных предоставляются:

Методы RTL для колонок DB-5MS и DB-35MS Спектральные библиотеки для программных обеспечений DRS и MSD ChemStation Заранее составленные методы, использующие программу фиксации времен удерживания (RTL), для хроматографических разгонок с продолжительностью 30, 15, 10, 7 или 5 минут (в зависимости от конкретной оснастки аналитической системы) Методы для непосредственного подключения колонки к масс-селективному детектору (т.е. для помещения выходного конца колонки в вакуумную камеру) или для подключения к делителю потока, изготовленному согласно технологии капиллярных потоков (CFT) [в этом случае, на выходе из колонки действует давление 3,8 фунтов на кв. дюйм].

Для каждого из методов, имеются три банка данных, способствующих количественному анализу. В этих банках:

• Используются целевой и подтверждающие ионы, характеризующиеся наибольшей интенсивностью • Выбор ионов оптимизирован для получения наибольшего отношения сигнала к шуму при уносе неподвижной фазы из колонки и при наличии фона • Выбор ионов оптимизирован ради получения наибольшего отношения сигнала к шуму при наличии жирных кислот, обычно обнаруживаемых в крови Названия всех веществ, прописанных в банке данных, перечислены (в алфавитном порядке, на английском языке) в приложении к данной публикации (т.е. в ее конце). В банк данных включены лекарственные средства и выбранные продукты их распада, триметилсилильные производные и соединения, получаемые при ацетилировании.

Напоминаем, что для обнаружения интересующих веществ, имеющих первичные и вторичные амино-группы (включая алифатические и ароматические), проводится ацетилирование. Для веществ с гидроксильными группами (спиртов, фенолов, карбоновых кислот и т.д.) получают (с помощью N,O-бистриметилсилилацетамида [BSTFA]) триметилсилильные производные. Вещества, обладающие многофункциональными группами (например, фенилпропаноламин, имеющий первичный алифатический амин и спирт), только ацетилируются (прочим обработкам для получения производных не подвергаются).

Предоставлены и методы, предусматривающие работу на двух колонках с разными неподвижными фазами (для подтверждения по индексам удерживания). Имеется возможность работы и с другими методам, но на той же самой колонке и при той же самой аппаратурной оснастке прибора. Как правило, предпочтительно пользование колонкой DB-5MS (поскольку конечная температура нагрева термостата газового хроматографа при использовании этой колонки ниже).

Условия хроматографического разделения, выбранные для создания обсуждаемого здесь банка данных, являются общеупотребимыми и уместны для анализа других веществ, не вошедших в приводимую таблицу. Поскольку ни одна подборка целевых веществ (независимо от ее объема) не может удовлетворить потребности всех лабораторий, предусмотрена возможность добавления новых веществ, применительно к которым необходим быстрый поиск.

В банке данных, времена удерживания веществ даются для случая непосредственного подключения колонки к масс-селективному детектору (т.е. для помещения выходного конца колонки в вакуумную камеру) и для случая подключения к делителю потока, изготовленному согласно технологии капиллярных потоков (CFT) [когда на выходе из колонки действует давление 3,8 фунтов на кв. дюйм]. Это сделано для гарантии близкого совпадения наблюдаемых при анализе времен удерживания с указываемыми в банке данных (независимо от фактической оснастки аналитической системы).

Условия хроматографического разделения, выбранные для создания обсуждаемого здесь банка данных, подобраны с учетом возможности пользования созданной фирмой Agilent программы пересчета метода, необходимого при изменении ряда параметров. Колонка работает в режиме поддержания давления (на ее входе) постоянным. Поэтому, программа пересчета метода дает возможность изменения методов ради ускорения работы [5] при точном соблюдении допусков по времени удерживания. В созданном фирмой Agilent банке данных для судебной токсикологии имеются файлы, дающие возможность работы при точном ускорении анализа в 2 раза, в 3 раза, в 4 раза, в 6 раз (относительно той продолжительности анализа, для которой исходно был создан этот банк данных). Эти методы в дальнейшем тексте данной статьи упоминаются, как методы 2х, 3х, 4х и 6х (соответственно). Выбор скорости определяется нужной степенью хроматографической разрешающей способности и оснасткой используемой системы ГХ/МСД.

Хроматографы, эксплуатируемые в странах с номинальным напряжением питающей электросети 120 В, могут использоваться с масс-селективным детектором, оснащенным диффузионным насосом, а выход колонки должен быть введен непосредственно в вакуумную камеру. При этом можно пользоваться той продолжительностью анализа, для которой исходно был создан обсуждаемый банк данных, или можно ускорить анализ вдвое. Ускорение в 3, 4 и 6 раз (2х, 3х, 4х и 6х) возможно только при более быстром изменении температуры термостата (что обеспечивается в странах с номинальным напряжением питающей электросети 220 В). Но масс-селективный детектор должен быть оснащен турбомолекулярным насосом, имеющим торговую марку Performance (поскольку скорость потока через колонку при ускорении метода разделения может превысить мл/мин). Кроме того, предпочтительно и пользование усовершенствованными электронными схемами масс-селективного детектора (которыми оснащена последние модели масс-спектрометра, выпускаемые фирмой Agilent). Для ускорения анализа в 6 раз, требуется питание прибора от сети с напряжением 220 В и установка специального вкладыша, уменьшающего объем термостата (ради получения возможности использования скорости изменения температуры термостата, равной 60 оС/мин). Обратите внимание на то, что установка такого вкладыша требует, чтобы масс-селективный детектор, устройство для введения образца и головка термоионного детектор (NPD) находились в заднем положении.

Предоставляются три разных варианта каждого метода (с набором всего необходимого).

Нужный вариант метода определяется выбором ионов, используемых в банке данных для количественного анализа. Первым типом метода используются наибольшие 4 иона в предоставляемой спектрограмме вещества. Целевым является ион с наибольшей интенсивностью. Тремя подтверждающими оказываются следующие 3 иона, выбранные в порядке убывания интенсивности. Этот тип метода (и все, что к нему требуется) является унаследованным (именно под него первоначально создавался банк данных). Этим методом пользовались для решения многих сложных прикладных задач.

Недостатком выбора наиболее интенсивных 4 ионов является то, что (в некоторых случаях) ухудшается отношение сигнала к шуму. Например, если наиболее интенсивным ионом вещества является ион с m/z 207 (а наиболее интенсивный ион неподвижной фазы, уносимой из колонки, характеризуется тем же m/z 207), отношение сигнала к шуму для этой массы окажется значительно сниженным. То же самое затруднение обнаруживается на низких массах (таких, как m/z 44), где углекислота и другие фоновые газы могут давать помехи и повышать уровень шума. Для преодоления этого затруднения, предоставляется второй типа метода (со всем, что для него нужно). В этом случае, ионы (используемые в банке данных для количественного анализа) выбраны таким образом, чтобы отношение сигнала к шуму оказывалось наилучшим (при наличии уноса неподвижной фазы из колонки и фоновых газов). Как правило, используется этот тип метода (поскольку дает наилучшие общие эксплуатационные характеристики).

Третий тип метода характеризуется таким выбором ионов, который оптимизирован для образцов, имеющих большие количества жирных кислот (обычно обнаруживаемые в образцах крови). Эти методы дают наилучшее отношение сигнала к шуму при высоком содержании жирнокислотных матриц. Но выбор такого метода не может оказываться наиболее целесообразным, если низки уровни содержания (создающих помехи) жирных кислот.

В состав системы, показанной на рис. 1, входит газовый хроматограф Agilent 7890A (каталожный № G3440A).

Рис. 1. Используемая для быстрого анализа экстрактов крови система ГХ/МС, оснащенная детектором соединений азота и фосфора (термоионным детектором, NPD) К ключевым компонентам системы относятся:

Термостат для колонок, обеспечивающий быстрое изменение температуры.

Исходный метод (для которого был составлен банк спектральных данных) предполагал работу с колонкой, имеющей длину 30 м, и скоростью изменения температуры термостата 10 оС/мин. Такое изменение температуры мог обеспечить хроматограф, подключаемый к сети с переменным напряжением 120 В. При оснащении хроматографа 7890А термостатом, к которому подается напряжение 240 В (вариант оснастки № 002), поисковый метод мог работать в 4 раза быстрее (при установки колонки с длиной 15 м). Если же газовый хроматограф, предназначенный для подключения к сети с переменным напряжением 220 В, оснащался устройством для введения образца с делением или без деления потока (расположенным в задней части прибора); масс-селективный детектор подключался к задней части прибора (варианты оснастки №№ 199 и 202) и использовался вкладыш (G2646-60500), ограничивающий объем термостата, скорость изменения температуры термостата могла быть повышена в 6 раз (60 оС/мин). Можно было пользоваться нестандартной колонкой, имеющей длину 10 м. Если в хроматографе имелся и термоионный детектор (NPD); он тоже размещался (вместе с делителем потока [вариант оснастки № 299]) в задней части термостата (чтобы можно было пользоваться вкладышем, ограничивающим объем термостата).

Термоионный детектор (NPD). Вариантом оснастки № 251 к хроматографу 7890А является термоионный детектор, сигнал которого регистрируется, запоминается и обрабатывается системой MSD ChemStation параллельно с информацией, полученной от масс-спектрометра. Термоионные детекторы очень селективны; очень чувствительны к содержащим азот и фосфор химическим соединениям (пределы обнаружения попадают в диапазон единиц пкг). Информация, предоставляемая этим детектором, может использоваться несколькими способами. Вещества, не относящиеся к целевым (но содержащие азот или фосфор) могут быть выбраны при просмотре зарегистрированных данных. Наличие отклика этого детектора (пик со временем удерживания, соответствующим опознанному веществу) может использоваться для подтверждения правильности идентификации. По сигналу термоионного детектора может выполняться количественный анализ (но только после калибровки по стандарту, поскольку отклик такого детектора не универсален и может быть разным для разного типа веществ).

Активный элемент головки термоионного детектора не совместим с галогенсодержащими растворителями и с избыточными количествами силанизирующих реактивов. Если приходится такими реактивами пользоваться, настройка режима работы делителя потока должна обеспечивать возможность сброса растворителя.

Делители потока, использующие технологию капиллярных потоков. Фирмой Agilent предлагаются два типа делителей потока, которые могут быть применены при решении обсуждаемой здесь задачи с помощью газового хроматографа 7890А. Вариантом оснастки № 889 является 2-канальный делитель потока, направляющий элюент из колонки в массселективный детектор и в термоионный детектор. Оснастка SP1 (для хроматографа 7890А) [каталожный № 7890-0363] делает то же самое, но создает возможность сброса растворителя. Делитель потока изготовлен с помощью специальной технологии диффузионного скрепления пластин; при подсоединении капилляров (или колонки) используются металлические уплотнительные конуски, благодаря которым гарантируются химическая инертность, удобство в эксплуатации, отсутствие утечек, возможность работы при высоких температурах. Совместно с делителями потоков используется вспомогательный узел электронного регулирования потоков (вариант оснастки № 301 к хроматографу 7890А), подводящий поддувочный газ под постоянным давлением. Это давление может (по программе) изменяться после завершения хроматографической разгонки. Устанавливается более высокое давление, а давление на вводящем образы устройстве снижается почти до атмосферного; это приводит к тому, что поток через колонку начинает проходить в обратном направлении для удаления высококипящих веществ через канал деления потока (т.е. через тот канал, которым оборудовано само устройство для введения образца). Такая продувка колонки в обратном направлении существенно снижает продолжительность анализа образцов, содержащих высококипящие компоненты матрицы; увеличивает периоды времени между обрезаниями входной (загрязнившейся) части колонки и снижает частоту выполнения профилактических работ, связанных с необходимостью чистки источника ионов масс-селективного детектора [6].

Кроме того, вспомогательный узел электронного регулирования потоков дает возможность замены колонок и выполнению работ по техническому обслуживанию вводящего образцы устройства без необходимости запуска воздуха в масс-селективный детектор.

В случае методов, использующих растворители, совместимые с термоионным детектором и не требующих пользования силанизирующими реактивами при подготовке образцов, может использоваться стандартный 2-канальный делитель потока. Если приходится работать с галогенсодержащими растворителями или пользоваться силанизирующими реактивами, нужно оснащать 2-канальным делителем, обеспечивающим отвод растворителя на слив (вариант SP1 для хроматографа 7890 [7890-0363]), чтобы предохранить от порчи активный элемент головки термоионного детектора.

Масс-селективный детектор. Использовался масс-селективный детектор 5975С с турбомолекулярным насосом, имеющим торговую марку Performance (G3243A). Можно работать с масс-селективным детектором 5973N Inert, оснащенным высокоскоростными электронными схемами, турбомолекулярным насосом, имеющим торговую марку Performance, и источником ионизации электронным ударом (G2579A). Эти системы характеризуются высокой скоростью сканирования в полном спектральном диапазоне и обеспечением достаточной чувствительности. Скоростное сканирование дает возможность регистрировать наиболее узкие пики, получаемые при быстрых хроматографических разделениях. Турбомолекулярный насос с торговой маркой Performance необходим из-за более высоких скоростей потока, получаемых при пользовании делителями потока. Кроме того, такой насос нужен при быстро работающих поисковых методах (когда колонка вводится непосредственно в вакуумную камеру массселективного детектора, а продолжительность анализа снижена в 3, 4 или 5 раз).

Стандартным турбомолекулярным насосом можно пользоваться при более медленном методе (для которого исходно был составлен банк данных) или при методе, ускоряющем анализ лишь в 2 раза. Для обеспечения возможности продувки колонки в обратном направлении, необходим турбомолекулярный насос (с торговой маркой Performance или стандартный). В системах, оснащенных диффузионным насосом, продувка колонки в обратном направлении производиться не может.

Параллельное пользование режимами регистрации индивидуальных ионов и сканирования. Должен использоваться вариант D.02.00 (или более новый вариант) программного обеспечения Agilent MSD ChemStation (поскольку требуется одновременная регистрация в этих двух режимах). Фактически (во время записи полной хроматограммы), циклы регистрации индивидуальных ионов (SIM) и сканирования чередуются (т.е. процессы на самом деле не параллельны). Как и в случае пользования обычными методами SIM, содержание не всех 725 интересующих (целевых) веществ удается прослеживать за одну хроматографическую разгонку (из-за необходимости затрат времени на переход от одной группы к другой). Как правило, система настраивается на приобретение данных о наиболее важных целевых веществах, представленных на очень низких уровнях концентраций. В качестве примера могут быть названы фентанил и фенциклидин.

Программное обеспечение деконволюции [DRS] (G1716AA). Обработка массспектральных данных с помощью деконволюции дает возможность идентификации анализируемых веществ на фоне плохо отделенных матричных пиков [4, 7]. Это существенно снижает требования к хроматографической разрешающей способности; дает возможность обнаруживать интересующие химические соединения при высоком содержании матрицы; для сокращения продолжительности анализа можно пользоваться быстрыми хроматографическими разделениями. Программным обеспечением DRS используется программа деконволюции AMDIS (созданная Национальным институтом стандартов и технологий [NIST]). Исходно, эта программа была разработана специально для обнаружения микропримесей остатков химического оружия в сложных образцах.

Программное обеспечение DRS предоставляет исследователю три мощных уровня идентификации веществ: (1) обнаружение с помощью системы ChemStation по времени удерживания и 4 подтверждающим ионам; (2) обработка с помощью программы AMDIS (по «почищенным спектрограммам» с оценкой полного совпадения ионов и с использованием программы фиксации времен удерживания); (3) поиск в библиотеке NIST, в которой представлено свыше 163 000 веществ.

Банк данных для судебно-токсикологического поискового анализа (G1647AA).

Содержит библиотеку масс-спектрограмм, метод и файлы для поиска 725 веществ с помощью деконволюции.

Таблица 1 Условия разделения с помощью газовой хроматографии и режимы работы масс-спектрометра Выпускаемая фирмой Agilent модель 7890А, оснащенная автоматическим пробоотборником и лотком для большого числа образцов С делением или без деления потока, оснащенное узлом системы электронного регулирования потоков Температура устройства для введения образца Испарительная камера: поставляемая фирмой Каталожный № 5181- Agilent, дезактивированная, с двумя коническими частями Вещество, по которому фиксируется время Проадифен (proadifen) [SKF-525a] удерживания Время удерживания вещества, по которому 4, фиксируется время Скорость потока, продувающего испарительную 50 мл/мин камеру Давление, устанавливаемое на время продувки 1 фунт на кв. дюйм колонки в обратном направлении Исходная температура термостата Продолжительность выдержки при исходной температуре 0,25 мин Скорость линейного изменения температуры Конечная температура Продолжительность выдержки при конечной температуре 1,25 мин Общая продолжительность хроматографической разгонки 7,13 мин Продолжительность периода уравновешивания температуры 0,5 мин Продолжительность периода продувки колонки в обратном 0,5 мин направлении Температура при продувке колонки в обратном направлении 325 оС *Устройство для введения образца и место подключения к масс-спектрометру: задняя часть термостата. Установлен вкладыш G2646-60500, снижающий объем термостата Делитель потока на 2 направления (обеспечивающий возможность сброса пика Длина ограничивающего поток капилляра, подводящего к 0,69 м масс-спектрометру Внутренний диаметр ограничивающего поток капилляра, 0,15 мм подводящего к масс-спектрометру Длина ограничивающего поток капилляра, подводящего к 0,36 мм детектору соединений азота и фосфора (NPD) Внутренний диаметр ограничивающего поток капилляра, 0,15 мм подводящего к детектору соединений азота и фосфора (NPD) Коэффициент деления потока (масс-спектрометр/детектор 1,4 : соединений азота и фосфора Продолжительность периода сброса пика растворителя 0 – 0,75 мин Давление на делителе потока во время выполнения 3,8 фунта на кв. дюйм хроматографической разгонки Давление на делителе потока во время продувки колонки в 76 фунтов на кв. дюйм обратном направлении Скорость потока поддувочного газа (азота) 8 мл/мин Температура Выпускаемая фирмой Agilent модель 5975 (или модель 5973 с быстродействующими электронными схемами) Задержка на время выхода пика растворителя 0,7 мин Напряжение на электронном умножителе Предусмотренное автоматической Режим прослеживания микропримесей ионов Не используется (TID) **С нормализацией по коэффициенту усиления; 1х Температура квадруполя Температура источника ионов Температура устройства сопряжения газового хроматографа с массспектрометром Параметры, соответствующие работе прибора Использованные параметры, соответствующие работе прибора (если не сделано иных оговорок), указаны в таблице 1.

В описанной системе была использована колонка с фазой DB-5. Конечная температура, требуемая для элюирования последнего вещества (при поисковом просмотре), составляет 325 оС (вместо 345 оС, нужных при пользовании колонкой DB-35MS). Таким образом обеспечиваются меньшая продолжительность хроматографической разгонки и больший срок службы колонки.

Соответствующие методу параметры были выбраны для получения наилучшего компромисса между разрешающей способностью хроматографического разделения и пропускной способность аналитической системы. При выполнении описанного здесь анализа образцов крови, метод 4х давал достаточную разрешающую способность при относительно малой продолжительности разгонки. Хотя метод 4х мог использоваться и при работе с колонкой, имеющей длину 15 м, была выбрана колонка с длиной 10 м (поскольку она дает аналогичную разрешающую способность при более низкой скорости потока через колонку).

Экономить время позволяла и продувка колонки в обратном направлении (вместо прогрева колонки после завершения хроматографической разгонки, необходимого для удаления высокомолекулярных компонентов матрицы). Такая продувка более эффективна, реализуется быстрее, не сопровождается выносом высококипящих компонентов и уносимой из колонки фазы в детектор соединений азота и фосфора и в источник ионов масс-селективного детектора. При пользовании описанной оснасткой аналитической системы, все высокомолекулярные химические соединения удалялись из колонки благодаря продувке в обратном направлении в течение 0,5 минуты. Употребление более короткой колонки (10 м) снижало продолжительность периода такой продувки (по сравнению с тем временем, которое затрачивалось бы при работе с колонкой, имеющей длину 15 м).

Метод 4х может быть реализован при подаче на термостат напряжения 240 В* и без помещения вставки, ограничивающей объем термостата. Однако такой вставкой пользовались из-за того, что она в какой-то степени снижает продолжительность периода охлаждения термостата; уменьшает затраты электроэнергии прибором.

*Фирмой Agilent поставляются хроматографы, работающие от переменного напряжения сети 220 (240 В) или 120 В. Термостат на 220 (240 В) является более быстродействующим.

(Примечание переводчика) Ускорение анализа было обеспечено и за счет того, что автоматический пробоотборник начинал цикл очередного введения образца еще до завершения хроматографической разгонки. При таком подходе, подготовка образца (и шприца) к введению обеспечивается уже на этапе охлаждения термостата. Это дает экономию примерно 1 минуты цикла введения (в зависимости от параметров, определяющих режим введения образца).

Параллельная регистрация масс-селективным детектором (в режимах SIM и сканирования) и детектором соединений азота и фосфора (NPD) дает существенную экономию времени (по сравнению с затратами, требующимися при выполнении разгонок в системах с разными детекторами). Вещества и соответствующие группы ионов, контролируемые в режиме SIM, указаны в табл. 2. Поскольку (при пользовании методом 4х) пики хроматограммы оказываются относительно узкими, продолжительность периода регистрации индивидуальных ионов равнялась 5 мсек.

За счет указанных выше приемов экономии времени, затраты времени на анализ (от введения одного образца до введения следующего) составляли 9,6 минуты.

Таблица 2 Группы ионов, контролируемые в режиме SIM Согласно таблице, приведенной на предыдущей странице, продолжительность периода регистрации индивидуальных ионов равнялась 5 мсек.

На основании результатов анализа 50 экстрактов из крови, была создана методика, объединяющая данные, полученные в ходе деконволюции (DRS), при пользовании режимом регистрации индивидуальных ионов (SIM) и при регистрации детектором соединений азота и фосфора (NPD).

Этой методикой предусмотрено следующее:

• Результаты деконволюции были накоплены с помощью программного обеспечения DRS, после чего просматривались для определения присутствующих веществ.

Минимальный показатель качества совпадения для программы AMDIS был задан равным 50. Любые вещества, для которых показатель качества совпадения оказывался менее 65 (или для которых различия времен удерживания оказывались более 4 секунд), считались подозреваемыми (например, считались не выявленными, если не были подтверждены другими данными [такими, как соотношение интенсивностей целевого и подтверждающих ионов]). Ради распознания подозреваемых веществ, оценивался сигнал соединений азота и фосфора (нет ли соответствующего отклика с той же самой формой пика и с тем же самым временем удерживания). Если же подозреваемое вещество содержало азот (как подавляюще количество химических соединений, названных в приведенной здесь таблице), отклик детектора соединений азота и фосфора (NPD) являлся подтверждением присутствия именно этого вещества.

• Вещества, идентифицированные программой AMDIS, но не найденные программным обеспечением ChemStation (из-за того, что соотношения подтверждающих ионов не попади в нужный диапазон), были обследованы вручную с помощью функции QEdit.

Если программа AMDIS показала уместные показатели качества совпадения (по спектрограммам и по времени удерживания), систему вынуждали провести количественный анализ.

• Отдельный метод анализа данных (составленный для системы ChemStation) был использован для пересмотра результатов, полученных при регистрации индивидуальных ионов (SIM), применительно к веществам, названным в табл. 2.

Поскольку режим SIM дает возможность обнаружить вещества при более низких уровнях концентраций (чем обнаруживаются по спектральным данным), идентификация основывалась на соотношениях интенсивностей целевых и подтверждающих ионов и на отклике детектора соединений азота и фосфора (NPD).

• Сигнал детектора NPD обследовался для выявления любых пиков, характеризующихся завышенной интенсивностью (не соответствующих опознанным целевым веществам).

В библиотеке NIST 05a производился поиск полученные в ходе деконволюции спектрограммы таких пиков (с тем же временем удерживания). Практически важен тот факт, что игнорировались не соотнесенные небольшие пики, найденные детектором соединений азота и фосфора (из-за многочисленности таких пиков; из-за очень низкого отношения сигнала к шуму в результатах сканирования таких пиков, что делало информацию непригодной).

Если не сделано иных оговорок, для анализа данных программным обеспечением ChemStation использовался метод 4х, в котором были прописаны ионы, оптимально выбранные с учетом фона уносимой из колонки неподвижной фазы. Предусмотренные этим методом приблизительные коэффициенты чувствительности были подстроены согласно стандарту проадифена с концентрацией 5 нг/мкл (т.е. того вещества, по которому фиксировалось время удерживания). Коэффициенты чувствительности для всех веществ, имеющихся в банке данных для количественного анализа, были умножены на коэффициент, требуемый для получения подсчитанного содержания стандарта проадифена равным 5 нг/мкл. Это давало возможность оценить концентрацию идентифицированных интересующих веществ даже в тех случаях, когда для таких химических соединений не была выполнена индивидуальная калибровка.

Эти (вписанные в метод) приблизительные коэффициенты чувствительности были предназначены только для грубой оценки уровня концентраций не прокалиброванных анализируемых веществ. Поскольку для утвержденного количественного анализа необходимы коэффициенты чувствительности, полученные в ходе недавно выполненной калибровки (выполненной на конкретном приборе), такая (оценочная) концентрация никогда не сообщалась в результатах количественного исследования. Допущенная при определении этих значений ошибка могла оказываться 10-кратной и даже выше. Наличие оценочных значений нужно было для получения данных для подготовки стандартов, необходимых для количественной калибровки. Для всех (количественно анализируемых) веществ приходится пользоваться только индивидуальными калибровками.

Метод количественного анализа 27 веществ, выполняемого в режиме регистрации индивидуальных ионов (SIM), был создан с использованием целевого и двух подтверждающих ионов на основе метода 4х, оптимизированного с учетом обычно обнаруживаемых жирных кислот. Это давало возможность свести к минимуму помехи со стороны матрицы, типичной для образцов крови.

Поле допуска для опознания пиков было задано программному обеспечению MSD ChemStation равным + 0,150 мин для результатов сканирования; + 0,075 мин для результатов индивидуальных ионов (SIM). Для программы AMDIS ширина такого поля допуска составляла + 6 секунд. Показано, что эти значения оказывались достаточно большими, чтобы учесть какую-то нестабильность времен удерживания, но (в то же время) достаточно малыми, чтобы свести к минимуму число ложно положительных подтверждений.

Ради сопоставления выполнялся анализ данных с помощью двух традиционных методов обработки.

Первый метод был реализован с помощью стандартного программного обеспечения для количественного анализа. Получали и интегрировали хроматограмму извлеченного иона каждого интересующего вещества, имеющегося в банке данных. Если обнаруживался пик, попадающий в заданное поле допуска по времени удерживания, подсчитывались соотношения целевого иона с подтверждающими ионами. Имелась возможность получения нескольких вариантов сообщения результатов. Использовались следующие из них: 1) сообщение только тех веществ, пик которых обнаружен в извлеченной хроматограмме целевого иона и для которых соотношения подтверждающих ионов попали в допустимый диапазон; 2) сообщение всех веществ, пик которых обнаружен в извлеченной хроматограмме целевого иона (независимо от пригодности соотношений подтверждающих ионов). После этого, результаты пересматривались с помощью функции QEdit. Для упрощения такого просмотра, совещались хроматограммы извлеченных целевого и подтверждающих ионов. На экран выводились справочная спектрограмма и спектрограмма вершины пика, подлежащего количественному анализу. Основываясь на результатах просмотра хроматограмм извлеченных ионов и спектрограмм, исследователь имел возможность включать конкретное вещество в сообщение результатов или забраковывать это химическое соединение.

Второй метод основывался на пользовании предусмотренной программным обеспечением ChemStation программой Screener (программой поискового анализа). Эта программа почти идентична задействованной функцией QEdit, но дополнительно сообщает коэффициент взаимной корреляции (XCR) спектрограммы вершины пика и справочной библиотечной спектрограммы. Коэффициент XCR является мерой показателя качества совпадения спектрограмм; может использоваться в качестве дополнительного параметра для поиска интересующих (целевых) веществ. Программой Screener предусмотрен вывод сообщений результатов, аналогичных получаемым при пользовании функцией QEdit. Использовались те же самые два типа сообщений результатов. Обратите внимание на то, что программа Screener предназначена лишь для выполнения качественного анализа (вещества, идентифицированные с помощью этой программы, должны [после этого] быть количественно проанализированы с помощью функции QEdit).

Экстракты из цельной крови, подготовленные к анализу методом ГХ/МС, были предоставлены фирмой NMS Labs (Willow Grove, шт. Пенсильвания, США). Подготовка сводилась к одноэтапному экстрагированию растворителем, испарению досуха и разбавлению толуолом до 1/10 исходного объема.

На рис. 2А (см. следующую страницу) показаны результаты хроматографического разделения одного экстракта цельной крови (итог параллельной регистрации в режимах сканирования, SIM и детектором соединений азота и фосфора). Хроматограммы делают образец обманчиво простым. На рис. 2В показаны те же самые сигналы (результат параллельной регистрации в режимах сканирования, SIM и детектором соединений азота и фосфора), но в увеличенном масштабе. С учетом откликов на следовые количества, обнаружено более 400 индивидуальных веществ.

Записи из этого файла данных были оценены заново с использованием традиционных подходов. В первом сообщении результатов (полученном с помощью стандартного программного обеспечения количественного анализа) перечислены вещества, для которых все соотношения целевых и подтверждающих ионов попадали в относительно большое поле относительного допуска (50%). Без пользования пересчетом вручную, сообщено о наличии 28 веществ, но для 22 подтверждение было ложно положительным (т.е. такие вещества фактически отсутствовали). Из 11 интересующих веществ, фактически имеющихся в образце, в сообщении результатов указаны лишь 6 (остальные 5 остаются как ложно отрицательные подтверждения).

Такая ситуация не выходит из нормы. Обычно необходимо иметь в сообщении результатов указание всех веществ, для которых на целевой ион имеется отклик (независимо от соотношения подтверждающих ионов). Подобные «возможные обнаружения» после этого, должны быть обследованы вручную, с помощью функции QEdit. Поскольку настройка режима интегрирования должна соответствовать регистрации очень малых пиков, сообщается о завышенном количестве веществ (из-за интегрирования фона базовой линии). Например, в рассматриваемом случае было найдено 367 веществ (по хроматограмме целевого иона). Из них, 356 были результатом ложно положительного подтверждения. Обнаружены все 11 химических соединений, фактически имеющихся в образце (поэтому ложно отрицательные подтверждения отсутствуют). Таким образом, для избежания фальшивых ложно отрицательных подтверждений, исследователю (для получения сведений об 11 присутствующих) необходимо вручную обработать сведения о 367 веществах.

Рис. 2. А: хроматограммы, полученные в ходе анализа экстракта из крови (итог параллельной регистрации в режимах сканирования, SIM и детектором соединений азота и фосфора). B: те же хроматограммы (итог параллельной регистрации в режимах сканирования и детектором соединений азота и фосфора), но представленные в увеличенном масштабе Результаты анализа образца были обследованы с помощью предусмотренной программным обеспечением ChemStation программы Screener (программой поискового анализа). Как и ожидалось, предоставляемое сообщение результатов основано только на соотношениях целевых и подтверждающих ионов (аналогично получаемому при пользовании функцией QEdit). Единственный способ избежать ложно отрицательных подтверждений сводится к оценке сотен пиков хроматограммы целевых ионов ради обнаружения 11 фактически имеющихся.

В ходе попытки снизить количество ложно положительных подтверждений (требующих переоценки), все 273 вещества, попавшие в перечень, были обработаны с учетом коэффициента взаимной корреляции (XCR) в порядке убывания показателя вероятности совпадения. Несколько реально присутствующих химических соединений оказались сгруппированы в верхней части списка. Тем не менее, реально присутствующее вещество (с наинизшим коэффициентом взаимной корреляции [XCR]) оказалось в очереди сто шестьдесят вторым. Итог показывает, что коэффициент взаимной корреляции повышает вероятность получения правильных результатов поиска целевых веществ, но все еще дает ложно отрицательные подтверждения (если дополнительно не обследовать все пики, имеющиеся на хроматограмме целевых ионов).

Для обсуждаемого здесь типа образцов, правильное распознание имеющихся интересующих веществ с помощью традиционных подходов оказывается наиболее трудоемким (и затратным по времени) этапом общего процесса анализа. Именно поэтому, очень выгодно пользоваться деконволюцией и программным обеспечением DRS.

Когда результаты анализа того же самого образца были пересмотрены с помощью программного обеспечения DRS, программой AMDIS было сообщено об обнаружении веществ с показателем качества совпадения (для полученной в ходе деконволюции спектрограммы) свыше 50 (при попадании времен удерживания в поле допуска 6 секунд относительно времени, установленного программой фиксации времен удерживания [программой RTL]). В ходе пересмотра сведений о 12 сообщенных веществах, одно было удалено (поскольку для него показатель качества совпадения оказался слишком низким).

Все 11 (фактически присутствующих) химических соединений были идентифицированы (в перечень попало лишь одно ложно положительное подтверждение). Весь этап пользования программным обеспечением DRS и процесса пересмотра (ради правильного выявления фактически присутствующих веществ) занял (примерно) 5 минут (вместо затрат 1 часа на пользование функцией QEdit или программой Screener). После применения функции QEdit для получения результатов анализа количественного содержания интересующих веществ, было получено заключительное сообщение результатов для интересующих химических соединений, идентифицированных с помощью программного обеспечения DRS. См. рис. 3, приведенный на следующей странице.

Рис. 3. Сообщение результатов, предоставленное программным обеспечением DRS в случае анализа, проиллюстрированного рис. 2 (стр. 17) На рис. 3 показано сообщение результатов, предоставленное для этого образца программным обеспечением DRS. Для каждого опознанного вещества указаны время удерживания (R.T.), регистрационный номер в журнале Chemical Abstracts (CAS#), название химического соединения (Compound Name). Соответствующая строка вводилась в сообщение результатов только в том случае, когда вещество было обнаружено программным обеспечением Agilent ChemStation, программой AMDIS (или сразу двумя).

Это сообщение результатов показывает, что вещество было определено программным обеспечением Agilent ChemStation как присутствующее, если его количество появилось в столбце Agilent ChemStation Amount. Это означает, что были удовлетворены требования к идентификации, заданные в той части метода, которая соответствует анализу данных (Data Analysis). Обычно, такими требованиями являются следующие: должен иметься (и должен быть проинтегрирован) пик интересующего иона; соотношение интенсивностей всех трех подтверждающих ионов должно попасть в процентное поле допуска, названное для конкретного химического соединения. Сведения о веществе появятся в перечне и в том случае, когда сам исследователь принудительно (вручную) заставит систему проинтегрировать пик интересующего иона.

Величина показателя качества совпадения, указанная в столбце AMDIS Match, соответствует степени совпадения извлеченной (полученной в ходе деконволюции) спектрограммы пика (с таким же временем удерживания [RT]) со спектрограммой целевых веществ, имеющейся в библиотеке программы AMDIS. Чем выше показатель (при максимальном значении 100), тем лучше совпадение спектрограмм. В столбце R.T.

Diff sec указано различие (в секундах) наблюдаемого времени удерживания (RT) и того, которое обозначено в библиотеке программы AMDIS. Чем ниже это различие, тем лучше совпадение времен удерживания.

Дополнительной третьей особенностью этого сообщения результатов является наличие столбца, в котором указывается итог поиска в спектральной библиотеке NIST (на рис. этот столбец не показан). В упомянутом столбце называется (полученный при обратном поиске) показатель качества совпадения извлеченной спектрограммы со справочной спектрограммой из главной библиотеки NIST для вещества с тем же самым регистрационным номером в журнале CAS. На данный момент времени, существует большое количество веществ, для которых нет регистрационного номера в этом журнале (CAS#). В банке данных для судебно-токсикологического поискового анализа имеются некоторые не совпадающие номера CAS#, которых не удается обнаружить в библиотеке NIST. Поэтому, из представленного здесь сообщения результатов анализа столбец итога поиска в спектральной библиотеке NIST был преднамеренно исключен (программным способом).

На рис. 2В (стр. 17) [на хроматограмме, зарегистрированной детектором соединений азота и фосфора] имеются три пика с пометками ?A, ?B и ?С. Таким образом помечены три относительно больших пика, отсутствующих в перечне интересующих 725 веществ.

Спектрограммы, соответствующие этим трем пикам, были получены программой AMDIS, после чего был произведен поиск в главной библиотеке NIST. Пик ?A был опознан, как соответствующий трибутифосфату (соединению фосфора, обычно представляющему собой артефакт, появившийся в ходе обращения с образцом). Пик ?В был распознан, как 10,11-дигидробенз(b,f)(1,4)оксазепин-11-он. Позднее было обнаружено, что это вещество оказалось вторым внутренним стандартом, добавляемым во время подготовки образца.

Пик ?С остался не опознанным. Такого вещества нет в библиотеке NIST 05a (наилучший показатель качества совпадения был не выше 35). Но это химическое соединение обнаруживается во многих образцах.

Интересен просмотр обстоятельств идентификации некоторых веществ, включенных в сообщение результатов (ради ознакомления с подробностями опознания). Оксикодон был распознан безо всяких затруднений, поскольку характеризовался высоким показателем качества совпадений в строке для программы AMDIS и очень малым различием времен удерживания. На рис. 4А (см. следующую страницу) показаны хроматограммы извлеченных ионов, видные в окне, соответствующем пользованию функцией QEdit. Все ионы легко обнаруживаются (без помех), а соотношения целевого и подтверждающих ионов попадают в дозволенное поле допуска. Кроме того, на этом рисунке показаны и хроматограммы извлеченных ионов для режима SIM. На них тоже легко (без помех) обнаруживаются интересующие пики; соотношения целевого и подтверждающих ионов тоже попадают в поле допуска. Нижняя хроматограмма, показанная на рис. 4А, была зарегистрирована детектором соединений азота и фосфора; пик имеет ту же самую форму (которая присутствует в сигнале масс-селективного детектора) и совпадает по времени удерживания. На рис. 4В показано сопоставление (полученной в ходе деконволюции) спектрограммы оксикодона (для пика, время удерживания которого соответствует оксикодону) с библиотечной спектрограммой этого вещества. Показатель качества совпадения весьма высок (равен 82). Таким образом, оксикодон был легко распознан (все параметры четко указывали его присутствие).

Рис. 4. А: параллельно записанные хроматограммы для оксикодона (в режимах сканирования, SIM и сигнал детектора соединений азота и фосфора). В: сопоставление спектрограммы оксикодона, полученной в ходе деконволюции, с библиотечной спектрограммой этого вещества На рис. 5 (см. следующую страницу) показана несколько более сложная ситуация.

Интересующим веществом являлся метадон, в спектрограмме которого имеется один большой ион с m/z 72 (интенсивность других ионов мала). Хроматограммы извлеченных ионов, показанные на рис. 5А, получены в режиме регистрации извлеченных ионов (SIM).

Хроматограммы для режима сканирования были идентичными (но, конечно, отличались меньшим отношением сигнала к шуму). При четком пике целевого иона, средний подтверждающий ион (с m/z 57) оказывался зарегистрированным с существенной помехой из-за не отделенного пика октадекановой кислоты. При пользовании только этими хроматограммами извлеченных ионов, идентификация сомнительна (из-за потери одного из подтверждающих ионов, маскированного помехой). Хроматограмма, зарегистрированная детектором соединений азота и фосфора (показанная под хроматограммами, соответствующими режиму SIM), подтверждает факт обнаружения содержащего азот вещества с тем же временем удерживания.

Рис. 5. А: хроматограммы для метадона, полученные в режиме SIM, хроматограмма, зарегистрированная детектором соединений азота и фосфора; В – сопоставление спектрограммы метадона (не подвергнутой вычитанию фона или деконволюции) с библиотечной спектрограммой этого вещества; С: сравнение спектрограммы метадона, извлеченной благодаря деконволюции, с библиотечной спектрограммой метадона На рис. 5В (см. предыдущую страницу) показана спектрограмма пика метадона, не подвергнутая вычитанию фона или деконволюции. Эта спектрограмма сопоставлена с библиотечной (из библиотеки интересующих веществ). Показатель качества совпадения недопустимо мал (равен 42), из-за помехи со стороны октадекановой кислоты. Несмотря на то, что пик иона с m/z 72 четко виден, другие ионы метадона скрыты. На рис. 5С показано сопоставление полученной в ходе деконволюции спектрограммы метадона (спектрограммы пика с интересующим временем удерживания) со справочной спектрограммой. Деконволюция успешно избавила от мешающей октадекановой кислоты.

Теперь, показатель качества совпадения повысился до 80, что очевидно подтверждает наличие метадона в образце. Присутствие метадона доказывается наблюдаемыми двумя ионами (из трех) [соотношение интенсивностей этих ионов правильно] и сигналом детектором соединений азота и фосфора. Пики совпадают по времени удерживания и по форме.

Хотя кофеин не относится к приоритетно интересующим веществам, показателен и пример, представленный рис. 6 (см. следующую страницу). Как показывает низкое отношение сигнала к шуму в 4 хроматограммах, зарегистрированных по полному ионному току в режиме сканирования (рис. 6А), концентрация кофеина (если он в образце присутствует) слишком мала. Для двух ионов (c m/z 109 и 82) очень велики помехи со стороны большого не отделенного пика (присутствие которого подтверждается верхней хроматограммой, зарегистрированной по полному ионному току). Детектор соединений азота и фосфора показывает содержащее азот вещество с теми же самыми формой пика и временем удерживания, соответствующими кофеину. Мешающий пик был опознан, как 6,10,14-триметил-2-пентадеканон (благодаря поиску извлеченной деконволюцией спектрограммы в главной библиотеке NIST). В этом пике имеются общие с кофеином ионы cm/z 109 и 82 (чем обусловлена помеха).

На рис. 6В показана спектрограмма пик кофеина, не подвергнутая вычитанию фона или деконволюции. При сопоставлении с библиотечной спектрограммой кофеина, показатель качества совпадения плох (равен только 51). На рис. 6С показано сопоставление спектрограммы (предполагаемого по времени удерживания) пика кофеина со справочной спектрограммой. Теперь, качество совпадения значительно улучшилось (достигло 70).

Этот пример показывает, что процесс деконволюции хорошо реализуется даже в случае малых пиков при исходно низком отношении сигнала к шуму.

Пример, показанный на рис. 7 (см. стр. 25), соответствует другому образцу. Приводится для демонстрации возможностей деконволюции сопоставительно с ограничениями традиционного подхода. Сложности для этих двух способов обработки фактически аналогичны: одно и то же ограничение накладывается малым отношением сигнала к шуму.

На рис. 7А показаны хроматограммы извлеченных ионов (полученные в режиме SIM) и хроматограмма алпразолама, зарегистрированная детектором соединений азота и фосфора.

В результатах, соответствующих режиму сканирования, три из 4 ионов едва видны, а четвертый ион подавлен шумом. Данные, зарегистрированные в режиме SIM, четко подтверждают наличие пика со временем удерживания, совпадающим со временем выхода алпразолама. Соотношение интенсивностей ионов попадает в уместное поле допуска. Кроме того, детектор соединений азота и фосфора показывает наличие пика с тем же самым временем удерживания и с аналогичной формой. На рис. 7В показано сопоставление выявленной деконволюцией спектрограммой со справочной спектрограммой из библиотеки NIST 05a. Показатель качества совпадения равен только 57,5. Эта величина маргинальна, поскольку программе AMDIS удалось найти лишь часть ионов алпразолама (из-за крайне низкого уровня концентрации вещества). Таким образом демонстрируется, что подход, использующий оценку итогов сканирования с учетом соотношения интенсивностей целевого и подтверждающих ионов, как и результаты деконволюции обречены на неудачу примерно при том же самом отношении сигнала к шуму. Согласно рассматриваемому примеру, очень помогают данные, зарегистрированные в режиме SIM и детектором соединений азота и фосфора. При доступности только результатов сканирования, полученных в ходе анализа этого образца, опознание алпразолама было бы сомнительным (об обнаружении этого вещества, вероятно, вовсе не было бы сообщено). Сведения, зарегистрированные в режиме SIM, и поддерживающее свидетельство детектора соединений азота и фосфора, подкрепляют доказательство возможности присутствия алпразолама (хотя на очень низком уровне концентрации).

Рис. 6. А: Хроматограммы, зарегистрированные по полному ионному току, хроматограммы извлеченных ионов и сигнал детектора соединений азота и фосфора для кофеина. В: Сопоставление спектрограммы кофеина (не подвергнутой вычитанию фона или деконволюции). Показывает наличие помехи со стороны компонента матрицы.

С: сопоставление спектрограммы кофеина, полученной с помощью деконволюции, с библиотечной спектрограммой Рис. 7. А: Хроматограммы, зарегистрированные по полному ионному току, хроматограммы извлеченных ионов и сигнал детектора соединений азота и фосфора для алпразолама. В: сопоставление спектрограммы алпразолама, полученной с помощью деконволюции, со спектрограммой из библиотеки NIST 05a Последний рассматриваемый пример соответствует образцу, отличающемуся необычайно высоким уровнем помех со стороны жирных кислот. Эти помехи очевидны на рис. 8А (стр.

27). При пользовании функцией QEdit, было показано присутствие мепробамата (пик со временем удерживания 3,007 мин на рис. 8В). Хотя соотношения интенсивностей целевого и подтверждающих ионов попадали в использованное (относительно широкое) поле допуска, опознание оставалось сомнительным. Обследование хроматограмм извлеченных ионов показывает, что (при времени удерживания, найденном с помощью функции QEdit) регистрируется ряд не разделенных пиков. Это время удерживания характеризовалось существенным смещением (+0,080 мин) относительно ожидаемого (2.928 мин). Смещение превышало типичное для используемого метода. Кроме того, нет четкой формы пиков в четырех хроматограммах при времени удерживания, равном 3,007 мин. Если учитывать лишь одни эти итоги, подтверждение наличия мепробамата кажется ложно положительным.

Показанные здесь хроматограммы извлеченных ионов были получены с помощью метода, оптимизированного для устранения фона выносимой из колонки неподвижной фазы. При пользовании целевым ионом с m/z 83, очевидно наличие помех в этом образце, характеризующемся высоким содержанием жирных кислот. При переходе к методу, оптимизированному ради удаления помех со стороны жирных кислот, картина становится немного более четкой. Согласно этому методу, в качестве целевого используется ион с m/z 62 (поскольку степень воздействия помех на него ниже). Судя по хроматограмме для этого иона (62), показанной на рис. 8, пик появляется при времени удерживания 2,948 (что существенно ближе к ожидаемому времени удерживания 2,928 мин). Пока пик иона выглядит более напоминающим фактический пик, другие ионы (предусмотренные методом, оптимизированным ради удаления помех со стороны жирных кислот) все еще допускают сомнения (из-за уровня воздействия помех). Это наводит на мысль, что подтверждение все еще может оказываться ложно положительным. Сигнал, зарегистрированный детектором соединений азота и фосфора (не показан), не решает вопроса (поскольку этим детектором обнаружены близкие пики, характеризующиеся временем удерживания 2,928 и 3,007 мин).

Вопрос был легко решен с помощью появившегося нового варианта программного обеспечения DRS (варианта A.04). Этот вариант позволил перенести профиль пика, извлеченного программой AMDIS, в оболочку функции QEdit (т.е. воспользоваться итогами деконволюции и совместить результат с хроматограммами извлеченных ионов, показываемыми с помощью функции QEdit). Кроме того (для сопоставления) заимствуется и выявленной деконволюцией спектрограмма (для сравнения со спектрограммой, вычтенной с помощью функции QEdit, и со справочной библиотечной спектрограммой). Эти возможности упрощают процесс пересмотра данных (за счет показа итогов деконволюции в оболочке функции QEdit). Сопоставление профиля пика, извлеченного программой AMDIS, с хроматограммами извлеченных ионов (из результатов сканирования) подтверждают, что отклик на целевой ион (в методе, оптимизированном ради удаления помех со стороны жирных кислот) действительно соответствует мепробамату. Профиль пика, выявленного программой AMDIS, очень похож на профиль пика иона с m/z 62. Если понадобится, обнаруженный программой AMDIS пик может быть проинтегрирован (для получения возможности количественного анализа даже в случае влияния помех на целевой ион).

Лучшее подтверждение дает спектрограмма, полученная в ходе деконволюции. На рис. 8С (стр. 28) все три спектрограммы показаны в окне, соответствующем пользованию функцией QEdit (обеспечивается возможность сопоставления). Эти спектрограммы были получены при использовании метода, оптимизированного для устранения фона выносимой из колонки неподвижной фазы. Этот метод дает неправильный выбор пика со временем удерживания 3,007 мин (в качестве возможно соответствующего мепробамату).

Спектрограмма вершины этого пика равна результату вычитания спектрограмм предшествующих сканирований из спектрограммы, приходящейся на момент 3,007 мин (поскольку названным методом предусматривается вычитание первой и последней спектрограмм, соответствующим наиболее малой интенсивности сигнала). Из-за того, что был найден пик не с тем временем удерживания, спектрограмма была зарегистрирована для неправильно выбранного вещества (и, конечно, не соответствует мепробамату). При поиске в главной библиотеке NIST, мепробамат не попадает в список первой сотни совпадений.

Рис. 8. А: Хроматограмма, зарегистрированная по полному ионному току при анализе образца с высокими уровнями содержания жирных кислот. В: хроматограммы излеченных ионов (зарегистрированные при сканировании согласно методу, оптимизированному для устранения фона выносимой из колонки неподвижной фазы), совмещенные с пиком, извлеченным программой AMDIS Рис. 8С. Три спектрограммы мепробамата, представленные в окне, соответствующем пользованию функцией QEdit. Дают возможность сопоставления при переходе к варианту A.04 программного обеспечения DRS Средней является спектрограмма, извлеченная за счет деконволюции программой AMDIS.

Показатель качества совпадения со справочной спектрограммой (самой нижней) равен 75, чем подтверждается наличие мепробамата. Данный пример иллюстрирует пригодность деконволюции для обнаружения присутствия веществ, которые легко могли быть не замеченными при пользовании традиционными подходами к анализу.

Описанная здесь аналитическая система дает несколько преимуществ при анализе образцов в ходе судебно-токсикологической экспертизы. Полезно сочетание методов, приводящих к более быстрым и более точным результатам поиска. Использованы:

• Банк данных о 725 веществах, требуемый программой фиксации времен удерживания (программой RTL) для выполнения поиска при работе с масс-спектрометром (банк данных для судебно-токсикологического анализа; каталожный № G1674AA) • Делитель потока, созданный на основе технологии капиллярных потоков (CFT). Дает возможность пользоваться сигналом детектора соединений азота и фосфора (NPD) наряду с масс-спектральной информацией для подтверждения, поиска интересующих веществ (не входящих в перечень приоритетных) и для выполнения альтернативного количественного анализа.

• Параллельная регистрация в режиме сканирования и регистрации индивидуальных ионов. Данные о приоритетных интересующих веществах (приобретаемые в режиме SIM) записываются одновременно с результатами сканирования. Экономится время, которое затрачивалось бы на выполнение хроматографического анализа образцов в режиме регистрации индивидуальных ионов (SIM) и, затем, в режиме сканирования.

• Программное обеспечение DRS. Автоматически выполняемая деконволюция повышает точность идентификации интересующих веществ даже при работе с наиболее сложными матрицами. Особенно выгодно то, что снижаются затраты времени на расшифровку данных (от работ, выполняемых более чем за час, до работ, занимающих менее 10 минут).

• Быстрое хроматографическое разделение при пользовании более короткими колонками, скоростным термостатом, продувкой колонки в обратном направлении.

Все это существенно сокращает продолжительность хроматографического анализа.

Значительно выгоднее пользоваться одной системой, сочетающей все обсужденные приемы. Однако добавление любого одного из описанных выше подходов (или добавление этих подходов в различных сочетаниях) тое может оказаться очень полезным.

Наиболее существенного преимущества можно добиться при пользовании программным обеспечением DRS. Экономия времени на этапе пересмотра данных легко оправдывает усилия и средства, затраченные на внедрение такого подхода.

1. Vince Giarrocco, Bruce Quimby, and Matthew Klee, "Retention Time Locking: Concepts and Applications," Agilent Technologies publication 5966-2469E 2. Chin Kai-Mengand Bruce Quimby, "Identifying Pesticides with Full Scan, SIM, ECD, and FPD from a Single Injection," Agilent Technologies publication 5989-3299EN 3. Chin-Kai Meng, "Improving Productivity with Synchronous SIM/Scan," Agilent Technologies publication 5989-3108EN 4. Philip Wylie, Michael Szelewski, Chin-Kai Meng, and Christopher Sandy, "Comprehensive Pesticide Screening by GC/MSD Using Deconvolution Reporting Software," Agilent Technologies publication 5989-1157EN 5. B. D. Quimby, L. M. Blumberg, M. S. Klee, and P. L. Wylie, "Precise Time-Scaling of Gas Сhromatographic Methods Using Method Translation and Retention Time Locking," Agilent Technologies publication 5967-5820E 6. Michael J. Szelewski and Bruce Quimby, "New Tools for Rapid Pesticide Analysis in High Matrix Samples," Agilent Technologies publication 5989-1716EN 7. Bruce D. Quimby and Michael J. Szelewski, "Screening for Hazardous Chemicals in Homeland Security and Environmental Samples Using a GC/MS/ECD/FPD with a Compound DRS Database," Agilent Technologies publication 5989-4834EN Для получения более подробной информации Для получения более подробной информации о приборах фирмы Agilent Technologies, посетите сайт www.agilent.com/chem.

Для освоения рассмотренных функций и более полного изучения программ и программного обеспечения, можно заказать полные русские тексты (пособия) следующих курсов:

• Эксплуатация программного обеспечения Agilent GC/MSD ChemStation и комплекса масс-селективного детектора с газовым хроматографом (курс H4043A). Дата издания:

апрель 2010 года (602 страницы + слайды + упражнения [лабораторные работы] для самостоятельного освоения) • Эксплуатация программного обеспечения для получения сообщения результатов деконволюции при работе с системой ГХ/МС Agilent (курс R1717A). Дата издания:

июль 2008 года (177 страниц + слайды + упражнения [лабораторные работы] для самостоятельного освоения) Заказ можно оформить, обратившись к компании ИнтерЛаб (www.interlab.ru)

ПРИЛОЖЕНИЕ

Название вещества Регистрационный Название вещества Регистрационный hydroxycarbazepine 10,11-Dihydro-10- 999423-02-8 Anhydroecgonine methyl 043021-26- Dihydrocarbamazepin dipropyltryptamine (ME) *Вещества, для которых фактический регистрационный № в журнале CAS не был найден, указаны здесь с искусственным номером, начинающимся с числа 999. Такие номера нельзя соотнести с регистрационными номерами в журнале CAS.

Название вещества Регистрационный Название вещества Регистрационный № Bromdiphenhydramine 000118-23-0 Chloroamphetamine 000064-12- Bromocriptine продукт 025614-03-3 Chloroamphetamine AC 999414-02- разрушения Brompheniramine 000086-22-6 Chlorophenylpiperazine 999486 02- (formyl-acridine) Carisoprodol артефакт 999401-02-4 Clonazepam-M (amino) 999175-02- adduct артефакт (desoxo) Название вещества Регистрационный Название вещества Регистрационный Colchicine продукт 999532-02-4 Diethyltryptamine 000061-51- разрушения Cyclophosphamide -HCL 999379-02-1 Diphenidol TMS 999417-02- (MegX) Desmethylclomipramine 999134-02-0 DyphyllineTMS 999446-02- Desmethylclozapine 006104-71-8 Ecgonine methyl ester 106293-60- Desmethyldoxepin (cis) 999516-02-8 Ecgonine methyl ester 999162-02- Desmethyldoxepin (trans) 001225-56-5 Efavirenz AC 999489 02- Desmelhyldoxepin (trans) 999443-02-6 Efavirenz TMS 999505-02- Desmethyltramadol. 0- 999444-02-9 Epinephrine AC 999111-02- 2TMS Desmethyltrimipramine 999019-02-2 Ergonovine AC 999447-02- Dextromethorphan 000125-71-3 Ethacrynic Acid TMS 999227-02- Название вещества Регистрационный Название вещества Регистрационный № Ethyl-2-malonamide, 2- 999418-02-9 Flurazepam-M 002886-65- Ethylamphetamine 000457-87-4 Flurazepam-M (HO- 020971-53- TMS Eucatropine Isomer 2 999518-02-4 Guaifenesin 2TMS 107966-19- TMS (dehydro-) Fenoprofen TMS 999310-02-0 Hexylresorcinol 3TMS 999422-02- (H00C-) ME Flunarizine 052468-60-7 Hydroxychloroquine AC 999512-02- Flunitrazepam 001622-62-4 Hydroxyethylflurazepam 999204-02- Название вещества Регистрационный Название вещества Регистрационный № Isoproterenol 2TMS 999424-02-1 Mephentermine 000100-92- Lamotrigine 2AC 999255-02-6 Mesuximide-M (nor) 001497-17- Levorphanol 0000077-07-6 Methadone-M (EDDP) 999058-02- Levorphanol TMS 999223-02-8 Methamphetamine 000537-46- Lyl70222 999123-02-3 Methcathinone-M (H0-) 005650-44- Mecamylamine 000060-40-2 Methotrimpeprazine 000060-99- Meclofenamic acid 999322-02-0 Methsuximide 000077-41- TMS Mefenamic acid TMS 999324-02-06 Methylaminorex, 4-2AC 999508-02- Mefloquine 053230-10-7 Methlaminorex, 4-AC 999510-02- Название вещества Регистрационный Название вещества Регистрационный Methylenedioxyamphetamine 999479-02-6 Nalorphine 000062-67- Methylenedioxyamphetamine 004764-17-4 Nalorphine 2TMS 999473-02- (MDA) Methylenedioxyethylampheta- 014089-52-2 Naloxone 000465-65- mine Melhylenedioxyethylampheta- 999481-02-6 Naloxone TMS 999427-02- mine AC Melhylenedioxymethampheta- 999480-02-3 Naltrexol, beta- 999406-20- mine AC Methylenedioxymethampheta- 042542-10-9 Naltrexol, beta- 2TMS 999405-02- mine (MDMA) Methylephedrine 000552-79-4 Naltrexol, beta- 3TMS 999520-02- Muconic acid TMS 999166-02-8 Norchlordiazepoxide 999372-02- N,N Dimethyl-5-methoxy- 001019-45-0 Norclozapine 2AC 999135-02- tryptamine N.N-Dimethyltryptamine 000061-50-7 Norclozapine AC 999136-02- N –Acetylprocainamide 999070-02-9 Norcodeine 2AC 999118-02- Название вещества Регистрационный Название вещества Регистрационный Norfenfluramine AC 999120-02-4 Paramethadione 000115-67- Normetanephrine AC 999373-02-3 Pentobarbital 2TMS 052937-68- Normethsuximide TMS 999429-02-6 Pentoxifylline 006493-05- Norpropoxyphene 999079-02-6 Perphenazine TMS 999291-02- продукт разрушения продукт разрушения Norpropoxypheneamide 999080-02-3 Phenacetin AC 999496-02- Norpseudoephedrine 000492-41-1 Phenacetin TMS 999504-02- Norpseudoephedrine 999081-02-6 Phenazopyridine 000094-78- Norpseudoephedrine 999478-02-3 Phenazopyridine AC 999303-02- артефакт Oxcarbamazepine 028721-07-5 Phenolphthalein 2TMS 999292-02- Oxycodone enol 2TMS 999514-02-2 Phentermine AC 999152-02- Название вещества Регистрационный Название вещества Регистрационный № Phenylelhylamine, beta- 000064-04-0 Pyrimethamine 000058-14- артефакт p-Methoxyamphetamine 000064-13-1 Salbutamol 3TMS 999394-02- Probenecid TMS 999294-02-9 Salicylic acid ethylester 000118-61- Procyclidine артефакт 999460-02-5 Secobarbital 2TMS 052937-71- (dehydro) Propylamphetamine AC 999302-02-2 Sulfadimethoxine 000122-11- Pseudoephedrine formyl 999483-02-2 Sulfapyridine 000144-83- артефакт Название вещества Регистрационный Название вещества Регистрационный № Temazepam артефакт-2 020927-53-1 Trihexyphenidyl 000144-11- Tetrahydrocannabinol 001972-08-3 Triprolidine 000486-12- Tetrahydrocannabinol 999529-02-1 Tropacocaine 000537-26- TMS Tetrahydrozoline AC 999398-02-6 Tryplamine 2AC 999352-02- Thiethylperazine 001420-55-9 Venlafaxine TMS 999173-02- (-S02NH) разрушения

 

Похожие работы:

«Полная исследовательская публикация Тематический раздел: Физико-химические исследования. _ Подраздел: Теплофизические свойства веществ. Регистрационный код публикации: 2tp-b36 Поступила в редакцию 10 ноября 2002 г. УДК 537.33 ТЕПЛОФИЗИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ОРГАНИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЕЙ НЕ ИСКАЖЕННЫЕ РАДИАЦИОННЫМ ПЕРЕНОСОМ ЭНЕРГИИ © Габитов Ф.Р., Тарзиманов А.А., Поникарова И.Н. и Шарафутдинов Р.А. Казанский государственный технологический университет. Ул. К. Маркса, 68. г. Казань 420015. Россия. Ключевые...»

«1944 5 января. Распоряжением ВКВШ при СНК СССР окончание 1943/44 учебного года отсрочено до 15 июля, зимние каникулы отменены, начало учебных занятий 1944/45 учебного года перенесено на 15 октября. Летопись. Т. 1. – С. 446. 5 января. Утвержден состав Ученого совета КГУ в количестве 36 человек под председательством ректора К.П.Ситникова и при ученом секретаре М.М.Кравцове. Совету разрешено принимать к защите докторские и кандидатские диссертации, присуждать ученую степень кандидата наук и...»

«Л.Г. Лаврентьева, И.В. Ивонин ОСНОВНЫЕ ЭТАПЫ РАЗВИТИЯ НАУЧНОГО НАПРАВЛЕНИЯ ПО ЭПИТАКСИИ ПОЛУПРОВОДНИКОВ В СФТИ 1. ВВЕДЕНИЕ: ло замечено, что в технологической вакуумированной ФОРМИРОВАНИЕ НАУЧНОГО НАПРАВЛЕНИЯ системе происходит перенос вещества из горячей зоИ КОЛЛЕКТИВА ны в холодную с образованием тонкой пленки арсенида галлия на поверхности кварца. В.А. Преснов В 1950-е гг. было установлено, что оптимальные предложил использовать это явление в технологии параметры полупроводниковых приборов с...»

«Обзор Тематический раздел: Химическая технология. _ Подраздел: Высокомолекулярные соединения. Регистрационный код публикации: po36 Поступила в редакцию 15 декабря 2002 г. УДК 541.64:678.745 (088.8) ПРИМЕНЕНИЕ ПОЛИАКРИЛАМИДНЫХ ФЛОКУЛЯНТОВ ДЛЯ ВОДООЧИСТКИ © Куренков Валерий Фёдорович,1*+ Hans-Georg Hartan2 и Фёдор Иванович Лобанов3 1 Институт полимеров. Казанский государственный технологический университет. Ул. К. Маркса, 68. г. Казань 420015. Россия. E-mail: kuren@cnit.ksu.ras.ru 2 Stockhausen...»

«УДК 557.152.344.042:593.65 ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ ПОЛИПЕПТИДОВ КУНИТЦ-ТИПА АКТИНИИ HETERACTIS CRISPA С БОЛЕВЫМ ВАНИЛЛОИДНЫМ РЕЦЕПТОРОМ ТRPV1: IN SILICO ИССЛЕДОВАНИЕ © 2012 г. Е.А. Зелепуга, В. М. Табакмахер#, В.Е. Чаусова, М.М. Монастырная, М. П. Исаева, Э. П. Козловская Тихоокеанский институт биоорганической химии ДВО РАН, 690022, Владивосток, просп. 100-летия Владивостока, 159 Поступила в редакцию 20.06.2011 г. Принята к печати 19.10.2011 г. Методами молекулярной биологии установлены структуры 31...»

«УДК 540.1:532.7 СТРУКТУРА СВЕРХКРИТИЧЕСКОГО МЕТАНОЛА ПО ДАННЫМ КЛАССИЧЕСКОЙ МОЛЕКУЛЯРНОЙ ДИНАМИКИ И МЕТОДА КАРА–ПАРИНЕЛЛО Н.А. Абакумова1, Е.Г. Одинцова2, В.Е. Петренко2 Кафедра Химия, ФГБОУ ВПО ТГТУ (1); ФГБУН Институт химии растворов им. Г.А. Крестова РАН, г. Иваново (2); vep@isc-ras.ru Ключевые слова и фразы: водородная связь; сверхкритическое состояние; методы молекулярной динамики, Монте-Карло, Кара–Паринелло; функция радиального распределения. Аннотация: Проведен расчет функций...»

«ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ООП 1. Направление подготовки: 240100 ХИМИЧЕСКАЯ ТЕХНОЛОГИЯ Профиль подготовки: Химическая технология органических веществ Квалификация (степень) бакалавр Форма обучения Очная Нормативный срок освоения 4 года Трудоемкость программы 216 зачетных единиц; 8104 часов в том числе: аудиторные занятия 43 зачетные единицы; 1608 часов самостоятельная работа 36 зачетных единиц; 1335 часов Форма итоговой государственной аттестации _защита ВКР Выпускающие подразделения кафедра...»

«БЕЗОПАСНОСТЬ ПРОДУКТОВ Маклаков Н., Дьячков Д. ГБОУ СПО ЯНАО Ямальский полярный агроэкономический техникум Салехард, Россия SAFETY PRODUCTS Maklakov N., D’yachkov D. SBEE SVT YNAD “The Yamal Polar Agricultural and Economic College” Salekhard, Russia Содержание Введение 1–3 Процесс глазирования 1. 3–8 Практическая часть 2. 8 – 10 Органолептическая оценка 2.1 8–9 Физические методы 2.2. 8–9 Химические методы 2.3. 9 – Методы определения продуктов первичного распада белков в 2.3.1. 9 – бульоне...»

«Полная исследовательская публикация Тематический раздел: Физико-химические исследования. Подраздел: Теплофизические свойства веществ. Регистрационный код публикации: 2tp-b18 Поступила в редакцию 15 декабря 2002 г. УДК 622.276.031:66.061.5 РАСТВОРЯЮЩАЯ СПОСОБНОСТЬ СВЕРХКРИТИЧЕСКОГО СО2 К ПРИМЕСЯМ ГИДРОЛИЗНОГО ГЛИЦЕРИНА © Ахунов А.Р.,1 Сабирзянов А.Н.,2 Сагдеев А.А. и Гумеров Ф.М.3 Кафедра теоретических основ теплотехники. Казанский государственный технологический университет. Ул. К. Маркса, 68....»

«GAMTAMOKSLINIS UGDYMAS. ISSN 1648-939X МИНЕРАЛЫ: ПРИРОДНЫЕ СОЕДИНЕНИЯ И ЛАБОРАТОРНЫЕ ИМИТАЦИИ Елена Василевская Белорусский государственный университет, Республика Беларусь Абстракт Рассмотрены способы лабораторного синтеза твердых неорганических веществ по аналогии с процессами, протекающими в природе. Приведены методики синтеза неорганических соединений в гелях в результате реакций со встречной или односторонней диффузией, реализуемые в условиях школьной химической лаборатории. Показано, что...»

«Полная исследовательская публикация Тематический раздел: Физико-химические исследования. Регистрационный код публикации: 2tp-b45 Подраздел: Теплофизические свойства веществ. УДК 536.23. Поступила в редакцию 10 ноября 2002 г. КОЭФФИЦИЕНТ ДИФФУЗИИ ВНУТРЕННЕЙ ЭНЕРГИИ МНОГОАТОМНЫХ ГАЗОВ © Свойский В.З. Центральный аэрогидродинамический институт им. Н.Е. Жуковского. г. Жуковский. Ключевые слова: кинетическая теория теплопроводности, коэффициент диффузии внутренней энергии, коэффициент самодиффузии,...»

«Научные исследования Индукция синтеза коллагена с помощью мезороллера — регенерация или рубцевание? М.С. Ауст (M.C. Aust) С. Джен (S. Jahn) отделение пластической и восстановительной хирургии отделение пластической и восстановительной хирургии Высшей медицинской школы Ганновера (Германия) Высшей медицинской школы Ганновера (Германия) К. Реймерс (K. Reimers) Н. Швайгер (N. Schwaiger) отделение пластической и восстановительной хирургии клиника пластической хирургии Ганновера (Германия) Высшей...»

«Раздел 4 БИОРАЗНООБРАЗИЕ И ОСОБО ОХРАНЯЕМЫЕ ТЕРРИТОРИИ СЕВЕРА Г.Х. Абдуллина*, Т.А. Шарапова**, В.А. Алексюк* К ИЗУЧЕНИЮ ЗООПЛАНКТОНА БАССЕЙНА р. ДЕМЬЯНКА Демьянка – одна из пяти самых крупных по водоносности рек юга Тюменской области, правый приток Иртыша, впадает в него на 318 км от устья. Река берет свое начало на крайнем северо-востоке Омской области, протекает по восточной и северной части Уватского района и до впадения в нее справа р. Восточная Демьянка, на протяжении около 100 км,...»

«532 УДК 543.544 Фторсодержащие органические соединения как компоненты хроматографических и электрофоретических систем Найден С.В., Карцова Л.А. Санкт-Петербургский государственный университет, Санкт-Петербург Поступила в редакцию 22.03.2012 г. Аннотация Обсуждается применение фторсодержащих органических соединений в качестве стационарных фаз, элюентов и их модификаторов в хроматографии и капиллярном электрофорезе. Рассмотрены примеры применения фтороганических соединений при разделении...»

«Белорусский государственный университет Химический факультет Кафедра неорганической химии О.В.Сергеева РЕАКЦИИ В ВОДНЫХ РАСТВОРАХ (СЛОЖНЫЕ ИОННЫЕ РАВНОВЕСИЯ) Учебно-методический комплекс для студентов химического факультета специализации G 1-31 05 01-01-02 (G 1-31 0501-02-02) “Неорганическая химия” и “Химия твердого тела” Минск 2009 3 ПОЯСНИТЕЛЬНАЯ ЗАПИСКА Спецкурс “Реакции в водных растворах (Сложные ионные равновесия)” предназначен для студентов старших курсов химического факультета,...»

«Полная исследовательская публикация Тематический раздел: Химия и технология растительных веществ. _ Подраздел: Химия природных соединений Регистрационный код публикации: 2pс06 Поступила в редакцию 23 июля 2002 года. УДК 615.322:582.457.074 АРАБИНОГАЛАКТАН ЛИСТВЕННИЦЫ – ПЕРСПЕКТИВНАЯ ПОЛИМЕРНАЯ МАТРИЦА ДЛЯ БИОГЕННЫХ МЕТАЛЛОВ © Медведева Светлана Алексеевна,1*+ Александрова Галина Петровна,1+ Дубровина Валентина Ивановна,2 Четверикова Татьяна Давыдовна,3 Грищенко Людмила Анатольевна,1 Красникова...»

«Московский Государственный Университет им. М.В. Ломоносова Геологический факультет Кафедра кристаллографии и кристаллохимии Магистерская работа на тему: Экспериментальное изучение роста кристаллов алмаза в карбонатных растворах-расплавах переменного состава Выполнила: Магистрант 2 года обучения 214 группы Солопова Н.А. Научные руководители: Академик РАН, профессор, д.х.н. Урусов В.С., Заведующий лабораторией ИЭМ РАН, профессор, д.х.н Литвин Ю.А. г. Москва, 2011 год Содержание Аннотация Введение...»

«ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ОБРАЗОВАНИЮ СЫКТЫВКАРСКИЙ ЛЕСНОЙ ИНСТИТУТ — ФИЛИАЛ ГОСУДАРСТВЕННОГО ОБРАЗОВАТЕЛЬНОГО УЧРЕЖДЕНИЯ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ ЛЕСОТЕХНИЧЕСКАЯ АКАДЕМИЯ ИМЕНИ С. М. КИРОВА КАФЕДРА ОБЩЕЙ И ПРИКЛАДНОЙ ЭКОЛОГИИ ХИМИЯ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ Конспект лекций для студентов специальности 280201 Охрана окружающей среды и рациональное использование природных ресурсов очной и очно-заочной форм обучения Самостоятельное учебное электронное издание...»

«Вестник МИТХТ, 2010, т. 5, № 1 ХИМИЯ И ТЕХНОЛОГИЯ НЕОРГАНИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ УДК 546.27:546.66 ПРИМЕНЕНИЕ ДИФРАКЦИОННЫХ МЕТОДОВ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОСТАВА И СТРУКТУРНЫХ ПАРАМЕТРОВ СОЕДИНЕНИЙ СЕМЕЙСТВА ЛАНГАСИТА Е.А. Тюнина, научный сотрудник, И.А. Каурова, аспирант, Г.М. Кузьмичева, профессор, *В.Б. Рыбаков, старший научный сотрудник, **A. Куссон, сотрудник лаборатории,***O. Захарко, сотрудник лаборатории кафедра Физики и химии твердого тела, МИТХТ им. М.В. Ломоносова *Московский государственный...»

«Полная исследовательская публикация Тематический раздел: Препаративная химия. Подраздел: Органическая химия. Регистрационный код публикации: or4 Поступила в редакцию 21 февраля 2001 г ТАУТОМЕРНОЕ СОСТОЯНИЕ И КИСЛОТНО–ОСНОВНЫЕ СВОЙСТВА АЦИЛЬНЫХ ПРОИЗВОДНЫХ 3-АМИНО-1-(2',4',6'-ТРИХЛОРФЕНИЛ)ПИРАЗОЛИН-2-ОНА-5 © Шамс Эль-Дин Хашим Абдель-Хафез, Мовчан Александр Иванович*+ и Чмутова Галина Алексеевна* Кафедра органической химии. Казанский государственный университет. Ул. Кремлевская, 18. г. Казань...»







 
© 2014 www.kniga.seluk.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Книги, пособия, учебники, издания, публикации»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.