WWW.KNIGA.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Книги, пособия, учебники, издания, публикации

 

СЕМИНАР - ПРАКТИКУМ

21 - 25 октября

Новосибирск - 2013

© 1989-2013

Азарова Ирина Николаевна, к.х.н. azarova@econova.nsk.su

gbaram@mail.ru

Барам Григорий Иосифович, д.х.н.

Кожанова Людмила Алексеевна, к.х.н. kozhanova@econova.nsk.su

ЗАО Институт хроматографии "ЭкоНова"

630090, Новосибирск, ул. Инженерная, д. 28 8(383) 207 84 73 Тел.:

Факс: 8(383) 207 84 71 Эл. почта: info@econova.nsk.su Cайт: www.econova.ru ВЭЖХ - 2013 1. Введение Новосибирск – 2013 ВЭЖХ - 2013 Жидкостная хроматография и химия ХИМИЯ

АНАЛИТИЧЕСКАЯ ХИМИЯ

ЖИДКОСТНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ

1- ВЭЖХ - Хроматография и аналитическая химия Золотов Ю.А. (ред.).

Основы аналитической химии. В двух книгах.

Изд. "Высшая школа", Москва, 2004, 860 стр., 17 глав.

Глава "Хроматографические методы" (ЖХ, ГХ, ТСХ, КЭ, СКФХ) – 90 страниц "Хроматография - наиболее часто используемый аналитический метод" (стр.260) 1- ВЭЖХ - Химический анализ Неселективные методы анализа:

амперометрия круговой дихроизм рамановская спектроскопия денситометрия кулонометрия рефрактометрия гравиметрия масс-спектроскопия термография ИК-спектроскопия оптическая дисперсия турбидиметрия поляриметрия пламенная спектроскопия фотометрия калориметрия полярография ЭПР-спектроскопия кондуктометрия радиохимический анализ ЯМР-спектроскопия Селективные методы анализа:

электродный иммунохимический реакционно-селективный анализ анализ анализ 1- ВЭЖХ - Химический анализ Низкоэффективные методы разделения веществ:

адсорбция сублимация диализ разложение дистилляция ультрафильтрация Высокоэффективные методы разделения веществ:

ВЭЖХ - "DEVIDE ET IMPERE" - "Разделяй и властвуй" "Люди, знающие несколько химию, должны наиболее упражняться в количественных разложениях и быть убежденными в том, что познавши их несовершенно, они не могут быть способны ни к какому ученому исследованию" (Berzelius) Йенс Якоб (1779-1848), шведский химик и минералог, иностранный почетный член Петербургской АН. Открыл церий, селен, торий. Создал электрохимическую теорию химического сродства, на ее основе построил классификацию элементов, соединений и минералов. Определил атомные массы 45 элементов, ввел современные химические знаки элементов.

ВЭЖХ - Михаил Семенович Цвет Е.М.Сенченкова. М.С.Цвет - создатель хроматографии./ М., Янус-К, 1997, 440сс.

Е.М.Сенченкова. Рождение идеи и метода адсорбционной хроматографии./ М., Наука, 1991, 228сс.

ВЭЖХ - М.С.Цвет. О новой категории адсорбционых явлений и о применении их к биохимическому анализу. // Труды Варшавского общества естествоиспытателей, 1903, сс. 1-20.





ВЭЖХ - J. Saeks Liquid chromatography Market Intelligence Report Kalorama Information, New York, Liquid chromatography has been one of the most important technologies used in laboratories for many years. Ranking behind pH measurement and balances, it is the third most used analytical technique.

Жидкостная хроматография является важнейшей технологией, применяемой в лабораториях многие годы. После измерения величины рН и взвешивания, она занимает третье место среди наиболее часто используемых аналитических процедур.

ВЭЖХ - М.С.Цвет:

"Подобно световым лучам в спектре различные компоненты сложного пигмента закономерно распределяются друг за другом в столбе адсорбента и становятся доступными качественному и количественному определению. Такой расцвеченный препарат я назвал хроматограммом, а соответствующий метод анализа хроматографическим методом".

M.Tswett. Physical chemical studies on chlorophyll adsorptions.

Berichte der Deutschen botanischen Gesellschaft, 1906, 24, 316- International Union of Pure and Applied Chemistry (IUPAC):

"Хроматография - физический метод разделения, в котором разделяемые компоненты распределяются между двумя фазами, одна из которых неподвижна, а другая движется в заданном направлении".

Ettre L.S. (Ed.). Nomenclature for Chromatography. IUPAC Recomendations.

Pure & Appl. Chem., 1993, V. 65, No. 4, pp. 819-72.

ВЭЖХ - Научный совет РАН по хроматографии:

"Хроматография наука о межмолекулярных взаимодействиях и переносе молекул или частиц в системе несмешивающихся и движущихся относительно друг - метод разделения смесей веществ или частиц, основанный на различии в скорости их перемещения в системе несмешивающихся и движущихся относительно друг друга фаз;

- процесс дифференцированного многократного перераспределения веществ или частиц между несмешивающимися и движущимися относительно друг друга фазами, приводящий к обособлению концентрационных зон индивидуальных компонентов исходных смесей этих веществ Даванков В.А. (Ред.). Хроматография. Основные понятия. Терминология.

Сборники научно-технической информации. Выпуск 114. М., 1997, 48 с.

ВЭЖХ - По назначению: аналитическая, препаративная, пилотная, промышленная По конфигурации разделяющей системы: колоночная, многоколоночная, планарная, бумажная, тонкослойная, мембранная, непрерывная, циркуляционная, многомерная, перколяционная По размеру колонки: капиллярная, микроколоночная, narrow-bore, open capillary По агрегатному состоянию фаз: твердо-жидкостная, жидко-жидкостная, мицеллярная, сверхкритическая (флюидная), полифазная По способу перемещения сорбата: элюентная, вытеснительная, фронтальная, электрохроматография По составу подвижной фазы: изократическая, ступенчатая, градиентная С программированием: состав элюента, температура, давление, скорость потока По полярности фаз: нормально-фазовая, обращенно-фазовая По механизму разделения: распределительная, ионообменная, эксклюзивная (ситовая, эксклюзионная, гель-проникающая), ион-парная, адсорбционная, аффинная, ионная, лигандообменная, гидродинамическая, фракционирование в поперечном поле сил, хиральная, гидрофобная, гидрофильная По способу детектирования: одноканальное, многоканальное, прямое, непрямое (косвенное), с предколоночной и постколоночной дериватизацией, разрушающее и неразрушающее По эффективности: ЖХ низкой, высокой, сверхвысокой эффективности По давлению: ЖХ низкого, среднего, высокого, сверхвысокого давления По скорости разделения: ЖХ медленная, быстрая, сверхбыстрая Прочее:





ВЭЖХ - 1964 - 1991 гг. Научный совет АН СССР по хроматографии 1991 - 1998 гг. Научный совет РАН по хроматографии 1998 - 2010 гг. Научный совет РАН по хроматографии и адсорбции Научный совет РАН по физической химии Институт физической химии и электрохимии им. А.Н.Фрумкина РАН Председатель Совета - академик Цивадзе Аслан Юсупович - секция "Физикохимия поверхности, кинетика и динамика обменных процессов" Председатель Секции - д.х.н. Буряк Алексей Константинович Научный совет РАН по аналитической химии (с 1970 г.) Председатель Совета - академик Золотов Юрий Александрович - секция "Методы аналитической химии" Председатель Секции - чл.-корр. РАН Спиваков Борис Яковлевич - комиссия по хроматографии Председатель Комиссии - чл.-корр. РАН Шпигун Олег Алексеевич ВЭЖХ - 1970-2012 гг. - выпущено более 1000 книг на английском и русском языках Список научных журналов, в названии которых есть слово Chromatography:

Acta Chromatographica Chinese Journal of Chromatography Journal of High Resolution Chromatography Chromatographic Science Series Chromatography Research International International Journal of Biochromatography The Journal of Chromatographic Science ISRN Chromatography Ежегодно в мире проводится более 15 крупных международных симпозиумов по различным вопросам жидкостной хроматографии ВЭЖХ - ВЭЖХ - Richard Kuhn Archer J.P. Martin & Richard L.M. Synge 1938 - Исследование 1952 - Распределительная хроматография каротиноидов ВЭЖХ - Разработка и оптимизация методик анализа DryLab® 2010 v. 4.0 Molnr-Institute for applied chromatography, ChromSword® ChromSword Group, Riga, Latvia http://www.chromsword.com LC Simulator Advanced Chemistry Development, Inc., Toronto, Canada ChromGenius http://www.acdlabs.com AutoChrom MDS Интерактивные интернет-семинары (webinars) http://www.chromacademy.com http://www.chromedia.org ВЭЖХ - ВЭЖХ - Дегазатор Коллектор фракций ВЭЖХ - Сигнал детектора ВЭЖХ - ВЭЖХ - ВЭЖХ - ЗАО "Аквилон" (Москва), НПО "Химавтоматика" (Москва), ЗАО "Научприбор" (Орел), НПФ "Люмекс" (Санкт-Петербург), ООО "Хромос" (Дзержинск), ЗАО Институт хроматографии "ЭкоНова" (Новосибирск) ВЭЖХ - Аналитические лаборатории государственных служб 3.

Криминалистическая лаборатория ФСБ 12. Лаборатория Облэнерго 5. Пищевая лаборатория Роспотребнадзора 14. Лаборатория Водоканала 6. Ветеринарная лаборатория Минсельхоза РФ 15. Лаборатория наркодиспансера 7. Пищевая лаборатория Ростехрегулирования 16. Лаборатории Областных больниц 6. Химические заводы (пестициды, красители и пр.) 13. Лаборатории в НИИ ВЭЖХ - 2. Формальная хроматография ВЭЖХ - ВЭЖХ - Концентрация вещества, C VR - объем удерживания вещества TR - время удерживания вещества - стандартное отклонение гауссова пика h - высота гауссова пика S - площадь гауссова пика ВЭЖХ - ВЭЖХ - А10%h=b10%h/a10%h - асимметрия пика на уровне 10%h AS=(a+b)5%h/2a5%h - асимметрия пика на уровне 5%h ВЭЖХ - Хроматограмма - кривая, отображающая зависимость величины концентрации вещества в вытекающей из колонки подвижной фазе от объема вытекшей фазы или от времени V0 (T0) - мертвый объем (время) колонки; равен полному объему находящейся в колонке подвижной фазы (объем удерживания несорбируемого вещества) VR (TR) - объем (время) удерживания вещества ВЭЖХ - k' - фактор удерживания вещества (емкостное отношение) 1,2=k'2/k'1 - фактор разделения веществ 1 и 2 (селективность) ВЭЖХ - ВЭЖХ - Теоретические

КОЛОНКА

ВЭЖХ - ВЭЖХ - ВЭЖХ -

КОЛОНКА

ВЭЖХ - ВЭЖХ - L.R.Snyder, J.J.Kirkland, J.W.Dolan. Introduction to modern liquid chromatography. // Wiley, 2010, p. ВЭЖХ - ВЭЖХ - Компьютерная программа "Генератор хроматограмм":

Концентрация ВЭЖХ - Компьютерная программа "Генератор хроматограмм":

ВЭЖХ - ВЭЖХ - S1=S2 (площади пиков вычислены в интервале 4) ВЭЖХ - RS=1 (4) - площади пиков вычислены в интервале ВЭЖХ - ВЭЖХ - ВЭЖХ - ВЭЖХ - Размеры зерна адсорбента (Waters Corp., 2004) ВЭЖХ - Элюент: H2O – CH3CN (35:65) Вещество: Нафталин ВЭЖХ - Performance (Pressure, Performance, Pleasure, P...) Performance (Pressure) Chromatography UHPLC – Ultra High Pressure Liquid Chromatography ВЭЖХ - Скорость и эффективность UPLC™-анализа ВЭЖХ -

SUHPLC

Jerkovich A.D., Mellors J.S., Jorgenson J.W. LC-GC North America. 2003. V. ВЭЖХ -

SUHPLC

Разделение пептидов (триптический гидролизат овальбумина) в градиентном режиме Jerkovich A.D., Mellors J.S., Jorgenson J.W. LC-GC North America. 2003. V. ВЭЖХ - Zahlsen K., Aamo T., Zweigenbaum J. Screening Drugs of Abuse by LC/MS.

Agilent Technologies, Inc., "The laboratory at St. Olav Hospital (University Hospital of Trondheim, Norway) routinely analyzed 800,000 drugs-of-abuse urine samples in 2003, using 24 Agilent 1100 LC/MS systems.

In 2004 the number is approaching 1 million" Agilent 1290 Infinity LC-MS-MS – до 2000 анализов в сутки или 730,000 анализов в год. Для выполнения 1 миллиона анализов в течение года достаточно 2-х хроматографов ВЭЖХ -

WATERS

ACQUITY

SAMPLE

ORGANIZER

ВЭЖХ - ВЭТТ, мкм ВЭТТ, мкм ВЭЖХ - P - давление на входе в колонку, МПа F - скорость потока, мл/мин dp - диаметр частиц сорбента, мкм Примеры вычисления:

1. =2 мм; L=75 мм; dp=5.0 мкм; =1 спз; F=0.2 мл/мин; P 3 МРа 2. =2 мм; L=75 мм; dp=1.7 мкм; =1 спз; F=0.2 мл/мин; P 26 МРа 3. =2 мм; L=75 мм; dp=1.7 мкм; =1 спз; F=2.0 мл/мин; P 275 МРа ВЭЖХ - ВЭЖХ - где T - абсолютная температура (оК); а и b - константы (обычно a 0) В обращенно-фазовой хроматографии "чувствительность" удерживания в единицах k' при k' 10 составляет около 1 на 10С ВЭЖХ - Двойная спираль ДНК: формы A, B и Z Ширина двойной спирали: 2.2-2.4 нм Длина каждого нуклеотида: 0.33 нм ВЭЖХ - Элюент: этилацетат - CH3CN - (C2H5)3N - CH3COOH (45:44.9:10:0.1) T.Andersen et al. J.Chromatogr. A, 2004, 1029, 49– ВЭЖХ - Wiese S. A General Strategy for Performing Temperature Programming in HPLC. Dissertation. University, Duisburg-Essen, 2011.

ВЭЖХ - ВЭЖХ - ВЭЖХ -

МИКРОКОЛОНОЧНАЯ И ОБЫЧНАЯ ВЭЖХ

МК ВЭЖХ ВЭЖХ

ВЭЖХ - Design less hazardous chemical syntheses Design safer chemicals and products Increase energy efficiency Avoid chemical derivatives 9. Use catalysts, not stoichiometric reagents Design chemica ls and products Analyze in real time to prevent pollution Minimize the potential for accidents *) Anastas P.T., Warner J.C. Green Chemistry: Theory and Practice. Oxford University Press, New York, 1998.

Ronald E. Majors R.E., Raynie D. The Greening of the Chromatography Labo ratory.

LC-GC North America, 2011, V. 29, No. 2, pp,118-134.

ВЭЖХ - Y.Saito, K.Jinno, T.Greibrokk. J. Sep. Sci. 2004, 27, 1379– ВЭЖХ - ВЭЖХ - Взаимодействие [Адсорбент Адсорбат] Адсорбент-Конкурент + Аналит Адсорбент-Аналит + Конкурент ВЭЖХ - ВЭЖХ - ВЭЖХ - ВЭЖХ - Распределение вещества между двумя несмешивающимися растворителями ВЭЖХ - Трёхточечное ("сильное") Двухточечное ("слабое") Взаимодействие: хиральное (стереоспецифическое) Адсорбент: хиральный (оптически активный) Растворитель: вода, органический растворитель Конкуренты: ионная сила, pH, полярность и пр.

ВЭЖХ - ВЭЖХ - Эксклюзионная хроматография ВЭЖХ - Адсорбционная хроматография ВЭЖХ - Распределительная хроматография ВЭЖХ - Распределительная хроматография ВЭЖХ - Распределительная хроматография

ГЕКСАН

ГЕКСАН

ВЭЖХ - Octadecyl Разделение гидрофильных веществ методом ион-парной хроматографии.

CH2 CH2CH2NO2 Фаза с низкой емкостью; селективна к ароматическим соединениям.

ВЭЖХ - Обращенные фазы на основе силикагеля Элюотропный ряд (повышение силы элюента):

H2O MeOH АCN EtOH Тетрагидрофуран Пропанол Диоксан прозрачные в УФ области спектра растворители ВЭЖХ - Ph-H Ph-CH3 Ph-CH2CH3... Ph-CH2(CH2)25-30CH Хорошая корреляция величины удерживания со значением константы распределения вещества в системе "октанол-вода" ВЭЖХ - Р - коэффициент распределения в системе "вода : н-октанол" B- ACD/ChemSketch (Freeware) www.acdlabs.com ВЭЖХ - ВЭЖХ - Поверхность гидрофобного контакта ВЭЖХ - Поверхность гидрофобного контакта ВЭЖХ - ВЭЖХ - Хроматография ионов на обращенной фазе

R N H 3 R NH 2 H R COOH R COO H

ВЭЖХ - ВЭЖХ - Мягкие фазы на основе целлюлозы, декстрана, полиакриламида, полистирола и др.

для колоночной ЖХ низкого давления (Рмакс0.2 МПа) Полужесткие фазы на основе поливинилового спирта, полистирола для ВЭЖХ на коротких колонках (Рмакс до 10 МПа) Жесткие фазы на основе окисей кремния, алюминия, циркония, стекла (Рмакс до 150 МПа) ВЭЖХ - ВЭЖХ - ВЭЖХ - Y. Saito et al. Anal. Chem., 2003, 75, 5525–5531 R.K. Marcus et al. J. Chromatogr. A, 2003, 986, 17–31.

ВЭЖХ - ВЭЖХ - ВЭЖХ - Диасфер-250-СТ (5 мкм) Золотистый стафилококк ВЭЖХ - ВЭЖХ - Ding W., Scheer L. Syringe Filter Efficiency and the Effect of Filtration on HPLC Column Life.

European BioPharmaceutical Review, 2004, Autumn ВЭЖХ - Si(OC2H5)4 + H2O xSiO2 yH2O

O O OH OH OH OH

OO O O O O O O O O

O O O O O O

O O O OO O O O O

O O OH OH OH OH

ВЭЖХ - для ВЭЖХ удельная поверхность: 300 м2/г Nucleosil 100-5, LiChrosorb Si 60, LiChrospher Si 100, Zorbax BP-Sil и т.д.

ВЭЖХ - ВЭЖХ - Электронная микроскопия (сканирующая и просвечивающая) частиц сорбентов Sanchez C., Farkas T. The Latest Trend in LC Analysis: UHPLC Core-Shell Particles. American Lab., 2012, V. 44, No. 3, pp. 11-14.

ВЭЖХ - Sanchez C., Farkas T. The Latest Trend in LC Analysis: UHPLC Core-Shell Particles. American Lab., 2012, V. 44, No. 3, pp. 11-14.

ВЭЖХ - ВЭЖХ -

OH R OH R OH R OH

ВЭЖХ - ВЭЖХ - ВЭЖХ - ВЭЖХ - Привитые обращенные фазы на основе силикагеля CH2 (CH 2)16 CH3 Разделение гидрофильных веществ методом ионOctadecyl ВЭЖХ - Привитые обращенные фазы на основе силикагеля Результаты опроса журнала LC-GC (2009 г.) ВЭЖХ - Обращенные фазы на основе силикагеля Nucleosil 100-5 C18; Nucleosil 100-5 C18 PAH; Nucleosil 100-5 C18 AB LiChrosorb RP18; LiChrospher RP Количество ковалентно связанного углерода:

Предельная емкость фаз С18 для веществ с M=100- составляет 200 мг вещества на 1 г адсорбента Все фазы стабильны в растворах с рН 28 (36) ВЭЖХ - Радикалы –(СН2)17-СН3 на поверхности силикагеля ВЭЖХ - ВЭЖХ - ВЭЖХ - ВЭЖХ - ВЭЖХ -

СРАВНЕНИЕ ОБРАЩЕННЫХ ФАЗ

• урацил - маркер мертвого объема колонки;

• N,N-диметиланилин (N) - основной аналит;

• 4-бутилбензойная кислота (B) - кислый аналит;

Величина k' вычислялась для всех пиков как t0 - время удерживания урацила ("мертвое" время) ВЭЖХ -

СРАВНЕНИЕ ОБРАЩЕННЫХ ФАЗ

ВЭЖХ - ВЭЖХ - FICTION: Superficially-porous particles are more efficient than sub-2 m porous particles FACT: Smaller particles provide higher efficiency/peak capacity than larger particles Under these test conditions the Kinetex column is exhibiting peak shapes indicativ of olumn overload © 2008, Waters http://www.waters.com/waters/promotionDetail.htm?id=10195479&xc&locale=ru_RU Shoikhet K., Engelhard H. A Photometric Flow Measurement Method for Characterisation of HPLC Pump.

Chromatographia, 1994, No. 7/8, V. 38, pp. 421-430.

ВЭЖХ - "Несиликагельные" обращенные фазы ВЭЖХ - Хроматография белков ВЭЖХ - ВЭЖХ - ВЭЖХ - ВЭЖХ - Важнейшее преимущество метода ЖХ перед ГХ:

возможность изменения селективности путем изменения состава подвижной фазы Обращенно-фазовая, ионообменная, ион-парная, гидрофобная, эксклюзионная, хиральная...

ВЭЖХ - Неподвижная фаза ВЭЖХ - Растворители для обращенно-фазовой ВЭЖХ Научно-производственный кооператив "КРИОХРОМ" (С.-Петербург, Россия) ВЭЖХ - Растворители для обращенно-фазовой ВЭЖХ ВЭЖХ - ВЭЖХ - ВЭЖХ - Dolan J.W. Selectivity in RP LC Separations, Part I: Solvent-Type Selectivity.

LC-GC North America, 2010, v.28, No.12, pp.1022- ВЭЖХ -

КОНКУРЕНТЫ

ВЭЖХ - ВЭЖХ - ВЭЖХ - ВЭЖХ - ВЭЖХ - Колонка:

Скорость потока: 1 мл/мин ВЭЖХ - Колонка:

Скорость потока: 1 мл/мин ВЭЖХ - Колонка:

Скорость потока: 1 мл/мин ВЭЖХ - Chen Y. et al. Optimum concentration of trifluoroacetic acid for reversed-phase liquid chromatography of peptides revisited.

J. Chromatogr. A, 1043 (2004) 9– ВЭЖХ - ВЭЖХ - A230, е.о.п.

Элюент: CH3OH : H2O : 0.1 M (But)4N H2PO4, pH 6.8=50:40:10 O2 N NO Скорость потока: 280 мкл/мин Давление: 5 МПа Температура: 45С Образец: 3 мкл раствора веществ в элюенте ВЭЖХ - Модификатор: бромид триметилоктадециламмония Элюент: H2O - CH3CN - 16 мМ фталат натрия, pH 8.9 (80:10:10) Образец: 10 мкл натриевых солей (по 10 мг/мл каждой в воде) Г.И.Барам, А.Л.Верещагин, Л.П.Голобокова. Ж.аналит. химии. 1999. Т.54. №9. С.962- ВЭЖХ - Хроматография ионов на обращенной фазе

R COOH R COO H R N H 3 R NH 2 H

ВЭЖХ - Хроматография ионов на обращенной фазе ВЭЖХ - ВЭЖХ - Hydrophilic Interaction LIquid Chromatography (HILIC) ВЭЖХ - Hydrophilic Interaction LIquid Chromatography (HILIC) Колонка: 4х250 мм; Nucleodur-100-5 HILIC Элюент: MeCN - 5 мМ CH3COONH4 (80:20) Температура: 25 °C Детектор: УФ, 254 нм Пики: 1- Тимин 2- Урацил 3- Аденин 4- Цитозин 5- Гуанозин ВЭЖХ - ВЭЖХ - Элюенты ВЭЖХ - ВЭЖХ - Скорость и эффективность UPLC™-анализа ВЭЖХ - 6- ВЭЖХ - 6- ВЭЖХ - 6- ВЭЖХ - ВЭЖХ - 6- ВЭЖХ - ВЭЖХ - ВЭЖХ - ВЭЖХ - ВЭЖХ - ВЭЖХ - 6- ВЭЖХ - ВЭЖХ - 6- ВЭЖХ - 6- ВЭЖХ - 6- ВЭЖХ - ВЭЖХ - ВЭЖХ - Хроматограммы триптического гидролизата белков Takahashia N., Takahashia Y., Putnama F.W. J. Chromatogr., 266 (1983) 511- ВЭЖХ - Элюенты ВЭЖХ - стали, РЕЕК, тефлона... (или 12Х18Н10Т), РЕЕК, стекла...

Колонка хроматографа "Милихром А-02" (2 х 75 мм) ВЭЖХ - ВЭЖХ - Дополнительный 2 дополнительных входных фильтра дополнительный ВЭЖХ - ВЭЖХ -

НАБОР В КАМЕРУ ВЫДАВЛИВАНИЕ ИЗ КАМЕРЫ

ВЭЖХ - Относительная скорость перемещения плунжера ВЭЖХ -

ВЫДАВЛИВАНИЕ

ВЭЖХ - Устройство головки плунжерного насоса ВЭЖХ - Плунжерный насос Agilent 1290 Infinity LC ВЭЖХ -

НАСОСЫ ДЛЯ ВЭЖХ

Устройство плунжерного насоса Agilent 1290 Infinity LC 6- ВЭЖХ - Шприцевый насос хроматографа "Милихром А-02" ВЭЖХ - ВЭЖХ - Предохранительный ВЭЖХ - ВЭЖХ -

ДРУГИЕ СПОСОБЫ ДЕГАЗИРОВАНИЯ:

ВЭЖХ - ВЭЖХ - Дозирование раствора Инжектирование раствора Дозирование раствора ВЭЖХ - Дозирование раствора образца Инжектирование раствора образца

КОЛОНКА

ВЭЖХ - ВЭЖХ - ВЭЖХ - ВЭЖХ - ВЭЖХ -

I II III

ВЭЖХ - Эффективность VR - объем удерживания И - стандартное отклонение зоны после инжектора С - стандартное отклонение зоны после соединительных капилляров Д - стандартное отклонение зоны после детектора ВЭЖХ - WN=5000=21 мкл; WN=3500=24 мкл; WN=2100=32 мкл ВЭЖХ - Размывание концентрационных зон ВЭЖХ - Хроматограф: "Милихром А-02" Колонка: 2х75 мм, Nucleosil 100-5 C Элюент: Вода:Метанол (25:75) Скорость потока: 150 мкл/мин Образец: 5 мкл раствора изопропилбензола, нафталина, бифенила, В обращенно-фазовой хроматографии "чувствительность" удерживания в единицах k' при k' 10 составляет до 0.1 на 1оС ВЭЖХ - ВЭЖХ - Коллектор фракций ВЭЖХ - ИК-спектроскопия пламенная спектроскопия турбидиметрия поляриметрия иммунохимический анализ фотометрия кондуктометрия проточно-инжекционный анализ электронная спектроскопия круговой дихроизм радиохимический анализ ЭПР-спектроскопия кулонометрия рамановская спектроскопия ЯМР-спектроскопия ВЭЖХ - ВЭЖХ - ВЭЖХ - 1. Селективность (избирательность) 3. Чувствительность (шум сигнала) 4. Быстродействие (постоянная времени) 5. Стабильность во времени (дрейф сигнала) 6. Потребительские характеристики:

ВЭЖХ - ВЭЖХ - Поглощение раствора вещества при длине волны прямо пропорционально концентрации вещества ВЭЖХ - ВЭЖХ - 50 000 молекул растворителя ВЭЖХ - ВЭЖХ -

НАЗВАНИЕ СТРУКТУРА

ВЭЖХ - А- моноэнергетическая спектральная линия поглощения атома.

В- спектральная одноэлектронная полоса поглощения молекулы.

С- спектральная одноэлектронная полоса поглощения молекулы, уширенная в результате внутри- и межмолекулярных взаимодействий.

D- спектральная кривая (спектр вещества) как сумма трех полос поглощения 1, 2 и 3.

ВЭЖХ - Концентрация вещества: 0.04 мг/мл Растворитель: [CH3CN]:[H2O]:[1 М CH3COONa, рН 5.5]=100:100: Спектрофотометр: детектор хроматографа "Милихром А-02" ВЭЖХ - Растворители для диапазона длин волн 190-350 нм 2. Ацетонитрил (190-350 нм) 3. Метанол, этанол, пропанол, изопропанол (200-350 нм) 4. Тетрагидрофуран, диоксан (210-350 нм) 5. Ацетон (280-350 нм) 6. Хлороформ, хлористый метилен (250-350 нм) 7. Диэтиловый эфир (230-350 нм) 8. Пентан, гексан, гептан (200-350 нм) ВЭЖХ - ВЭЖХ - ВЭЖХ - рКа=5; С0=0.0001 М; RCOO-=10000; RCOOH=15000; l=1 cм Если известны величины RCOO-, RCOOH и рКа, то для любого значения рН можно вычислить значение оптической плотности ВЭЖХ - Материальный баланс в хроматографии

ОБРАЗЕЦ ПИК

Количество вещества в образце равно количеству вещества в соответствующем ему хроматографическом пике где Qs - количество вещества в введенном в колонку образце Сs - концентрация вещества в образце;

С - текущая концентрация вещества в элюате ВЭЖХ -

ОБРАЗЕЦ

Концентрация ВЭЖХ - Фотометр с Hg-лампой низкого давления ( = 254 нм) УФ-фильтр ВЭЖХ - 4- полупрозрачное плоское зеркало ВЭЖХ - 3- заслонка, перекрывающая световой поток для измерения темнового тока 4- проточная измерительная ячейка 5- дифракционная решетка 6- линейка (матрица) фотодиодов ВЭЖХ - ВЭЖХ - Сигнал детектора Концентрация ВЭЖХ - Сигнал детектора ВЭЖХ - ВЭЖХ - Постколоночная деривативатизация ВЭЖХ - ВЭЖХ - Модификатор: триметилоктадециламмония бромид Элюент: H2O - CH3CN - 16 мМ фталат натрия, pH 8.9 (80:10:10) Образец: 10 мкл натриевых солей (по 10 мг/мл каждой в воде) Г.И.Барам, А.Л.Верещагин, Л.П.Голобокова. Ж.аналит. химии. 1999. Т.54. №9. С.962- ВЭЖХ - ВЭЖХ - ВЭЖХ - Общие рекомендации для минимизации потери вещества при работе с образцами, концентрация аналита в которых составляет менее 10 мг/л 1. Для гидрофобных аналитов следует использовать посуду из стекла 2. Для гидрофильных аналитов следует использовать посуду из полимерных материалов (фторопласты, полипропилен) 3. Коэффициент заполнения посуды раствором образца должен быть максимально большим 4. С окисляемыми аналитам исследует работать в инертной атмосфере (аргон) или в присутствии антиокислителей 5. С фоточувствительными аналитами следует работать в темной или непрозрачной посуде 6. С термолабильными аналитами следует работать при пониженной температуре 7. Хранить растворы образцов следует при низких температурах в герметичной посуде; водные растворы лучше хранить в замороженной виде ВЭЖХ - Состав растворителя для пробы должен обеспечивать рН раствора пробы равен рН элюента А минимальное содержание органического растворителя (для ОФ ВЭЖХ) отсутствие воды (для НФ ВЭЖХ) ионная сила растворителя минимальная (для ионообменной ВЭЖХ) концентрация детергентов в растворе должно быть минимальной ЭкоНова' ВЭЖХ - Адсорбция адсорбированных целевых адсорбированных повторного ВЭЖХ - ВЭЖХ - ВЭЖХ - Прямое определение тетрациклина в сыворотке крови

OH OH OH

HO OH OH OH

LiChrospher® ADS (Merk KGaA, Германия) ADS = Alkyl-DIOL-Silica Внешняя поверхность - DIOL Внутренняя поверхность - С4, С8 или С Размер пор - 6 нм; диаметр частиц - 25 мкм ВЭЖХ -

ФИЛЬТРОВАНИЕ ЦЕНТРИФУГИРОВАНИЕ

ВЭЖХ - ЭкоНова' ВЭЖХ - Концентрирование растворов упариванием ВЭЖХ - ВЭЖХ - ВЭЖХ - Определение веществ в сложных образцах Фенобарбитал, бензонал, ламиктал, дифенин, Фенобарбитал, бензонал, ламиктал, дифенин, этосуксимид, карбамазепин и метотрексат в крови ВЭЖХ - Определение веществ в сложных образцах Экстракция клоназепама ВЭЖХ - ВЭЖХ - Важнейшие области применения ВЭЖХ контролируемых Контроль качества лекарств Токсикология Экология Химическая безопасность продовольствия Оборот наркотиков Фармакология ВЭЖХ - определить концентрацию вещества N ВЭЖХ - Отсутствие "универсальных" методик анализа Каждому веществу - своя "уникальная" методика Калибровка хроматографа перед анализом Хроматограф - "черный" ящик Многократное повторение анализа Доверие только к усредненным результатам ВЭЖХ -

AMPICILLIN SODIUM

Определение основного вещества и примесей:

- колонка 4.6х250 мм с обращенной фазой С18 (5 мкм) - градиентное и изократическое элюирование (60 мин) - УФ-детектирование при =254 нм ВЭЖХ -

AMPICILLIN SODIUM

элюент А: СН3СООН - 0.2 М КН2РО4 - ACN - Н2О = (0.5:50:50:899.5);

элюент В: СН3СООН - 0.2 М КН2РО4 - ACN - Н2О = (0.5:50:400:549.5);

раствор 1: 31.0 мг субстанции в 50 мл элюента А;

раствор 2: 31.0 мг субстанции в 10 мл элюента А;

раствор 3: 27.0 мг безводного ампициллина в 50 мл элюента А;

раствор 4: 2.0 мг цефрадина в 50 мл элюента А;

раствор 5: смесь 1 мл раствора 3 с 20 мл элюента А;

раствор 6: смесь 1 мл раствора 5 с 25 мл элюента А;

раствор 7: смесь 5 мл раствора 4 с 5 мл раствора №3;

раствор 8: смесь 1 мл раствора 3 с 20 мл элюента А);

раствор 9: 200 мг субстанции в 1 мл воды греть при 60оС 1 час ВЭЖХ -

AMPICILLIN SODIUM

- кондиционирование колонки (1 час) - анализ раствора 8 (1 час) - контрольная хроматография без образца (1 час) - анализ раствора 5 (1 час) - корректировка программы элюирования, если Rs3 (1 час) - анализ раствора 6 (1 час) - 6 анализов раствора 1 (6 часов) - по одному анализу растворов 2, 3 и 9 (3 часа) - обработка результатов (1 час) ВЭЖХ - Судебно-медицинская экспертиза, наркологический контроль, ВЭЖХ - ВЭЖХ - до 2000 анализов в сутки или 730,000 анализов в год для выполнения 1 миллиона анализов в год достаточно 2-х хроматографов базы данных ВЭЖХ/МС-МС включают в себя до чувствительность анализа на уровне концентраций ВЭЖХ - Baker J.K., Skelton R.E., Ma C-Y. Identification of Drugs by HPLC with Dual Wavelength Ultraviolet Detection. J.Chromatogr., 1979, v.168, 417.

Jinno K., Hayashida M., Watanabe T. Computer-Assisted Liquid Chromatography for Automated Qualitative and Quantitative Analysis of Toxic Drugs. J.Chromatogr.Sciences, 1990, v. 28, 367.

Bogusz M., Wu M. Standartized HPLC/DAD System, Based on Retention Indices and Library, Applicable for Systematic Toxicological Screening. J.Analyt. Toxicology, 1991, v.15, 188.

Зенкевич И.Г. Формирование базы данных по индексам удерживания лекарственных веществ в обращенно-фазовой ВЭЖХ. Ж.прикладной химии, 1994, т.67, №11, 1877.

Koves E.M. Use of HPLC-DAD in Forensic Toxicology. J.Chromatogr. A, 1995, v.692, 103.

Maier R.D., Bogusz M. Identification Power of Standardized HPLC-DAD System for Systematic Toxicological Analysis. J.Analyt. Toxicology, 1995, v.19, 79.

Gaillard Y., Pepin G. Use of HPLC with Photodiodearray UV Detection for the Creation of a Compound Library. Application to Forensic Toxicology. J.Chromatogr. A, 1997, v.763, 149-163.

Elliot S.P., Hale K.A. Applications of an HPLC-DAD Drug-Screening System Based on Retention Indeces and UV Spectra. J.Analyt. Toxicology, 1998, v.22, 279.

Lambert W.E., Van Bocxlaer J.F., De Leenheer A.P. Potential of HPLC-DAD in Forensic Toxicology. J.Chromatogr. B, 1997, v.689, 45.

Herzler M., Herre S., Pragst F. Selectivity of Substance Identification by HPLC–DAD in Toxicological Analysis using a UV Spectra Library of 2682 Compounds. J.Analyt. Toxicology, 2003, v.27, 233-242.

ВЭЖХ - Сигнал детектора Концентрация ВЭЖХ - ВЭЖХ - R=А/А ВЭЖХ - 0. 0. 0. 0. ВЭЖХ - ВЭЖХ - ЗАО Институт хроматографии "ЭкоНова" (Новосибирск) ВЭЖХ - ВЭЖХ - (данные по 48 хроматографам "Милихром А-02") Спектральные отношения бенз[а]пирена R = S/S 0.690.02 1.220.02 0.800.03 1.150.03 0.330. ВЭЖХ - ВЭЖХ - ВЭЖХ - Оптическая плотность, е.о.п.

ВЭЖХ - о-Нитроанилин ВЭЖХ - о-Нитроанилин № ФР.1.31.2003.00950 в Федеральном реестре методик выполнения измерений ВЭЖХ - Оптическое поглощение, е.о.п.

ВЭЖХ - Сульфацил-натрий Фолиевая кислота ВЭЖХ - ВЭЖХ - ВЭЖХ - Идентификация пиков по спектральным параметрам ВЭЖХ - Сигнал детектора ВЭЖХ - Определение наркотиков в экстракте из мочи ВЭЖХ - Сравнение многокомпонентных образцов ВЭЖХ - ВЭЖХ - Хроматограмма как "отпечаток пальца" ВЭЖХ - Хроматографические и спектральные параметры пиков ВЭЖХ - ВЭЖХ - ВЭЖХ - Диагностика заболеваний человека по "Диагностика заболеваний методом высокоэффективной жидкостной хроматографии сыворотки крови".

ООО "Медицинская диагностика" (г. Нижний Новгород) РАЗРЕШЕНИЕ Росздравнадзора РФ ФС№ 2008/246 от 18 ноября 2008 г.

"...хроматограммы образца сыворотки крови подвергаются математической обработке с помощью программы "Diastat". Метод обработки основан на анализе гладких энтропийных многообразий. Метод описан в книге:

Панченков А.Н. Энтропия. Нижний Новгород, Изд-во ИНТЕЛСЕРВИС, 1999.

ВЭЖХ - ФГУ "Московский научно-исследовательский онколонаучно- онкологический институт им. П.А. Герцена" (декабрь 2007 г.) ЭкоНова' микроколоночной ВЭЖХ ЭкоНова' применения ВЭЖХ в медицине отсутствие унифицированных методик анализа дорогие расходные материалы (колонки, элюенты) дорогостоящая аппаратура отсутствие квалифицированных специалистов ЭкоНова' колонка – 4,6х250 мм (70-85 пиков) Переход от колонки 4,6х250 мм к колонке 2х75 мм:

экономия элюента в 10 -20 раз увеличение чувствительности анализа в 10 -20 раз уменьшение времени анализа в 3 раза снижение давления в 3 раза ЭкоНова' Микроколоночная хроматография многоканальное детектирование (8) ЭкоНова' фармакокинетические исследования, терапевтический лекарственный мониторинг диагностические исследования (определение эндогенных метаболитов в биологических контроль качества лекарственных препаратов ЭкоНова'

ПРИМЕНЕНИЕ ВЭЖХ В МЕДИЦИНЕ

ЭкоНова' Фармакокинетические исследования Терапевтический лекарственный мониторинг Цель: разработка унифицированных, экспрессных, экономичных ВЭЖХ методик для больших групп различных лекарственных препаратов в сыворотке крови Цель: определение эндогенных метаболитов в биологических жидкостях ЭкоНова' Терапевтический лекарственный Контроль концентрации препарата и/ или его метаболитов в организме пациента в течение Противосудорожные препараты, метотрексат, Наука, изучающая динамику процессов абсорбции, распределения и элиминации Противотуберкулезные препараты и их метаболиты ЭкоНова' Список лекарственных веществ, * Приказ №64 МЗ РФ от 21 февр. 2000 г.

ЭкоНова' Химиотерапевтический препарат

N CH2 N C NH CH COOH

CH COOH

ЭкоНова' Противосудорожные препараты ЭкоНова' гексамидин, фенобарбитал, бензонал, ламиктал, дифенин, этосукцимид, карбамазепин и метотрексат ЭкоНова' ЭкоНова' ЭкоНова' ЭкоНова' Изократическое элюирование: 0.2M LiClO4 (pH 3) - MeCN ЭкоНова' Хроматограмма смеси противосудорожных препаратов (стандартный образец) Колонка: 2x75 мм; Nucleosil 100-5 C Элюенты: "А"- 0.2 M LiClO4-H3PO4 (pH 3); "Б"- ACN Градиент: 2000 мкл от 10 до 30% Б, 1000 мкл 30% Б. F=150 мкл/мин.

1– гексамидин; 2– фенобарбитал; 3 – ламиктал;

4– дифенин; 5– карбамазепин; 6– клоназепам.

ЭкоНова' Суточная доза: гексамидин– 400 мг, ламиктал– 50 мг, карбамазепин– 600 мг ЭкоНова' ЭкоНова' Изменение концентрации метотрексата (МТХ) в сыворотке крови пациента в процессе лечения Концентрация МТХ в сыворотке, мкМ ЭкоНова' Максимальная найденная концентрация метотрексата в крови пациентов в процессе инфузии при дозе 1000 мг/м Концентрация МТХ, мкмоль/л ЭкоНова' ЭкоНова' Хроматограмма экстракта сыворотки крови пациента, ЭкоНова' Метрологические характеристики СКО в терапевтическом диапазоне - не более 15% ЭкоНова' Наука, изучающая динамику процессов абсорбции, распределения и элиминации препарата в Противотуберкулезные препараты и их разработке новых препаратов и их лекарственных клинических испытаниях лекарственных средств;

определении дозы, оптимального пути введения, схемы применения, продолжительности лечения.

ЭкоНова' Туберкулез – одна из самых опасных болезней в мире, приводящая к смерти более 3 миллионов людей в год.

Препараты, применяемые для лечения туберкулеза, обычно подразделяются на две основные группы.

Лекарства первой линии, сочетающие хорошую эффективность с приемлемым уровнем токсичности, включают изониазид (INH), пиразинамид (PZA), рифампицин (RIF) и этамбутол.

Они наиболее часто используются в комбинированной терапии.

В случае устойчивости к микроорганизмам или ВИЧ инфекции применяют лекарства второй линии.

ЭкоНова' Молекулярная структура противотуберкулезных лекарств Пиразинамид (PZA) ЭкоНова' аскорбиновой кислотой + 100 мкл 10% трихлоруксусной аскорбиновой кислотой + перемешать 1 мин, центрифуперемешать 1 мин, центрифуперемешать 1 мин, центрифуперемешать 1 мин, центрифугировать при 2000g 5 мин.

гировать при 2000g 5 мин.

гировать при 2000g 5 мин.

ЭкоНова' ЭкоНова' Хроматограмма сыворотки крови пациента с большим содержанием RIF ЭкоНова' ЭкоНова' Метаболизм изониазида в организме 1)изониазид (INH); 2) ацетилизониазид (AcINH);

3) ацетилгидразин; 4) изоникотиновая кислота;

5) изоникотинил глицин; 6) диацетилгидразин;

7) гидразин; NAT2 – ариламин-N-ацетилтрансфераза Ацетилятор – человек, обладающий определенной активностью NAT ЭкоНова' Метаболизм пиразинамида в организме 1) пиразинамид (PZA); 2) пиразиноевая кислота (PA);

3) 5-гидроксипиразинамид; 4) 5-гидроксипиразиноевая кислота;

5) N-(пиразинилкарбонил) глицин;

ЭкоНова' ЭкоНова' Условия хроматографического определения • хроматограф - «Милихром А-02»

• колонка - ProntoSIL 120-5-C18 AQ, 2х75 мм • элюент А – 0,1 % ТФУ - 0,4 % октилсульфонат натрия, рН 2,2;

• элюент Б – ацетонитрил;

• градиент - 2000 мкл 1- 60%Б, 800 мкл 100%Б;

• длины волн детектора - 254, 266, 280, 310 нм;

• расход элюента - 150 мкл/мин;

• объем образца 20 мкл;

ЭкоНова' ЭкоНова' ЭкоНова' 1). Guidance for Industry. Bioanalytical Method validation.

//Center for Drug Evaluation and Research, U.S. Food and Drug Administration, U/S/ Department of Health and Human Services, Rockville, Maryland, May 2001.

2). ОСТ 42-510-98. Правила организации производства и контроля качества лекарственных средств (GMP): Стандарт отрасли, М.,1998.

3). О системе мер по повышению качества клинических лабораторных исследованийв учреждения здравоохранения РФ. Приказ МЗ РФ от 7 февр. 2000г. №45. // Рос. Газ. февр. - С.4.

ЭкоНова' ЭкоНова' Пиразинамид Ацетилизониазид ЭкоНова' Пиразинамид Изониазид Пиразиноевая ЭкоНова' Фармакокинетические параметры Kel (1/ч) – константа элиминации (характеризует скорость выведения лекарства из организма) T1/2 (ч) – период полуэлиминации (время, необходимое для уменьшения вдвое концентрации лекарства в крови) Cl (мл/мин*кг) – общий клиренс (объем крови, очищающийся от препарата в единицу времени) D (мкг/кг) – доза С0 (мг/л) – кажущаяся начальная концентрация (концентрация препарата, которая была бы достигнута при мгновенном его распределении по органам и тканям) V (л/кг) – кажущийся объем распределения (характеризует степень захвата препарата тканями из сыворотки крови) AUC (мкг*ч/мл) – площадь под кинетической кривой «концентрация - время» (пропорциональна дозе препарата, попавшего в системный кровоток) ЭкоНова' Фармакокинетические параметры ЭкоНова' ЭкоНова' Кинетические кривые для INH и AcINH ЭкоНова' Диагностические исследования Реакция дериватизации Условия хроматографического определения •хроматограф - «Милихром А-02»;

•колонка – Nucleosil 100-5 C18, 2х75 мм;

•элюент А – 0,1 % ТФУ, элюент Б – 0,1 % ТФУ, 70% ACN;

•градиентное элюирование: 2200 мкл 16-27%Б, 200 мкл 27-100%Б, 600 мкл 100%Б; расход элюента - 150 мкл/мин;

•длины волн детектора - 250, 340, 360 нм;

•объем образца 5 мкл;

ЭкоНова' Количество выполненных анализов Противосудорожные препараты – мониторинг более В 75% случаев была необходима коррекция дозы

ТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЛЕКАРСТВЕННЫЙ

По данным шестилетнего мониторинга для 25% из 700 пациентов, проходивших лечение в Областной Государственной детской клинической больнице г. Иркутска, была необходима коррекция дозы ЭкоНова' Количество выполненных анализов противотуберкулезные препараты:

получены фармакокинетические кривые для INH, AcINH, PZA и PA для 33 пациентов (около 400 анализов)

ТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЛЕКАРСТВЕННЫЙ

За три года в Новосибирском научно-исследовательском 2,5 тыс. анализов INH, PZA, RIF для оптимизации индивидуальной дозировки лекарств.

Сахара: в Областном диагностическом центре г.Новосибирска обследовано более 80 больных.

ЭкоНова' Преимущества микроколоночных Одновременное определение группы веществ за 15- минут по унифицированным методикам :

ПСП (8 веществ), метотрексат, циклоспорин;

RIF, INH, PZA и их метаболиты (5 веществ);

Небольшой объем сыворотки крови: 50 - 200 мкл;

Многоволновое детектирование: 4 длины волны;

400 анализов на одной колонке;

Простая подготовка пробы;

Экономичность и экспрессность.

Метрологические характеристики Воспроизводимость и правильность: не хуже 15%;

ЭкоНова' CD-Милихром А-02/ Научные публикации/ Диссертации/ 1) 2003-Федорова Г.А. Кандидатская диссертация. «Оптимизация м етода ВЭЖХ для терапевтического лекарственного мониторинга противосудорожных препаратов, метотрексата и циклоспорина А». Автореферат кандидатской диссертации.

CD-Милихром А-02/ Научные публикации/ Статьи/ 1) Федорова Г.А., Кожанова Л.А. Применение микроколоночной жидкостной хроматографии для анализа биологических жидкостей. В кн. «Хроматография на благо России» (ред. Курганов А. А.), Москва, «Граница», 2007, с.666-684.

2) Федорова Г.А., Кожанова Л.А., Полянская. Применение микроколоночной высокоэффективной жидкостной хроматографии в медицине. Часть 1.

/Вестник восстановительной медицины, 2008, №1(23), с.35-41.

3) Федорова Г.А., Кожанова Л.А., Азарова И.Н. Применение микроколоночной высокоэффективной жидкостной хроматографии в медицине. Часть 2.

/Вестник восстановительной медицины, 2008, №2(24), с.47-50.

CD-Милихром А-02/ Учебный центр «Хроматография»/ Дипломные работы студентов/ 1) Полянская Е.М. Диплом НГУ. «Определение противотуберкулезных препаратов методом ВЭЖХ для оценки их фармакокинетики и анализ ее соответствия генетическим предикторам больных туберкулезом легкого».



Похожие работы:

«. С. В. БО ГАТКОВ ИССЛЕДОВАНИЕ СВЯЗИ СТРОЕНИЯ И РЕАКЦИОННОй СПОСОБНОСТИ НЕКОТОРЫХ АМИНОСПИРТОВ Автореферат диссертации, на соискание ученой степени кандидата химических наук Научный руководитель доктор химических наук, проф. Е. М. ЧЕРКАСОВА. Москва, 1966 r. www.sp-department.ru Работа выполнена на кафедре органической хи­ мии...»

«О.В. Гагарина 58 2005. № 11 НАУКИ О ЗЕМЛЕ 10. Новиков Ю.В., Плитман С.И., Ласточкина К.С. и др. Оценка качества воды по комплексным показателям // Гигиена и санит. 1987. № 10. С. 7-11. 11. Руководство по методам гидробиологического анализа поверхностных вод и донных отложений / Под ред. В.А. Абакумова. Л.: Гидрометеоиздат, 1983. 239 с. 12. Шлычков А.П., Жданова Г.Н., Яковлева О.Г. Использование коэффициента стока загрязняющих веществ для оценки состояния рек // Мониторинг. 1996. №2. С 23-27....»

«УПРАВЛЕНИЕ ЖИЗНЬЮ О возможности непрерывного продления человеческой жизни в бессмертие Рофман В.М. _ rofman@inbox.ru г. Темиртау 2013 ОГЛАВЛЕНИЕ Введение.. 1. Немного статистики о жизни и смерти. 7 2. Этногенез и социогенез.. 15 3. Механизм эволюционного развития биосферных и социальных систем.. 21 Очеловечивающее развитие. 4. 26 К вопросу о биохимии бессмертия человека. 5. Преодоление лимита Хейфлика. 6. Раковое перерождение жизни. 7. Технология, экология и жизнь. 8. Способна ли...»

«Таблица 1 МИНИМАЛЬНАЯ МАССА ПРОБЫ, НЕОБХОДИМАЯ ДЛЯ ПРОВЕДЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЙ НА СОДЕРЖАНИЕ НАНОМАТЕРИАЛОВ ОДНОГО ВИДА, И МИНИМАЛЬНЫЙ РАЗМЕР ТОЧЕЧНОЙ ПРОБЫ В СОСТАВЕ ПРОДУКЦИИ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННОГО НАЗНАЧЕНИЯ, ПИЩЕВОЙ ПРОДУКЦИИ И УПАКОВОЧНЫХ МАТЕРИАЛОВ Вид материала Единицы Минимальное N п/п измерения количество пробы (образца) Минеральные удобрения г 1 Средства защиты растений, пестициды, г 2 ядохимикаты Корма сухие г 3 Зерно г 4 Зеленый корм (трава) г 5 Силос и сенаж г 6 Травяные искусственно...»

«Известия Самарского научного центра Российской академии наук. 2009. Т. 11, № 1(4) УДК 574.52(28/289):593.17 ИНФУЗОРИИ НЕКОТОРЫХ КАРСТОВЫХ ОЗЕР СРЕДНЕГО ПОВОЛЖЬЯ © 2009 С.В. Быкова, В.В. Жариков Институт экологии Волжского бассейна РАН, г. Тольятти Поступила 03.05.2009 Приведены первые данные о фауне и структуре сообществ инфузорий в некоторых карстовых водоемах на территории Среднего Поволжья (в р-не рек Илеть и Казанка). Установлено, что снижается видовое разнообразие и количественное развитие...»

«_ ЕВРАЗИЙСКИЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ (ЕАСС) EURO-ASIAN FOR STANDARTIZATION, METROLOGY AND CERTIFICATION (EASC) МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ ГОСТ – СТАНДАРТ 20МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЯ ПО ВОЗДЕЙСТВИЮ ХИМИЧЕСКОЙ ПРОДУКЦИИ НА ОРГАНИЗМ ЧЕЛОВЕКА. Метод оценки обратных мутаций на бактериях. (OECD, Test №471:1997, IDT) Издание официальное Москва Евразийский Совет по стандартизации, метрологии и сертификации ГОСТ Предисловие Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по...»

«МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РФ Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования Тверской государственный университет Биологический факультет Кафедра ботаники УТВЕРЖДАЮ Руководитель ООП проф. А.Н. Панкрушина 2012 г. Учебно-методический комплекс по дисциплине ГЛОБАЛЬНЫЕ ЭКОЛОГИЧЕСКИЕ ПРОБЛЕМЫ Для студентов I курса Направление подготовки 020400.68 БИОЛОГИЯ Программы специализированной подготовки магистров: Зоология позвоночных...»

«ГОЛОС ИЗДАНИЕ ВТОРОЙ ШКОЛЫ № 5 ОСЕНЬ 2008 ОТ РЕДАКЦИИ Любите ли вы дни рождения? Улыбки, цветы, воздушные шары, сладости, поздравления и пожелания. Все, сказанное от чистого сердца, оживает, мечты воплощаются в жизнь. Звучат слова благодарности и вспоминается пройденный путь. А сколько дорог нас ждет впереди! Этой осенью нашему Голосу исполнился год. Кажется, начиналось все только вчера. И вот уже пятый номер зовет вас перелистнуть страницы и прочесть о Второй школе, о ее прошлом и настоящем, о...»

«Верескунов Алексей Михайлович ФАРМАКОЛОГИЧЕСКАЯ И ТОКСИКОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ДЕЙСТВИЯ РИЦИНА 14.00.20 - токсикология 14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Санкт-Петербург 2005 Работа выполнена в 111-м Центре судебно-медицинских и криминалистических экспертиз и Военно-медицинской академии им. С.М.Кирова МО РФ Научные руководители: доктор медицинских наук профессор Петр Дмитриевич Шабанов доктор...»

«Аннотации магистерских диссертаций 2012 Направление Химическая технология и биотехнология Кафедра химии и технологии биологически активных соединений им. Н.А. Преображенского Аннотация к магистерской диссертации Перевощиковой А.Ю. на тему Фотохромные органические системы на основе диарилэтенов с фотоиндуцированным переключением флуоресценции Руководители: к.х.н., доцент Харитонова О.В., к.ф-м.н. зав. лаб.фотохромных систем Барачевский В.А. Работа содержит 86 страниц, 83 использованных...»

«ПРЕЗЕНТАЦИЯ ЧЕОНГИН - это основа медицины! ПРИРОДНАЯ МЕДИЦИНА Изобретатель: ПАК СЕ ЧЖУН В В Е Д Е Н И Е: Никто не учит нас тому, как сохранить жизнь в нашем организме, в чем причина заболеваний и как их избежать, но мы продолжаем жить, не зная этой важной информации, а заболев, причиняем вред не только себе, но и всем окружающим людям. В школе, прежде чем преподавать математику и английский язык, нужно рассказать о жизни, то есть о природе. Только так мы сможем найти ответ о том, как обращаться...»

«Смирнова Мария Борисовна АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩИЕ СВОЙСТВА БИФУНКЦИОНАЛЬНЫХ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ АВТОРЕФЕРАТ ДИССЕРТАЦИИ на соискание ученой степени кандидата биологических наук по специальности биохимия (03.00.04) Москва, 2006 0 Работа выполнена в Научном центре психического здоровья Российской академии медицинских наук доктор биологических наук Научный руководитель Дмитриев А.Д. доктор биологических наук, профессор Официальные оппоненты Пронин А.В. кандидат биологических наук Жердев А.В....»

«СПИСОК научных и методических работ профессора кафедры фармакогнозии, доктора фармацевтических наук Поповой Ольги Ивановны с декабря 2005 г. по март 2012 г. № Наименование работы, ее вид Форма Выходные данные Объем, Соавторы п. л. 1 2 3 4 5 6 1. Научные работы 1.1. В изданиях, рекомендованных ВАК 1. Флавоноиды надземной части печ. Вопросы биологической, медицинской и Никитина А.С. 0, фармацевтической химии. – 2008. – №2 – С. 7-9. Маркова О.М. Dracocephalum moldavica L. (Lamiaceae), 0,...»

«Aspergillus niger R-3 L-.00.04 – 2014 МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РА ЕРЕВАНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ ДАВТЯН РИПСИМЕ МИСАКОВНА ВОЗМОЖНОСТИ ПРОЯВЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ L-АМИНОКИСЛОТНОЙ ОКСИДАЗЫ У ПЛЕСНЕВЫХ ГРИБОВ Aspergillus niger R-3 АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук по специальности 03.00.04- Биохимия Е Р Е В А Н..,..,...,.. 2014. 2-, 1400-, - (0025,.,. 1,, ): : 2014. 31-: 051,..,. Тема диссертации утверждена в Ереванском...»

«УДК 630.43 Р.М. Коган, В.А. Глаголев (Институт комплексного анализа региональных проблем ДВО РАН; e-mail: koganrm@mail.ru) ВЛИЯНИЕ МЕТЕОДАННЫХ НА ЭФФЕКТИВНОСТЬ И ДОСТОВЕРНОСТЬ ПРОГНОЗА ОПАСНОСТИ ПОЖАРОВ РАСТИТЕЛЬНОСТИ В статье показано, что способ обработки фактических и прогнозируемых метеоданных является инструментом повышения эффективности и достоверности прогноза показателей опасности пожаров растительности по условиям погоды. Ключевые слова: опасность пожаров растительности, показатели,...»

«ГБОУ ВПО ИРКУТСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ МИНИСТЕРСТВА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И СОЦИАЛЬНОГО РАЗВИТИЯ РФ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЙ ФАКУЛЬТЕТ Кафедра управления и экономики фармации Геллер Л.Н. История фармации ЦИКЛ ЛЕКЦИЙ (форма обучения - заочная) ИРКУТСК 2012 УДК 615.1(091) (075.8) ББК 52.82я73 Печатается по решению Центрального координационно-методического совета ГБОУ ВПО ИГМУ Минздравсоцразвития РФ История фармации. Цикл лекций (форма обучения – заочная): ИГМУ, Иркутск. - 2012. – 44 с....»

«Жукова Т.С. стр.1 из 22 Методические особенности использования материалов прикладного характера на уроках химии в основной школе Жукова Т.С. Методические особенности использования материалов прикладного характера на уроках химии в основной школе В современной концепции химического образования прикладная направленность подчеркивается как важное требование обновления содержания. Объем учебного времени, предназначенного для изучения химии, уменьшается при практически неизменном объеме содержания...»

«Том 1 - Прибрежные и пресные воды. Резюме В Методических указаниях о безопасных водных средах, используемых в рекреационных целях описывается современный уровень знаний о влиянии использования прибрежных и пресноводных сред в рекреационных целях на здоровье пользователей, в частности, о влиянии, ведущем к гибели на воде и травматизму, переохлаждению, перегреву и чрезмерному солнечному облучению, о качестве воды (в особенности о воздействии воды, загрязненной неочищенными сточными водами, но...»

«013170 Область техники, к которой относится изобретение Данное изобретение относится к способам производства синтетического горючего газа из биомассы. Способ согласно настоящему изобретению обычно будет включать этапы тепловой предварительной обработки, включая удаление соединений щелочных металлов, с последующей ферментативной обработкой биомассы с высоким содержанием сухого вещества с получением малых частиц, которые затем переносятся перекачкой под высоким давлением в герметичный...»

«МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ БЕЛОРУССКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ ГЕОГРАФИЧЕСКИЙ ФАКУЛЬТЕТ Зарубов Александр Иванович Геоэкология человека (Конспект лекций для студентов географического факультета) Специальность: Н.33.06.02 - Геоэкология Минск –2003 1 Оглавление Введение................................................. 4 Лекция 1. Предмет геоэкологии человека и место в системе наук... 4 Краткая история геоэкологии человека....»






 
© 2014 www.kniga.seluk.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Книги, пособия, учебники, издания, публикации»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.