WWW.KNIGA.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Книги, пособия, учебники, издания, публикации

 

Pages:   || 2 | 3 |

«XV Школа Актуальные проблемы биологии развития 19 – 24 октября 2008 года тезисы стендовых докладов молодых ученых Звенигород XV Школа Актуальные проблемы биологии ...»

-- [ Страница 1 ] --

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ НАУК

ОТДЕЛЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИХ НАУК

ИНСТИТУТ БИОЛОГИИ РАЗВИТИЯ

им. Н.К. КОЛЬЦОВА РАН

НАУЧНЫЙ СОВЕТ РАН ПО БИОЛОГИИ РАЗВИТИЯ

XV Школа

«Актуальные проблемы биологии

развития»

19 – 24 октября 2008 года

тезисы стендовых докладов

молодых ученых

Звенигород XV Школа «Актуальные проблемы биологии развития»

Звенигород, 2008 г., 124 с.

В сборнике представлены материалы стендовых докладов молодых ученых на XV Школе «Актуальные проблемы биологии развития» (Звенигород, 19–24 октября 2008 г.). Представленные работы затрагивают разнообразные аспекты современной биологии развития и могут быть интересны для клеточных биологов, эмбриологов, физиологов и зоологов.

Редакционная коллегия: д.б.н. И.С. Захаров к.б.н. Т.Л. Маршак к.б.н. Е.Б. Абрамова к.б.н. А.Ю. Кулибин Школа поддержана Отделением биологических наук РАН и РФФИ.

© ИБР РАН,

ЛОКАЛИЗАЦИЯ ЭКСПРЕССИИ РЕГУЛЯТОРНЫХ ФАКТОРОВ FGF2,

TGFb2, PAX6, PITX2 В ХОДЕ РЕГЕНЕРАЦИИ СЕТЧАТКИ ТРИТОНА

Pleurodeles waltl П.П. Авдонин, Ю.В. Маркитантова, Э.Н. Григорян, Р.Д. Зиновьева Учреждение РАН, Институт биологии развития им. Н.К. Кольцова РАН, Москва, Россия.

yulma98@rambler.ru Восстановление всех слоев сетчатки в ходе ее регенерации у взрослых тритонов происходит за счет дедифференцировки и пролиферативных возможностей клеток пигментного эпителия. В регенерации сетчатки участвуют также локализованные в периферической области сетчатки мультипотентные клетки, которые обеспечивают рост сетчатки в онтогенезе. Задача наших исследований состоит в идентификации генов, участвующих в запуске и контроле процесса регенерации.

Пролиферация и дифференцировка клеток пигментного эпителия и сетчатки в ходе нормального развития глаза находится под контролем эволюционноконсервативной сети транскрипционных факторов Pax6, Six3, Rx, Chx, Otx2, Mitf и сигнальных молекул Fgfb2, Tgfb2, Shh, Wnt, Bmp4, координирующих экспрессию регуляторных генов. В предыдущей работе мы выявили активацию экспрессии регуляторных генов Fgf2, Pax6, Six3 и снижение уровня экспрессии регуляторного гена Otx2, а также гена-маркера пигментного эпителия RPE65 на ранней стадии регенерации сетчатки – стадии пролиферирующих нейробластов, которые являются клеточными источниками всех типов клеток регенерирующей сетчатки (Авдонин и др., 2008, Известия РАН, сер.





биол., № 4, стр. 414–421).

В настоящей работе получены данные о локализации белков Fgf2, Tgfb2, Pax6, Pitx2 в ходе регенерации сетчатки тритона Pleurodeles waltl. Мы обнаружили колокализацию экспрессии транскрипционных факторов Pax6 и Pitx2 и сигнальных белков Fgf2, Tgfb2 в нейробластах раннего регенерата, а также в клетках внутреннего ядерного слоя и ганглиозных клетках на поздних стадиях регенерации сетчатки. В депигментирующихся клетках пигментного эпителия иммунопозитивные сигналы для исследуемых белков обнаружены не были. В нативной сетчатке тритона иммунопозитивная реакция для Pax6 и Pitx2 наиболее выражена в клетках периферической части сетчатки, где локализуются мультипотентные малодифференцированные клетки.

Таким образом, при регенерации сетчатки взрослых тритонов происходит реэкспрессия исследуемых транскрипционных факторов и сигнальных молекул, координированная работа которых инициирует нормальное развитие тканей глаза. Полученные нами результаты, в сопоставлении с данными литературы, свидетельствуют о том, что изучаемые регуляторные факторы могут участвовать в контроле пролиферации и дифференцировки клеток в ходе последовательных стадий восстановления сетчатки.

Работа поддержана грантом РФФИ № 08-04-00462.

ЧТО МОЖЕТ ОБЪЕДИНЯТЬ ВЫСШИХ МНОГОКЛЕТОЧНЫХ И

КИШЕЧНОПОЛОСТНЫХ КРОМЕ МНОГОКЛЕТОЧНОСТИ?

Санкт-Петербургский государственный университет, БиологоПочвенный факультет, кафедра Цитологии и Гистологии, Кишечнополостные (Coelenterata или Cnidaria) – низшие многоклеточные животные, тело которых образовано двумя эпителиальными слоями, между которыми располагается прослойка внеклеточного матрикса, называемая мезоглеей. В составе мезоглеи сцифомедузы Aurelia aurita был обнаружен белок, названный мезоглеином. Анализ доменного состава мезоглеина показал, что он относится к обширному суперсемейству белков внеклеточного матрикса, имеющих в своем составе домен Zona Pellucida (ZP), обнаруженный впервые в белках из блестящей оболочки ооцита млекопитающих (ZP1–ZP белки). На сегодняшний день мезоглеин является наиболее древним представителем белков этого семейства. Оогенез у представителей класса Scyphozoa до настоящего времени плохо изучен, а какие-либо ZP-доменные белки, связанные с оогенезом, у низших многоклеточных животных не описывали. И соответственно специфические структуры на границе соединения ооцита с зачатковым эпителием ранее так же описаны не были.

Тот факт, что многие белки из суперсемейства ZP-домен содержащих белков играют важную роль в процессах эмбриогенеза, оплодотворения и пренатального развития и определил развитие интереса к оогенезу сцифоидной медузы A. aurita.

При окрашивании гематоксилином-эозином парафиновых срезов гонад самок сцифомедузы A. aurita в месте прикрепления ооцита к зачатковому эпителию выявлена интенсивно окрашивающаяся эозином пластинка.





Более детальное описание данной структуры проводилось на полутонких срезах гонад самок медузы. Вначале ооцит является частью эпителиального слоя и неотличим морфологически от соседних клеток. По мере роста ооцит округляется и приобретает большое светло окрашенное ядро. Размеры ооцита на этой стадии развития (стадия I) не превышают 10 мкм. В периферической цитоплазме ооцита на границе с соседними эпителиальными клетками отмечено появление отдельных оптически менее плотных гранул.

На стадии II и III размеры ооцита увеличиваются до 40 мкм и происходит постепенное разрастание и погружение его в мезоглею.

Начиная с III стадии ооцит остается прикрепленным к зачатковому эпителию только одним полюсом, на котором и скапливаются гранулы.

По мере увеличения объема ооцита (стадия IV, диаметр ооцита около 50–70 мкм) ядро смещается к анимальному полюсу, а материал в области контакта между ооцитом и зачатковым эпителием приобретает зернистую структуру. На стадии V (диаметр ооцита около 80–100 мкм) еще можно различить отдельные гранулы, но большая их часть уже слилась в линейно расположенную гомогенную массу в месте контакта ооцита и эпителиального слоя. На последних этапах созревания диаметр ооцита достигает максимального размера (стадия VII, диаметр ооцита 130–170 мкм). На данных стадиях зернистый компонент окружен менее интенсивно окрашивающимся гомогенным материалом, расположенным в виде тонкой пластинки, тогда как на ранних стадиях был представлен только гранулярный компонент. Интенсивность окрашивания материала пластинки с III по VII стадии развития возрастает, что может свидетельствовать о его уплотнении.

Зачатковый эпителий также претерпевает мофологические перестройки в месте прикрепления ооцита. Клетки начинают уплощаться и на последних этапах развития ооцита эпителий представлен очень тонким слоем.

Результаты окрашивания парафиновых срезов по методу Маллори дают основание полагать, что в составе пластинки содержатся гликопротеины. Гистохимический анализ с использованием ШИК-реакции и окраски альциановым синим, толуидиновым синим и альдегид-фуксином позволяют заключить, что полисахариды, входящие в состав гликопротеинов, имеют кислую природу за счет карбоксильных остатков.

При помощи метода непрямого иммуноиммунофлуоресцентного окрашивания парафиновых срезов гонады сывороткой, содержащей антитела против мезоглеина (RA45/47), удалось показать, что гранулы, а затем и гомогенный материал пластинки в зоне контакта специфически связывают антитела, начиная со I-II стадии.

После разделения белкового гомогената гонад самок A. aurita в условиях SDS-электрофореза, переноса на мембрану и окрашивания антителами против мезоглеина в пробе обнаружены две белковые полосы, связывающие RA45/47. Их молекулярные массы составляют около 210 и 180 кДа.

Весьма вероятно, что взаимодейтвующий с антителами материал в пластинке содержит в своем составе ZP-домен-содержащие белки. Дальнейшая экспериментальная работа позволит определить, участвуют ли данные белки, как это происходит у высших многоклеточных, в процессе оплодотворения.

Работа выполнена при поддержке РФФИ (проекты № 05-04а, 08-04-00155-к) и гранта правительства Санкт-Петербурга.

ОСОБЕННОСТИ ЭКСПРЕССИИ ПРОТЕАСОМ В КЛЕТКАХ ОПУХОЛИ

Walker 256 ПОСЛЕ ИХ ТРАНСПЛАНТАЦИИ КРЫСАМ Brattleboro С ГЕНЕТИЧЕСКИМ ДЕФЕКТОМ

СИНТЕЗА ВАЗОПРЕССИНА

Учреждение РАН, Институт биологии развития им. Н.К. Кольцова РАН, Москва, Россия.

Исследована динамика роста карциносаркомы Walker 256 в онтогенезе крыс Brattleboro, генетически неспособных синтезировать вазопрессин.

На фоне относительно стабильного проявления признаков несахарного диабета в ходе онтогенеза у них развивается ряд существенных морфофункциональных отклонений в системе иммунитета. У крыс Brattleboro обнаружено устойчивое снижение темпов роста опухоли по сравнению с физиологически нормальными крысами WAG. В отличие от естественного для крыс непрерывного роста, увеличение опухоли у крыс Brattleboro было выражено слабо и продолжалось только в течение первых 15–18 сут после чего наблюдалась регрессия и исчезновение опухоли. Эффект зависел от возраста и был сильнее выражен у старых животных. При повторном введении клеток Walker 256 опухоль не возникала, что свидетельствует о прямом участии иммунной системы в обнаруженном феномене.

Одним из молекулярных механизмов, определяющих развитие опухолей, является изменение соотношения в их клетках множественных форм протеасом. Увеличение пула конститутивных 26S-протеасом необходимо для эффективной регуляции клеточного цикла активно пролиферирующих злокачественных клеток, в то время как резкое падение уровня иммунных протеасом, по-видимому, позволяет этим клеткам уходить из-под иммунного надзора.

С помощью Вестерн-блоттинга исследована динамика содержания тотального пула протеасом, иммунных протеасом, 19S-субчастицы 26S-протеасом и активатора протеасом белка РА28 в клетках опухоли Walker 256 на 7-е 14-е и 24-е сут после ее трансплантации мутантным крысам Brattleboro и нормальным крысам WAG. Показано, что в опухоли мутантных крыс Brattleboro динамика содержания разных форм протеасом различна и отличается от таковой в опухоли крыс WAG. В отличие от крыс WAG у крыс Brattleboro наблюдалось постепенное уменьшение тотального пула протеасом и активатора РА28. Субъединица Rpt6 (маркер 19S-субчастицы 26S-протеасом) практически не выявлялась иммуноблоттингом в опухоли крыс Brattleboro, начиная с 14-х сут. Уровень иммунной субъединицы LMP7, напротив, возрастал уже к 14-му дню. Следует отметить, что уровень субъединицы LMP в опухоли у крыс Brattleboro на 7-ой день был снижен почти вдвое по сравнению с таковым у крыс WAG. Подобная динамика наблюдалась для иммунных субъединиц LMP2 и LMP10.

19S-субчастица является необходимой частью 26S-протеасом, с помощью которой осуществляется распознавание и подготовка убиквитинированных белков к гидролизу. В ее отсутствие, к 14-му дню, в клетках опухоли у крыс Brattleboro нарушается регуляция многочисленных процессов, в том числе, клеточного цикла. Неудивительно, что именно с 15-18-го дня начинается регрессия опухоли. Существенным событием в развитии опухоли является также возрастание содержания в ней иммунных протеасом к 14-му дню. Субъединицы LMP7, LMP2 и LMP10 иммунных протеасом гидролизуют опухолевые белки с образованием антигенных эпитопов, которые вместе с молекулами главного комплекса гистосовместимости класса I представляются цитотоксическим Т-лимфоцитам. Антигенные эпитопы образуются, как правило, 26S-протеасомами из белков после их убиквитинирования.

Образование антигенных эпитопов из ряда белков стимулируется под действием активатора РА28. Не исключено, что в клетках опухоли Walker 256 у крыс Brattleboro иммунные 20S-протеасомы в комплексе с активатором РА28 или без него образуют антигенные эпитопы и способствуют обнаружению и уничтожению этих клеток иммунной системой. Об участии адаптивного иммунитета в процессе регрессии опухоли у крыс Brattleboro свидетельствует и тот факт, что опухоль, повторно трансплантируемая выздоровевшим крысам, не приживается вовсе. Относительно низкое содержание иммунных протеасом в опухоли этих крыс в предшествующий период, характеризующийся ее развитием, по-видимому, позволяет ей какое-то время «обманывать»

иммунную систему.

Таким образом, изменение соотношения множественных форм протеасом в ту или иную сторону создает в злокачественных клетках специфические условия, которые определяют их дальнейшую судьбу.

В опухоли Walker 256, развивающейся у крыс Brattleboro в отсутствие гипоталамического вазопрессина, образуется уникальный пул протеасом, приводящий к ее регрессии. Выявление механизмов, посредством которых развивается этот эффект, входит в наши дальнейшие задачи.

Работа выполнена при финансовой поддержке РФФИ (проекты № 06-04-48229 и 08-04-00276).

ОСОБЕННОСТИ ФОЛЛИКУЛОГЕНЕЗА У НЕПОЛОВОЗРЕЛЫХ

САМОК РЫЖЕЙ ПОЛЕВКИ В ЭКСТРЕМАЛЬНЫХ

ГЕОХИМИЧЕСКИХ УСЛОВИЯХ

Институт экологии растений и животных УрО РАН, Согласно концепции биогеохимического районирования территории, для которых характерно избыточное поступление химических элементов в пищевую цепь преимущественно из подстилающей горной породы, относят к естественным геохимическим аномалиям. В то время как большинство исследований касаются биологических эффектов техногенного загрязнения, мало изученной остается проблема воздействия на репродуктивную функцию животных геохимического фактора естественной природы.

Цель работы – провести сравнительный анализ морфофункционального состояния яичников у неполовозрелых рыжих полевок (Clethrionomys glareolus) на территории естественной геохимической аномалии (с избыточным содержанием кобальта, никеля и хрома) и на участке с условно фоновым содержанием химических элементов.

Районы работ аналогичны друг другу по особенностям рельефа, направлению преобладающих ветров, лесорастительным условиям, расположению источников техногенного загрязнения и различаются типом подстилающих горных пород. К территориям естественных геохимических аномалий с ультраосновными породами, которые характеризуются высокими концентрациями никеля, кобальта и хрома, относятся окрестности п. Уралец (участок 1) и д. Анатольской (участок 2) Пригородного района Свердловской области. В качестве условно фонового участка, использовалась территория, расположенная в юговосточной части Висимского государственного природного биосферного заповедника. На фоновом участке основными подстилающими породами являются габбро, диориты, гранитоиды.

Известно, что в критические периоды онтогенеза организм наиболее чувствителен к воздействию неблагоприятных факторов, именно в эти моменты во многом определяются физиологические характеристики взрослых животных (Levine, 1967). Изменения условий внутренней среды материнского организма, в которых происходит развитие плода, влияют на темпы созревания потомства. А в первые десять дней после рождения у млекопитающих формируется характер взаимосвязей между половыми железами и регулирующими центрами гипоталамуса (Бабичев, 1981), инициируется собственно фолликулогенез (Pedersen, 1969), заканчивается морфологическая детерминация стероидпродуцирующих элементов (Pehlemann, 1978). На территории изучаемой геохимической аномалии ранее у рыжей полевки отмечено усиление функционального напряжения коры надпочечника и интенсификация функциональной активности щитовидной железы (Михеева, 2006). Возможно, выраженный гиперкортицизм у матери приведет к трансформации метаболизма стероидных гормонов, а повышенная функция щитовидной железы отразится на структурном и функциональном становлении репродуктивной системы потомства. Принимая во внимание вышеизложенное, у самок рыжей полевки, обитающих на территориях естественных геохимических аномалий, можно ожидать изменений в становлении репродуктивной функции.

Известно, что процесс полового созревания начинается с увеличения секреции гонадотропинов гипофизом. По мере увеличения секреции фолликулостимулирующего гормона нарастает интенсивность фолликулогенеза. При этом уровень синтеза эстрадиола в фолликуле растет экспоненциально и строго коррелирует с диаметром фолликула (Levy, 2000). Следовательно, показателями интенсификации фолликулогенеза являются возрастание количества растущих фолликулов и увеличение их размеров.

Количественную оценку разных типов фолликул и измерение их максимальных диаметров в яичниках рыжей полевки проводили у одномесячных особей близких по весу (14–19 г) на серийных срезах по стандартной методике (Ромейс, 1953; Волкова, 1990), с использованием программного продукта Siams PHOTOLAB.

С помощью многофакторного дисперсионного анализа количества и размеров фолликул у неполовозрелых самок рыжей полевки обнаружено увеличение количества вторичных и третичных фолликул (F(2.61)=12.01, p0.01), а также более высокие значения максимальных диаметров компактных и полостных фолликул (F(2.273)=17.57, p0.01) у животных, обитающих в районах естественных геохимических аномалий (участок 1 и 2) по сравнению с фоновым участком. Количество вторичных и третичных фолликул коррелирует с уровнем гормональной активности яичников (Umezu, 1968). Таким образом, увеличение, как размеров фолликул, так и их количества в яичниках неполовозрелых самок рыжей полевки на аномальных участках свидетельствует о повышенной, по сравнению с фоновой территорией, активности их гонад и, вероятно, об ускорении полового созревания животных в районах с избыточным почвенным содержанием кобальта, никеля и хрома.

Наблюдаемое ускорение полового созревания животных связано со стимуляцией гонадотропной функции гипофиза соединениями хрома (Давыдова, 1980), и интенсификацией функции щитовидной железы, отмеченной ранее на территории изучаемой естественной геохимической аномалии в работах Е.В. Михеевой (2006), поскольку гормоны щитовидной железы ускоряют развитие организма (Теппермен, 1989).

Работа выполнена при финансовой поддержке РФФИ, проект № 07-04-96107.

ИССЛЕДОВАНИЕ ЭКСПРЕССИИ ТЯЖЕЛЫХ ЦЕПЕЙ МИОЗИНА

В ДИФФЕРЕНЦИРУЮЩИХСЯ САТЕЛЛИТНЫХ КЛЕТКАХ И

МИОБЛАСТАХ ИЗ СКЕЛЕТНЫХ МЫШЦ ЗАРОДЫШЕЙ

И НОВОРОЖДЕННЫХ КРЫС

Учреждение РАН, Институт биологии развития им. Н.К. Кольцова РАН, Москва, Россия.

Миозин – основной сократительный белок толстых филаментов мышечных волокон. Субъединичная структура его молекулы представлена двумя тяжелыми (ТЦМ) и четырьмя легкими (ЛЦМ) цепями, различия которых обуславливают наличие разных типов миозина.

Среди тяжелых цепей скелетного мышечного миозина известно шесть изоформ, каждая из которых является продуктом экспрессии разных генов и характерна для определенного типа мышечных волокон. В развивающихся скелетных мышцах экспрессируются, эмбриональная и перинатальная ТЦМ; в медленных зрелых мышечных волокнах синтезируется миозин, а для быстрых зрелых мышечных волокон характерны изоформы миозина 2а, 2в и 2х.

Цель работы – анализ экспрессии различных изоформ ТЦМ в процессе дифференцировки in vitro сателлитных клеток и миобластов из скелетных мышц зародышей (20–21 сут эмбрионального развития) и новорожденных (3–7-суточных) крыс. В процессе дифференцировки по миогенному пути сателлитные клетки и миобласты проходят несколько этапов. Первый этап характеризуется активацией сателлитных клеток с последующим их асимметричным делением, в результате которого одна клетка остается недифференцированной, а другая дает начало миобластам. Далее происходит слияние миобластов, наблюдаемое на 3-и и на 7-е сут культивирования сателлитных клеток и миобластов из мышц зародышей и новорожденных крыс соответственно. Образование миотуб и синтез специфических мышечных белков на следующем этапе дифференцировки отмечалось на 5-е (зародыши) и 10-е (новорожденные) сутки культивирования. Иммуноцитохимическое исследование с использованием поликлональных антител к тяжелым цепям скелетного миозина показало наличие соответствующего белка на ранних этапах дифференцировки, а именно в одноядерных миобластах до момента слияния их с образованием многоядерных миотуб. Так, медленные изоформы ТЦМ выявлялись уже на 3-е и 5-е сут культивирования в миобластах из мышц зародышей и новорожденных крыс соответственно. Тогда как быстрые изоформы ТЦМ выявлялись лишь в сокращающихся многоядерных миотубах на 7-е (зародыши) и 14-е (новорожденные) сутки дифференцировки. Следует отметить, что локализация миозина в одноядерных миобластах напоминала распределение элементов цитоскелета в клетке, тогда как в многоядерных миотубах, как и в дефинитивных миофибриллах, миозин входит в состав миофиламентов. Более детальный анализ экспрессии различных изоформ ТЦМ был проведен с помощью метода полимеразной цепной реакции (ПЦР). С использованием специфических праймеров была выявлена экспрессия эмбрионального и перинатального миозина на 2-и и 4-е сут дифференцировки сателлитных клеток и миобластов из мышц зародышей и новорожденных животных соответственно. Максимальный уровень экспрессии эмбрионального миозина выявлялся на 5-е (зародыши) и 10-е (новорожденные) сутки культивирования, которые соответствуют образованию многоядерных миотуб. Далее наблюдалось снижение уровня экспрессии этой изоформы. Характер экспрессии перинатального миозина отличался от эмбрионального. Так, в процессе дифференцировки сателлитных клеток и миобластов наблюдалось постепенное повышение уровня экспрессии перинатальной ТЦМ на протяжении всего культивирования от стадии одноядерных клеток (3-и и 4-е сут) до стадии активного сокращения сформировавшихся многоядерных миотуб (7-е и 14-е сут).

На 7-е (зародыши) и 14-е (новорожденные) сут культивирования, когда отмечалось активное сокращение миотуб, была выявлена экспрессия миозина 2а. Наличие этой изоформы характерно для зрелых мышечных волокон.

Таким образом, анализируя процессы миогенной дифференцировки in vitro, с использованием методов иммуноцитохимии мы впервые выявили наличие ТЦМ в одноядерных миобластах, с помощью ПЦР-анализа определили изоформы ТЦМ экспрессирующиеся первыми в ходе развития сателлитных клеток и миобластов по миогенному пути.

О ВОССТАНОВИТЕЛЬНЫХ ПОТЕНЦИЯХ ЦИРРОТИЧЕСКИ

ИЗМЕНЕННОЙ ПЕЧЕНИ ЧЕЛОВЕКА И КРЫС

Н.Н. Безбородкина, Г.А. Сакута, Г.С. Якупова Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург, Россия.

Лечение циррозов печени, причиной возникновения которых являются токсические вещества и вирусные инфекции, до сих пор остается нерешенной проблемой. Как правило, лечебные мероприятия направлены на устранение лишь частных проявлений этого заболевания (ликвидация асцита, снижение портальной гипертензии, уменьшение явлений энцефалопатии и т.д.) и не приводят к его полному излечению.

В связи с этим задача восстановления нарушенной структуры и функции цирротически измененной печени, по-прежнему, остается актуальной. Обычно о степени восстановления патологически измененной печени судят по косвенным клинико-биохимическим показателям или по результатам гистологического исследования ткани. В то же время о состоянии различных тканеспецифичных функций печени в ходе восстановительного процесса известно очень мало.

Исследования по стимуляции регенерации цирротической печени с помощью различных воздействий (частичной гепатэктомия, углеводная диета, хорионический гонадотропин, синтетический дипептид Lys-Glu (вилон), 2-этилтиобензимидазола гидробромид (бемитил)), проведенные в нашей лаборатории, показали, что формирование патологического процесса имеет целый ряд общих черт у животных и человека. В частности, наблюдались схожие нарушения состава клеточной популяции гепатоцитов и углеводного обмена, что, по-видимому, является неспецифической реакцией организма на воздействие повреждающего агента как вирусной, так и токсической природы.

Показано, что в ходе развития цирроза печени у крыс и человека происходит снижение доли 2с-гепатоцитов. В отличие от крыс, у которых в этом случае наблюдается резкое падение доли (2сх2)гепатоцитов, у человека доля клеток этого класса плоидности по сравнению с нормальным уровнем возрастает. В результате средний уровень плоидности гепатоцитов в цирротически измененной печени крыс возрастал на 40%. При стимуляции регенерации патологически измененной печени крыс (независимо от метода стимуляции) средний уровень плоидности снижался за счет преимущественной пролиферации клеток низкого уровня плоидности. Тем не менее, даже через 6 мес после прекращения воздействия CCl4 он оставался заметно выше, чем у контрольных животных. При этом нормализации уровня (2сх2)-гепатоцитов, которые играют большую роль в регенерации печени, практически не происходило.

Исследование содержания суммарного гликогена в гепатоцитах человека и животных показало, что при циррозе печени по сравнению с нормой оно увеличено в 2–3 раза. После стимуляции регенерации цирротической печени уровни гликогена постепенно снижались.

Вместе с тем, активность глюкозо-6-фосфатазы, одного из ключевых ферментов углеводного метаболизма, значений нормы не достигала и оставалась на низком уровне.

Все изученные нами способы воздействия вызывали некоторое улучшение структуры печени – уменьшение тяжей соединительной ткани, сокращение числа клеток Купфера, исчезновение лейкоцитарных инфильтратов. Тем не менее, полного восстановления нормальной дольковой структуры органа не происходило. Все способы воздействия вызывали также и некоторое улучшение структуры самих гепатоцитов.

Однако значительные различия в полноте или скорости нормализации структуры цирротически измененной печени после применения различных способов стимуляции ее регенерации отсутствовали.

Таким образом, полного восстановления структуры и функции цирротической печени после стимуляции регенерации органа различными способами, не происходило. В связи с этим задача восстановления функции цирротически измененной печени в настоящее время должна решаться не только путем поиска новых способов полного восстановления исходной структуры органа, но и с помощью поддержания и улучшения условий жизнедеятельности паренхимы печени, продолжающей сохранять морфологические черты цирроза.

КОМПЕНСАТОРНОЕ ИЗМЕНЕНИЕ КЛЕТОЧНОГО ОБЪЕМА

РАННЕГО ЭМБРИОНА МЫШИ В ГИПОТОНИЧЕСКИХ УСЛОВИЯХ

В.А. Голиченков1, М.А. Погорелова1,2, А.Г. Погорелов Московский государственный университет Институт теоретической и экспериментальной Цитоплазматическая мембрана раннего эмбриона млекопитающих чрезвычайно проницаема для воды, что делает клетку легко подверженной действию осмотического шока. Изменение объема клетки участвует в регуляции ряда ключевых функций, таких как: синтез белков, экспрессия генов, клеточная смерть и др. Для многих линий дифференцированных клеток показано восстановление клеточного объема при гипотонии, индуцированной изменением электролитного баланса. Комплекс механизмов транспорта ионов, участвующих в регуляторном ответе на осмотический шок, обсуждается в ряде обзоров. Учитывая особенности раннего эмбриона, например, низкую активность Na+-K+ насоса или отсутствие Na+-Н+ обмена и аномально высокую цитоплазматическую концентрацию натрия, закономерности, установленные для клеток в культуре, не применимы к эмбриональной клетке. В данной работе проведены прямые измерения объема бластомера двухклеточного эмбриона мыши в течение гипоосмотического шока. Для этого применялась технология микротомографии с использованием лазерной сканирующей микроскопии и 3D реконструкцией клетки.

Анализ кривой, описывающей осмотическое поведение бластомера при гипотонии, показывает, что сначала эмбриональная клетка набухает, но затем стремится восстановить исходный размер. В фазе увеличения объема поведение бластомера описывается линейным законом Вант-Гоффа с коэффициентом проницаемости для воды, значение которого близко к величине, определенной раннее для ооцита мыши. После максимального набухания наступает фаза аномального ответа, когда наблюдается уменьшение объема клетки. В эту адаптивную реакцию (RVD) вовлекаются различные механизмы:

электроосмос, аномальный осмос, изменение термодинамических характеристик клеточной среды, например, положительная гидратация воды ионами натрия. Наши эксперименты показывают, что RVD для эмбриональной клетки не регулируется Na+/K+-ATPaзой. Изменение изоэлектрической точки белков в кислой среде (рН 6.4) приводит к пролонгированию фазы набухания. Аномальное поведение бластомера в гипотонической среде отменяется на фоне действия цитохалазина Б.

ОЦЕНКА ВЛИЯНИЯ КОНСТИТУТИВНОЙ ЭКСПРЕССИИ ГЕНОВГОМОЛОГОВ AP1, SEP1, 2 И FUL ИЗ СЛОЖНОЦВЕТНЫХ НА

ВЕГЕТАТИВНОЕ И ГЕНЕРАТИВНОЕ РАЗВИТИЕ ТАБАКА

Е.Н. Головешкина, А.В. Щенникова, А.М. Камионская, О.А. Шульга Учреждение РАН, Центр «Биоинженерия», Москва, Россия.

Цветение – ключевой момент в жизненном цикле растений. Все происходящие в организме процессы (биохимические, физиологические и др.) осуществляются при координированной экспрессии различных групп генов. Каждая группа составляет основу определенной генной сети, отвечающей за те или иные процессы. Не является исключением и процесс цветения, инициация которого происходит в результате комплексного влияния условий окружающей среды и соответствующего ответа генной сети, при котором в растениях вегетативная меристема трансформируется в генеративную. На сегодняшний день наиболее изученными объектами молекулярно-генетических исследования процессов развития цветка являются арабидопсис (Arabidopsis thaliana), львиный зев (Antirrhinum majus) и петуния (Petunia hybrida). С использованием этих модельных растений показано, что генетические схемы развития цветка очень консервативны даже для столь филогенетически отдаленных видов растений.

В настоящее время для изучения роли новых клонированных генов широко используется методика анализа трансгенных растений, экспрессирующих данные гены. Ранее сотрудниками Центра «Биоинженерия» РАН были получены и проанализированы кДНК библиотеки, содержащие кДНК MADS-генов хризантемы (Chrysanthemum D.

grandiflora, MADS) – CDM 111, CDM 44, CDM 8, CDM 77, и генов подсолнечника (Helianthus annuus, MADS) – HAM 92, HAM 137, HAM 75, экспрессирующихся в процессе формирования и развития соцветий.

Клонированные гены HAM 75, CDM 111, HAM 92 являются структурными гомологами гена арабидопсиса AP1; гены CDM 77, HAM 137 – гомологами SEP1,2; ген CDM 44 – SEP3; CDM 8 – FUL. Мы предполагаем, что конститутивная экспрессия этих генов может привести к изменениям в вегетативном и генеративном развитии.

Целью нашей работы является изучение влияния конститутивной экспрессии клонированных генов на вегетативное развитие и процесс цветения трансгенных растений табака Nicotiana tabacum v.

Samsun NN.

Изучение влияния экспрессии гетерологичных генов на вегетативное и генеративное развитие растений проводили на поколении Т1, предварительно отобрав растения, которые давали расщепление 3: по маркерному гену nptII, обуславливающему устойчивость к антибиотику канамицину. Анализируемые растения одновременно с контрольными культивировались в условиях искусственного климата.

Трансгенные растения поколения Т1, несущие гены CDM 77, HAM 137, CDM 44, и CDM 8, не имели значительных отличий от контрольных растений.

В трансгенных растениях, содержащих гены-гомологи AP1 – HAM 75, CDM 111, HAM 92, наблюдали значительные отличия от контрольных по анализируемым признакам. По сравнению с контролем эти растения зацветали раньше на 25 дней, имели более короткий стебель, образовывали меньше листьев и больше цветков в соцветиях. В поколении Т1 не было обнаружено отклонений в морфологии цветков.

Наблюдаемые изменения времени цветения свидетельствуют о сокращении вегетативной фазы у трансгенных растений, экспрессирующих гены-гомологи AP1. Среди этой группы трансгенных линий две линии (D4, D8) отличались от всех остальных. Эти растения зацветали одновременно с контрольными и образовывали в среднем на 8 листьев больше. Результаты ОТ-ПЦР анализа показали, что в растениях этих двух линий гетерологичные MADS – бокс гены не экспрессируются, что объясняет отсутствие эффекта ускорения цветения.

Таким образом, показано, что конститутивная экспрессия генов гомологов AP1 – HAM 75, CDM 111, HAM 92 в трансгенных растениях табака Nicotiana tabacum влияет на вегетативное и генеративное развитие, приводя к изменению сроков цветения.

РЕГУЛЯЦИЯ ОБЪЕМА КЛЕТОК КРОВИ

ПОЗВОНОЧНЫХ ЖИВОТНЫХ

Белгородский государственный университет, Белгород, Россия.

Кровь одна из тканей внутренней среды, представляющая собой систему разнообразных клеточных элементов и жидкого межклеточного вещества (плазмы). Для поддержания функциональной активности форменных элементов крови необходима стабильность их объема. В связи с этим в процессе эволюции возникла и развилась система авторегуляции объема клеток. Естественно предположить, что степень развития этой системы различна у разных групп животных.

Целью исследования была сравнительная оценка осморегуляторных реакций клеток крови позвоночных животных: крысы серой (Rattus norvegicus), курицы домашней (Gallus domesticus), лягушки пудовой (Rana ridibunda) и сазана (Cyprynus carpio).

Для достижения цели исследования необходимо было определить морфометрические показателей форменных элементов крови, инкубированных в растворах с различным осмотическим давлением.

С помощью метода экспозиции клеток в гипотонических растворах хлорида натрия (концентрация раствора для каждого вида животных подбиралась индивидуально, исходя из ее нормального показателя) выяснилось следующее. Наблюдается неравномерность развития этой системы как между видами по отдельным типам клеток, так и у каждого вида между разными типами клеток. При этом от рыб к млекопитающим у лимфоцитов происходит уменьшение способности к восстановлению объема, а у гранулоцитов и эритроцитов ее возрастание. То есть в процессе эволюции система поддержания объема клеток миелоидного ряда становится более совершенной, а лимфоидного несколько регрессирует.

Таким образом, историческое развитие системы регуляции объема по типам гемоцитов идет неравномерно.

ОСОБЕННОСТИ ГРАНУЛОГЕНЕЗА В ЭОЗИНОФИЛАХ КОСТНОГО

МОЗГА У НОРОК РАЗЛИЧНЫХ ГЕНОТИПОВ

Институт биологии Карельского научного центра РАН, В настоящее время по-прежнему актуально изучение механизмов дифференцировки клеточных структур в процессе развития. Хорошей моделью для исследования функциональной специализации являются клетки крови и костного мозга. В данной работе представлено сравнительное изучение гранулогенеза в эозинофилах костного мозга у норок трех генотипов: стандартной темно-коричневой (генетический символ – +/+) и мутантных – монорецессивной серебристо-голубой (p/p) и комбинативной дирециссивной сапфировой (a/ap/p). Известно, что норки сапфирового окраса по сравнению со стандартными темно-коричневыми (дикий тип) и мутантными серебристо-голубыми характеризуются более низкой плодовитостью и жизнеспособностью, а также повышенной чувствительностью к вирусному плазмоцитозу.

На мазках костного мозга, окрашенных по Паппенгейму, оценивали морфологию эозинофилов в процессе созревания и после выхода в периферическую кровь. Морфометрический анализ параметров гранул эозинофилов у сапфировых норок (площадь, в том числе суммарная, количество, длина, ширина) осуществляли с помощью компьютерной системы анализа изображений с цветной цифровой видеокамерой и программным обеспечением “Видеотест”. Обработку данных проводили общепринятыми методами вариационной статистики.

Установлено, что у сапфировых норок по сравнению с темнокоричневыми и серебристо-голубыми наблюдаются существенные отличия в величине и количестве гранул эозинофилов. Выявленный дефект имеет сходство с наследственным заболеванием – с синдромом Чедиак-Хигаши, которое обнаружено у некоторых видов животных и человека. Аномально большие гранулы, свидетельствующие о генетическом нарушении у норок сапфирового окраса, образуются в эозинофилах костного мозга в процессе созревания. При этом степень дефекта лейкоцитов не остается постоянной, а изменяется в ходе онтогенеза клетки. На ранних стадиях – в частности, в миелоцитах, наблюдается обильная, почти однородная по величине зернистость.

У сапфировых норок величина гранул значительно больше, чем в этот период в эозинофильных миелоцитах у темно-коричневых и серебристо-голубых норок. Количество гранул на этом этапе созревания существенно варьирует. На их содержание может влиять способность миелоцитов к пролиферации, в результате которой количество гранул равномерно распределяется между вновь образующимися клетками.

В дальнейшем – в метамиелоцитах и палочкоядерных формах наблюдается уменьшение содержания гранул, по-видимому, вследствие их укрупнения. Этот процесс наблюдается также в зрелых эозинофилах костного мозга и циркулирующих в периферической крови. Из всех исследованных нами стадий развития наименьшее количество гранул и соответственно наибольшая их величина обнаружены в зрелых эозинофилах. При этом параметры гранул значительно варьируют как в отдельных клетках, так и у отдельных особей.

Таким образом, на ранних стадиях созревания в эозинофильных миелоцитах костного мозга сапфировых норок формируются более крупные гранулы, чем у темно-коричневых и серебристо-голубых. Нарушение гранулогенеза в эозинофилах обусловлено алеутским геном в рецессивном состоянии (aa). Существенное изменение параметров гранул и их конфигурации выявлено в постмитотический период развития и особенно характерно для зрелых эозинофилов. Наибольшая степень дефекта (по величине и количеству гранул), наблюдаемая в зрелых эозинофилах, соответствуют периодам развития, когда изменяются физико-химические свойства клеток, их метаболическое состояние и функциональная активность.

Работа выполнена при поддержке гранта президента РФ – НШ-306.2008.4.

РОЛЬ СИГНАЛЬНЫХ ПУТЕЙ ФАКТОРОВ СЕМЕЙСТВА TGF В

ДЕТЕРМИНАЦИИ КЛЕТОЧНОЙ СУДЬБЫ ПЛЮРИПОТЕНТНЫХ

СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК В МОДЕЛЯХ IN VITRO И В РАННЕМ

РАЗВИТИИ МЛЕКОПИТАЮЩИХ

Учреждение РАН, Институт биологии развития им. Н.К. Кольцова РАН, Москва, Россия.

Исследования функционирования различных сигнальных систем является актуальными задачами современной биологии развития.

Сигнальные пути факторов семейства TGF (Activin, Nodal, Lefties, TGF, BMPs, GDFs) вовлечены в регуляцию различных процессов развития – дифференцировки ранних эмбриональных клеток и внезародышевых структур, формирования осей полярности и мофогенетических преобразований зародыша, а также контролируют процессы опухолевого роста в тканях взрослого организма. Для исследования роли различных ветвей сигнальных путей факторов семейства TGF в поддержании плюрипотентности и детерминации различных линий соматических и половых клеток на ранних стадиях эмбрионального развития используются модельные системы in vitro – линии эмбриональных стволовых (ЭСК) и эмбриональных герминативных (ЭГК) клеток. Малигнизированные аналоги плюрипотентных клеток – линии тератокарциномы (ЭТК), имеющие ограниченный потенциал к дифференцировке вследствие различных генетических нарушений, также представляют интерес для изучения нарушений программы специализации ранних эмбриональных клеток.

Проведенный нами анализ транскрипционных профилей, включающих гены-компоненты различных ветвей сигнальных путей факторов TGF, в ЭСК, ЭГК и ЭТК, находящихся в различных экспериментальных условиях в ходе спонтанной и индуцированной дифференцировки, демонстрирует сходство основной стратегии регуляции этими факторами специализации клеток-предшественников различных зародышевых листков и внезародышевых тканей. Исследования соотношения процессов пролиферации, дифференцировки и клеточной гибели в линиях ЭСК, ЭГК и ЭТК в различных экспериментальных системах выявили основные корреляции с изменениями в паттерне экспрессии сигнальных факторов семейства TGF и специфических транскрипционных факторов. Полученные данные расширяют наши представления о механизмах раннего развития млекопитающих и являются основой для разработки новых высокотехнологических тестсистем на основе плюрипотентных клеток.

Работа выполнена при финансовой поддержке РФФИ (проект № 08-04-01307).

ФОРМИРОВАНИЕ ПОСТОЖОГОВОГО РУБЦА:

ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ РУБЦОВОЙ

ТКАНИ, БИОХИМИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ КРОВИ

Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова, Факультет фундаментальной медицины, Москва, Россия.

Формирование постожогового рубца часто сопровождается различного рода осложнениями: гипертрофия или атрофия тканей, формирование келоидных рубцов. По имеющимся в литературе данным, фибробласты дермы являются основными участниками процесса заживления раны. В настоящее время при поражениях кожи используется метод закрытия постожоговых поверхностей синтетическими носителями, покрытыми монослоем фибробластов. Для этих целей используются клетки сертифицированных линий аллогенных фибробластов человека или так называемые эмбриональные фибробласты. Однако такой подход в ряде случаев приводит к развитию нежелательных процессов – отторжению и аллергической реакции из-за использования генетически несовместимого клеточного материала.

Поэтому, перспективным направлением представляется разработка методов выделения, культивирования и применения аутологичных фибробластов для использования при лечении последствий ожогов большой площади. Кроме того, выделенные фибробласты могут явиться удобной моделью для тестирования и сертификации лекарственных препаратов, разрабатываемых для лечения постожоговых поверхностей.

Известно, что при ожогах срок заживления может значительно увеличиваться, а ожоги второй и третьей степени часто сопровождаются образованием гипертрофированного шрама. Это говорит об отличном от других ран течении заживления, и, соответственно, об изменении характеристик фибробластов, участвующих в формировании рубца. Анализ биоптатов ожоговых ран и рубцов на разные сроки заживления позволит выявить морфологические и функциональные особенности фибробластов, участвующих в заживлении раны и формировании рубца, а также охарактеризовать особенности течения заживления ожога.

Известно, что заживление регулируется большим количеством цитокинов и факторов роста. Однако эти процессы изучены не полностью. Особенно мало данных о контролируемом завершении выполнения клетками своих функций в ходе заживления, что вероятно также регулируется факторами роста. Поэтому анализ их содержания в крови ожоговых больных и сравнение с сывороткой здоровых доноров, а также сопоставление этих данных с результатами цитологических и гистологических исследований позволит в дальнейшем исследовать молекулярные механизмы заживления постожоговых ран и разработать способы выделения и наращивания фибробластов для закрытия ожоговых поверхностей.

В работе была сделана попытка при помощи стандартной методики выделить фибробласты из биоптатов ожоговой ткани и прилежащей к ней здоровой кожи. На криостатных резах рубцовой ткани на разные сроки заживления было проанализировано наличие пролиферирующих и апоптотических клеток, при помощи иммуногистохимии исследовано развитие сосудов в формирующемся рубце. У больных с ожогами в сыворотке крови проанализировано содержание ангиогенных факторов роста (VEGF, bFGF, HGF и ангиопоэтина-1) и сопоставлено с количеством этих факторов в сыворотке крови здоровых доноров. В результате исследования было показано:

1. На поздних сроках формирования рубца (7–11 мес после повреждения) в биоптатах рубцовой ткани начинается активная пролиферация клеток, которая со временем падает, при этом процент апоптотических клеток растет.

2. В сыворотках крови пациентов с ожогами уровень факторов роста (VEGF, bFGF, HGF и ангиопоэтина-1) достоверно выше, чем у здоровых доноров.

3. Фибробласты, выделенные из ожоговой ткани и прилежащей к ней здоровой кожи и культивируемые по стандартной методике, не пролиферируют.

Полученные данные позволяют предположить, что высокий уровень факторов роста в крови пациентов с ожогами влияет на состояние фибробластов как в зоне повреждения, так и в прилежащей зоне, вследствие чего их выделение и культивирование по стандартной методике не удается.

АКТИВАЦИЯ СЕРОТОНИНОВЫХ РЕЦЕПТОРОВ В АОРТЕ КРЫСЫ

ЭНДОГЕННЫМИ ВАЗОКОНСТРИКТОРАМИ

А.Г. Давыдова1, П.В. Авдонин1,2, Л.М. Кожевникова Учреждение РАН, Институт биологии развития НИИ общей патологии и патофизиологии РАМН, Москва, Россия.

Серотонин (5-гидрокситриптамин, 5-НТ) – один из основных медиаторов центральной нервной системы, выполняющий также важные гормональные функции в периферической нервной системе. В настоящее время описано 7 групп серотониновых рецепторов, но функция многих из них до сих пор неизвестна. Установлено, что 5-НТ рецепторов всех типов, за исключением 5-НТ3 рецепторов, имеют 7 трансмембранных доменов и относятся к семейству G-белокзависимых рецепторов. Рецепторы 5НТ3 типа участвуют в образовании каналов для натрия и калия, и их возбуждение агонистами приводит к увеличению проницаемости каналов для этих ионов. В кровеносных сосудах млекопитающих выявлены рецепторы 5НТ1А-, 5НТ1В-, 5НТ1D-, 5НТ2А-, 5НТ2В-, 5НТ2С-, 5НТ4- и 5НТ7-типов. Накопленный в настоящее время экспериментальный материал о роли различных типов 5НТ-рецепторов в регуляции сосудистого тонуса и о запускаемых ими механизмах передачи сигнала в клетку не всегда имеет однозначную трактовку.

Целью настоящего исследования было выяснение, какие из 5НТ-рецепторов ответственны за реализацию вазоконстрикторных и вазодилататорных эффектов серотонина. Изучено также влияние изменения потенциала плазматической мембраны гладкомышечных клеток сосудов и функциональной активности рецепторов других эндогенных вазоактивных соединений на вазоконстрикторный эффект серотонина. Измерение силы сокращения колец изолированной аорты крысы проводили в изометрическом режиме по методу Мульвани. В работе были применены фармакологические подходы, направленные на идентификацию 5НТ-рецепторов, опосредующих вазоконстрикторный и вазодилататорный эффекты серотонина.

Агонист 5НТ1А-рецепторов бушпирон в концентрациях 10- – 10-7М не вызывал сокращения изолированной аорты. Показано, что вазоконстрикторное действие более высокой концентрации (10-6М) бушпирона обусловлено его неспецифическим действием на 1-адренорецепторы (1-АР), поскольку сократительный эффект не воспроизводился в экспериментах с блокатором 1-АР празозином.

Бушпирон и другой агонист 5НТ1А-рецепторов 8-OH-DPAT вызывали расслабление аорты, предсокращенной норадреналином (НА) или эндотелином (ЭТ-1). Расслабляющий эффект не связан с неспецифической активацией мускариновых рецепторов, поскольку он воспроизводится на сосудах, предварительно проинкубированных с антагонистом этих рецепторов скополамином. Эти данные свидетельствуют об участии 5НТ1А-рецепторов в реализации сосудорасслабляющего эффекта 5НТ. Селективный агонист 5HT1B-рецепторов CGS12066B в концентрациях 10-7–10-5М не влиял на сокращение изолированных фрагментов грудного отдела аорты, но дозозависимо расслаблял сосуды, предсокращенные НА или ЭТ-1. Аналогичные результаты были получены и при исследовании высокоселективного агониста 5HT1D-рецепторов L-694, 247. Показано, что серотонин вызывает сокращение аорты крысы, действуя через 5НТ2А-рецепторы. Блокаторы 5НТ2-рецепторов миансерин (10-7М) и 5НТ2А-рецепторов кетансерин (10-810-6М) дозозависимо снижали сократительную реакцию аорты на серотонин (10-5М). Агонист 5НТ2В-рецепторов BW723C86 (10-5 – 510-5М) значительно уменьшал силу изометрического сокращения предсокращенных НА или ЭТ-1 сосудов. Установлено, что 5НТ2С- и 5НТ3-рецепторы непосредственно не участвуют в регуляции тонуса аорты. Агонист 5НТ4-рецепторов RS67506 (10-5 – 510-5М) вызывал расслабление предсокращенной НА или ЭТ-1 аорты. Применение данного агониста на препарате аорты с функционально неактивным эндотелием не приводило к расслаблению сосуда. Это свидетельствует о локализации 5НТ4-рецепторов в клетках сосудистого эндотелия. Показано, что деполяризация мембраны клеток аорты (15мМ KCl) усиливает вазоконстрикторное действие 5НТ. На фоне деполяризации сила сокращения аорты возрастает, достоверно превышая первоначальную прессорную реакцию на серотонин. Главную роль в реализации вазоконстрикторного эффекта серотонина при изменении потенциала мембраны клеток играют 5НТ2А-рецепторы. Вазоконстрикторная реакция аорты на серотонин также усиливается при активации 1-АР норадреналином и ETA рецепторов эндотелином-1. Блокада кетансерином сократительной реакции на введение 5НТ в значительной степени снималась НА и ЭТ-1. Можно предположить, что активация 1-АР или ETA рецепторов меняет свойства 5НТ2А-рецепторов, увеличивая их сродство к серотонину, либо начинают функционировать «молчащие»

рецепторы другого вида, либо снимается действие вазодилататорных рецепторов. Последнее предположение нам кажется менее вероятным, т.к. под действием агонистов 5НТ1 и 5НТ4-рецепторов аорта, предсокращенная НА или ЭТ-1, расслабляется. В настоящем исследовании также не удалось подтвердить гипотезу об активации «молчащих»

5НТ-рецепторов. Учитывая полученные результаты, нельзя исключить, что 5НТ2А-рецепторы димеризуются с 1-АР и ЕТА рецепторами.

Работа поддержана грантами РФФИ (№ 07-04-01443-а) и SCOPES (№ IB74AO-110940).

ПЕРЕСТРОЙКА МЕХАНИЧЕСКИ НАПРЯЖЕННОЙ КЛЕТОЧНОЙ

СЕТИ В РАННЕМ РАЗВИТИИ Xenopus laevis И Clava multicornis:

НАБЛЮДЕНИЯ И МОДЕЛЬ

Институт теоретической и экспериментальной Московский государственный университет Недифференцированная эмбриональная ткань, как правило, образована плотно упакованными гексагональными изодиаметрическими клетками. В первом приближении такую ткань можно рассматривать как гексагональную сеть. Практически все процессы морфогенеза связаны с нарушениями упаковки этой исходно однородной сети.

Один из ранних и широко распространенных типов нарушения исходной упаковки – это деламинация (возникновение линий сглаженных клеточных поверхностей). Ей часто сопутствует интеркаляция – встречные движения клеток, связанные со сменой соседей. Мы исследовали, можно ли рассматривать данные переупаковки как результат кооперативной потери устойчивости исходной гексагональной решетки под действием малых возмущений, если допустить что: (1) клеточные стенки обладают исходным тоническим напряжением и (2) при любом отклонении от исходного значения происходит его гипервосстановление (ГВ) (восстановление исходного механического напряжения с перехлестом) (Beloussov, 2008).

В работе исследуются два примера деламинации – возникновение устойчивой (1) и неустойчивой (2) деламинационной борозды (ДБ) – с сопутствующей интеркаляцией клеток. Также обсуждается проблема формирования клеточных розеток в эпиэктодерме Xenopus.

(1) Рассмотрена модель одного узла гексагональной решетки, образуемого тремя клеточными стенками (ребрами решетки), имеющими общую вершину. Изучались условия, при которых общая вершина будет двигаться вверх (интеркаляция) или вниз до горизонтали (деламинация) после возникновения реакции ГВ на растяжение стенок.

С помощью модели показали, что тип сценария (интеркаляция или деламинация) определяется начальным углом между ребрами: если 2 120°, то идет деламинация, а если 2 120°, то – интеркаляция.

На зарисовках со срезов последовательных стадий развития зародышей гидроидного полипа Clava multicornis, измерялись углы, образуемые сходящимися в одной вершине клеточными стенками. У данного гидроида разделение клеточной массы на экто- и энтодерму происходит за счет деламинации. Измерения на клетках будущей эктодермы показали, что перед выравниванием клеточных границ углы меньше 120°.

Данный процесс также сопровождается интеркаляцией, перед которой большинство углов больше 120°. Все полученные данные соответствуют модели. Для клеток эктодермы обнаружено довольно четкое разделение углов по значениям на две группы на определенных стадиях развития, а также периодические колебания во времени (на последовательности стадий развития) значений процента углов больше или меньше 120°.

Также показана постепенная дифференцировка клеток энтодермы, прилегающих к длинной оси зародыша, по значениям вершинных углов.

(2) В соответствии с результатами, полученными при изучении динамики деламинационных борозд в эпиэктодерме супрабластопоральной области Xenopus laevis in vivo, была предложена модель формирования ДБ в гексагональной изодиаметрической сети. Первым этапом формирования является спонтанное сокращение одного из ребер, вследствие чего, происходит пассивное растяжение четырех соседних ребер, в одном из которых возникает ГВ. Мы предполагаем, что выбор ребра происходит случайно. ГВ происходит за счет экзоцитоза мембранных везикул в растянутое ребро, что приводит к давлению (и последующему сжатию) на смежное ребро, которое образует с ним тупой угол. В нем также возникает ГВ, но уже в виде эндоцитоза мембранных везикул (Wolfe, 2005). Далее цикл повторяется несколько раз, что приводит к формированию ДБ.

Из предложенной модели следует, что образование прямых углов и многолучевых вершин (3 ребер) связанно с формированием ДБ, что соответствует экспериментально полученным данным. Так же нашу модель подтверждает последовательность сокращения ребер во время интеркаляции в бластодерме Drosophila (Bertet et al., 2003).

Распад ДБ осуществляется через посредство интеркаляции, и есть основания предполагать, что эти клеточные структуры имеют своей функцией задавать направление движения групп клеток и координировать морфогенез в целом.

Мы хотим так же обратить внимание на такие структуры как клеточные розетки (КР). Аналогичные структуры до этого были обнаружены в эктодерме эмбрионов птиц и в бластодерме эмбрионов Drosophila (Wagstaff et al., 2008, Blankenship et al., 2006). В последнем случае достоверно известно, что формирование КР – это особый вид интеркаляции. Биологический смысл КР в эктодерме Xenopus до конца неясен, но имеются экспериментальные данные позволяющие предположить несколько способов их формирования: (1) формирование в результате самопроизвольных разрывов механически натянутой эктодермы в процессе клеточных перегруппировки и (2) как результат формирования колбовидных клеток в эктодерме. Также, КР могут являться вспомогательным механизмом интеркаляции как у Drosophila.

МОЛЕКУЛЯРНОЕ КАРТИРОВАНИЕ ЗОН НЕЙРОНАЛЬНОЙ

ПЛАСТИЧНОСТИ В ПРЕНАТАЛЬНОМ И НЕОНАТАЛЬНОМ

МОЗГЕ МЫШЕЙ

О.И. Ефимова, Д.В. Безряднов, К.В. Анохин Научно-исследовательский институт нормальной физиологии им. П.К. Анохина РАМH, Москва, Россия.

Показано, что в первые дни после рождения экспрессия немедленных ранних генов, кодирующих индуцируемые транскрипционные факторы, минимальна, а незначительное расширение паттерна экспрессии происходит за счет единичных нейронов и наблюдается только в обонятельных структурах мозга (Yamasita et al., 1991; Gubits et al., 1998;

Andre, 1998). Поэтому вопрос о том, за счет каких транскрипционных механизмов происходит формирование нового долговременного опыта у новорожденных животных, остается открытым. Целью настоящего исследования было изучить возможность индукции немедленных ранних генов в мозге мышей в период до и после рождения. Для этого было проведено картирование экспрессии транскрипционных факторов c-Fos и Zif/268 (фоновой и индуцированной холодовым воздействием) в мозге мышей в эмбриональном возрасте (Е16, Е20), в первые часы после рождения (1, 2, 4, 6,12 ч) и раннем постнатальном периоде (Р2, Р4).

В работе использовали потомство мышей линии С57Bl/6 обоих полов (n=45). Индукцию экспрессии ранних генов проводили стимуляцией холодом (+4С) в течение 2 мин. Иммуногистохимическое выявление белков с-Fos и Zif/268 проводили на соседних криостатных срезах по стандартной методике.

Картирование паттернов экспрессии немедленных ранних генов c-fos и zif/268 в мозге мышей в период до и после рождения выявило следующую динамику. Фоновая экспрессия белков c-Fos и Zif/268 в интактном мозге эмбрионов почти отсутствовала. На 16-е эмбриональные сутки отдельные c-Fos-иммунореактивные клетки наблюдались в латеральной уздечке, на 20-е сутки эмбрионального развития – в гранулярном и митральном слоях главных обонятельных луковиц и в хвостатом ядре. Слабая экспрессия Zif/268 обнаружена на Е16 в стриатуме и на Е20 – в гранулярном и митральном слоях главных обонятельных луковиц, пириформной коре и зубчатой фасции гиппокампа. Сразу после рождения в течение 1–2 ч уровень экспрессии белков c-Fos и Zif/268 оставался низким. Иммунореактивные клетки наблюдались в тех же структурах, что и в эмбриональном мозге, однако белок с-Fos появился в пириформной коре и ядрах шва, а белок Zif/268 – в первичной соматосенсорной коре и в поле СА1 гиппокампа.

В период 4–6 ч после рождения наблюдался максимально широкий паттерн экспрессии белков c-Fos и Zif/268 в мозге новорожденных мышат. Высокий уровень экспрессии c-Fos был в гломерулярном, гранулярном и митральном слоях главных обонятельных луковиц, передних обонятельных ядрах, клауструме, дорсальном эндопириформном ядре, септуме, хвостатом ядре, прелимбической, фронтальной ассоциативной, пириформной, цингулярной, моторной, соматосенсорной коре, вставочной зоне, уздечке, передних, медиодорсальных, дорсомедиальным ядрах таламуса, септогиппокампальном, паратениальном, паравентрикулярных таламических ядрах, супраоптическом ядре, вентромедиальных, дорсомедиальных, паравентрикулярных ядрах гипоталамуса, супрахиазматических, аркуатных ядрах, полях СА1, СА2, СА3 гиппокампа, зубчатой фасции, мезенцефальном тригеминальном ядре, моторном тригеминальном ядре, ядрах шва. Базальная экспрессия Zif/268 4–6 ч после рождения также характеризуется очень широким паттерном, однако, имела свои особенности. Очень мало или совсем отсутствовали Zif/268-иимунореактивные нейроны в таламусе и среднем мозге.

Через 12 ч после рождения волна экспрессии c-Fos и Zif/268 в мозге угасала. Единичные c-Fos-положительные клетки наблюдались в главных обонятельных луковицах, стриатуме, мезенцефальном тригеминальном ядре, ядрах шва, а Zif/268 – в главных обонятельных луковицах, стриатуме, септуме. Сходный паттерн экспрессии в мозге наблюдался и на 2-ые и 4-ые сутки постнатального развития.

Стимуляции холодом эмбрионов на 16-е сутки эмбрионального развития и через 12 ч после рождения не меняла паттерн экспрессии c-Fos и Zif/268. На 2-ые сутки постнатального развития c-Fos дополнительно экспрессировался в ядрах шва и мезенцефальном тригеминальном ядре, а на 4-ые – в митральном слое обонятельных луковиц и пириформной коре. Дополнительные места экспрессии белка Zif/ на 2-е сутки – в пириформной коре, на 4-ые – в гломерулярном слое главных обонятельных луковиц, передних обонятельных ядрах, паравентрикулярных и супрахиазматических ядрах гипоталамуса.

Таким образом, в мозге новорожденных мышей наблюдается кратковременное увеличение экспрессии немедленных ранних генов c-fos и zif/268, которое начинается через 2–4 ч после рождения и угасает через 6–12 ч после рождения. Стимуляция холодом через 12 ч после рождения, на 2-е и 4-е сутки постнатального развития не приводит к усилению экспрессии этих транскрипционных факторов.

Исследование причин и функционального значения этого кратковременного всплеска транскрипционной активности в клетках мозга сразу после рождения требует дальнейших исследований.

АНАЛИЗ Arg-X ПРОТЕОЛИЗА В СУПРАСТРУКТУРАХ

КЛЕТОЧНОГО ЯДРА ПРИ ИНИЦИАЦИИ РОСТОВОГО

МОРФОГЕНЕЗА ЗРЕЛЫХ ЗАРОДЫШЕЙ

ПШЕНИЦЫ IN VIVO

Р.С. Иванов, Г.Х. Вафина, Э.А. Иванова Институт биологии РАН, Уфа, Россия.

Роль хроматина в регуляции активности генов при особенностях морфогенетических процессов в соматических и репродуктивных клетках до сих пор является широко обсуждаемым вопросом. Известно, что в клеточном ядре происходит многократное (этапное) сокращение линейных размеров ДНК при сохранении доступности определенных ее участков для регуляторных факторов и ферментов транскрипции в течение дифференцировки. В основе процессов, происходящих на уровне клеточного ядра, лежат явления, которые иногда называют «молекулярными морфогенезами», и которые основаны на модификации хорошо изученных сил межмолекулярных взаимодействий: ковалентных, ионных, гидрофобных и водородных. Физическую связь между хромосомами осуществляют межхромосомные нити, которые разрываются под действием ДНК-азы, а под действием трипсина и РНК-азы становятся менее упругими. Показано, что N-концевые участки лизиновых и аргининовых остатков, не входящие в состав нуклеосомной глобулы, подвергаются различным модификациям и участвуют в межнуклеосомных взаимодействиях. Совокупность сигналов, экспонированных на поверхности нуклеосом, представляет собой эпигенетический код, называемый также гистоновым кодом. Мы предположили, что специфический протеолиз (расщепление под действием трипсиноподобных протеаз связей Arg-X, которым богаты белки, ассоциированные с нуклеиновыми кислотами) может быть вовлечен в механизмы ремоделирования хроматина в дифференцированных клетках.

Целью нашей работы было исследование протеолитического Arg-X-процессинга в надмолекулярных структурах ядра: нуклеоплазме, хроматине, ядерном матриксе при инициации ростовых процессов зрелых зародышей пшеницы в течение 0 ч 3 ч 6 ч 9 ч 12 ч 15 ч 18 ч 22 ч транскрипционной активации хроматина.

Объектом исследования служили высокодифференцированные зрелые воздушно-сухие зародыши пшеницы (Triticum aestivum L.), которые растут, в период инициации G1-фазы клеточного цикла, за счет растяжения клеток. Наш подход заключался в постепенном, плавном разрыве внутриядерных слабых и сильных ионных, гидрофобных, водородных, взаимодействий на уровне нуклеоплазмы, непрочно- и прочносвязанного с ядерным матриксом хроматина и самого ядерного матрикса. Трипсиноподобную (Arg-X) активность и активность ингибитора трипсиновой активности оценивали, соответственно, по расщеплению и ингибированию расщепления Arg-X связей в богатом аргинином белке протамине Salmine-A-I («Merk») во всех указанных фракциях ядер. Выделенные надмолекулярные фракции (супраструктуры) ядра содержали помимо белков хромонемную ДНК, РНК, гексозы, липиды. При прохождении фаз клеточного цикла в этих фракциях меняется соотношение ДНК/РНК, белок/гексозы, что свидетельствует об их реорганизации.

Выявлена динамика активности Arg-X-триптаз и ингибиторов трипсина в надмолекулярных супраструктурах клеточного ядра зародышей пшеницы. В период транскрипционной активации хроматина наблюдается четырехэтапная цикличность протеолитического процессинга белка, которая первоначально обнаруживается во фракциях прочносвязанного с ядерным матриксом хроматина (3 ч 6 ч), а затем во фракциях ядерного матрикса (9 ч 12 ч) при относительно одинаковом уровне активности ингибиторов трипсина во фракциях непрочно- и прочносвязанных с ядерным матриксом хроматина. Эти данные могут быть следствием релаксации межнуклеосомных связей в хроматине и дальнейшей ассоциации Arg-X-протеолиза с ядерным матриксом, для которого в этот период характерно формирование комплексов репликации и транскрипции. Связь активности Arg-X-протеолиза с надмолекулярными супраструктурами клеточного ядра свидетельствует о вовлечении Arg-X-протеолиза в реорганизацию клеточных ядер – в процессы ремоделирования хроматина и регуляции активности генов, и позволяет, таким образом, рассматривать его как один из молекулярных механизмов морфогенеза.

ВЛИЯНИЕ СЫРОЙ НЕФТИ НА ГЕМАТОЛОГИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ

РЫБ ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ ВОЗДЕЙСТВИИ

А.Р. Исуев, Н.М. Абдуллаева, А.А. Батырмурзаева Дагестанский государственный университет.

Исследование было проведено на сеголетках карпа (Cyprinus carpio L.), отловленных из прудов Широкольского рыбоводного комбината в осеннее время перед их переброской в зимовальные пруды, а также двухлетки красноперки (Scardinius erithrophthalmus L.) массой 150.5 г, отловленные в южной части Аграханского залива Каспийского моря.

Моделировали хроническое загрязнение сырой нефтью в аквариальных условиях при концентрации нефти 0.5 мг/дц 3 (ПДК 0.05 мг/дц3 для пресных водоемов). Хронический эксперимент проводился в течение 5, 15, 30, 40 сут. Контролем служили рыбы, помещенные в аквариумах с чистой водой.

Цитогематологические анализы проводили по следующим показателям: определение количества гемоглобина, числа эритроцитов, нейтрофилов, моноцитов, лимфоцитов, лейкоцитарная формулы.

Статистическую обработку результатов проводили методом малой выборки по t-критерию Стьюдента с использованием интегрированного пакета обработки информации STATGRAPHICS. Различия полагали статистически значимыми при уровне р0.05 и ниже.

Одним из критериев оценки действия токсических веществ на организм являются гематологические показатели. Уже на 5-е сут наблюдалось значительное (на 28.3%) снижение содержания гемоглобина, а на 30-е сут воздействия сырой нефти уже 63.1%.

На начальных этапах действия сырой нефти имело место некоторое повышение содержание эритроцитов крови рыб. При пролонгировании ее действия до 25 и 30 сут уровень эритроцитов в крови рыб снижался. На 5 сут снижение составило 27.9% относительно контроля.

Определенные изменения были отмечены нами и в содержании элементов белой крови рыб. Сырая нефть вызывала существенное снижение содержания лейкоцитов значительнее всего на 30-е сут (на 38.9% ниже контроля). На 5-е сут воздействия сырой нефти уровень нейтрофилов был выше контроля в 2.5 раза, в то время как на сут и 30-е сут это увеличение было статистически недостоверным в сравнении с контролем.

Интоксикация водной среды нефтью вызывала существенное увеличение количества моноцитов, больше всего на 5-е сут (в 3. раза выше контроля). На 15-е сут и 30-е сут нефтяной интоксикации уровень моноцитов в крови двухлеток красноперки оставался также повышенным.

Полученные нами данные показывают, что кровь сеголеток карпа и двухлеток красноперки, так же как и других представителей карповых, имеет лимфоцитарный профиль. Только на 30-е сут воздействия сырой нефти отмечено статистически достоверное снижение уровня лимфоцитов (на 19.5%) по сравнению с контролем. Изменение показателей периферической крови наиболее тонко отражает реакцию кроветворных органов на воздействие различных факторов среды на организм рыб.

При хроническом воздействии сырой нефти в течение 30–40 сут происходит снижение уровня гемоглобина и эритроцитов в периферической крови сеголеток карпа и двухлеток красноперки.

Значительное снижение общего количества лейкоцитов отмечено во все исследованные периоды воздействия сырой нефти.

Обнаружено постоянство количества лимфоцитов в крови рыб при воздействии сырой нефти. Только на 30-е сут действия сырой нефти происходит статистически достоверное снижение уровня лейкоцитов по сравнению с контролем (на 19.5%).

При воздействии сырой нефти наблюдается полиморфоядерный лейкоцитоз – увеличение количества нейтрофилов, а также моноцитов.

ВОЗРАСТНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ АКТИВНОСТЕЙ АНТИОКСИДАНТНЫХ

ФЕРМЕНТОВ В ОРГАНАХ ПЕСЦОВ

Институт биологии Карельского научного центра РАН, Антиоксидантная система (АОС), основной функцией которой является поддержание на физиологическом уровне концентрации активных форм кислорода, необходимых для перекисного окисления липидов и ряда других биохимических процессов в клетке, также участвует в приспособительных реакциях. Супероксиддисмутаза (СОД) и каталаза являются ключевыми ферментами защиты клетки от активных форм кислорода. Большинство исследований по выяснению роли АОС в механизмах устойчивости животных к токсическому действию кислорода в онтогенетическом и сравнительно-видовом аспектах выполнены на человеке и лабораторных животных. Последние в результате длительного разведения в условиях неволи утратили многие физиолого-биохимические особенности, характерные для их диких предковых видов. Исследование АОС песца (Alopex lagopus L.), как вида, эволюционно сформировавшегося в арктических условиях, позднее введенного в зоокультуру, позволяет более полно изучить механизмы экологической адаптации организма.

Целью настоящей работы был анализ возрастных изменений ферментативного (СОД, каталаза) звена антиоксидантной системы в органах и тканях вуалевых песцов, разводимых в условиях неволи.

Активность СОД, каталазы и содержание белка в период раннего постнатального онтогенеза изучена в течение трех последовательных лет в тканях печени, почек, сердца, легких, селезенки и скелетной мышцы) у 54 песцов в возрасте 1, 5, 10, 20, 35 и 50 сут, а в позднем постнатальном онтогенезе – у 6- (неполовозрелые), 18- и 54-месячных самок песцов.

У песцов, как и у других незрелорождающихся млекопитающих, после рождения происходит первоначальное повышение основного обмена с последующим плавным его снижением. Согласно имеющимся в литературе данным, рождающиеся функционально незрелыми, песцы отличаются высокой интенсивностью роста и развития молодняка.

В период прозревания щенков (10 сут) значительно увеличиваются потребление кислорода и затраты энергии на окислительный метаболизм, которые постепенно снижаются с увеличением возраста зверей.

В период раннего постнатального онтогенеза изменения активности ферментов у песцов носили ярко выраженную органоспецифичность, но в отличие от других видов млекопитающих (норки, крысы, мыши) имели более плавный характер. Как и у взрослых животных, у щенков не было обнаружено половых различий в активности ферментов и содержании белка. В большинстве тканей органов щенков песца активность ферментов достигала своего максимума уже к 35 дню развития, т.е. раньше, чем у норок, которые, как и песцы, относительно недавно введены в зоокультуру. Как норки, так и песцы принадлежат к одному отряду Carnivora, но к разным семействам – Mustelidae и Canidae, соответственно. У песцов, по сравнению с норками, обнаружено более раннее формирование АОС в тканях сердечной и скелетной мышцы, характеризующееся высокой активностью антиоксидантных ферментов уже в возрасте 5 сут. К 50-м сут развития профиль антиоксидантных ферментов (АОФ) в тканях органов щенков соответствовал таковому у взрослых животных и был сходным с тем, который наблюдается у других млекопитающих. Активность ферментов уменьшалась в ряду печень почки = селезенка легкие сердце скелетная мышца для СОД и печень почки сердце легкие селезенка скелетная мышца для каталазы. Влияние возраста и года исследования на активности АОФ различалось для каждого из органов, но в большинстве случаев влияние возраста в два и более раза превышало влияние внешних факторов. Изучение корреляционных зависимостей между антиоксидантными ферментами и содержанием белка в тканях исследованных органов показало достаточно высокий уровень взаимосвязи в первые дни онтогенеза с последующим снижением почти в 1.5 раза к 10-м сут и увеличением к 20-м. Начиная с возраста 35 сут количество высоко достоверных корреляционных связей стабилизировалось на более низком (в 3 раза) уровне, чем в первые дни постнатального онтогенеза.

Сравнение активностей АОФ в тканях органов у 6-ти (неполовозрелые), 18-ти и 54-х месячных песцов показало, что только в скелетной мышце отмечается связанное с возрастом изменение количества белка – с максимумом у 18-ти месячных животных. Аналогичная динамика возрастных изменений наблюдалась для активности и удельной активности СОД в почках.

Таким образом, у песцов, по сравнению с другими видами млекопитающих, наблюдается более раннее формирование АОС, характеризующееся высокими активностями антиоксидантных ферментов уже в пятидневном возрасте в тканях сердечной и скелетной мышцы.

Снижения активности СОД и каталазы в тканях органов песцов, как одного из признаков «старения» системы, до 4.5 лет не наблюдается.

Работа выполнена при финансовой поддержке НШ-306.2008.4.

ПРОТЕАСОМЫ В РАЗВИВАЮЩИХСЯ СЕЛЕЗЕНКЕ

И ПЕЧЕНИ КРЫСЫ

Я.Д. Карпова, Т.М. Астахова, С.Б. Дмитриева, Учреждение РАН, Институт Биологии Развития им. Н.К. Кольцова РАН, Москва, Россия.

Иммунные протеасомы, высокоспециализированные мультисубъединичные белковые комплексы млекопитающих, играют важную роль в обеспечении Т-клеточного иммунного ответа. Иммуные протеасомы обладают специфическими протеазными активностями и, осуществляя гидролиз различных внутриклеточных белков, образуют олигопептиды, которые могут служить потенциальными антигенными эпитопами.

Участие иммунных протеасом в таких ключевых реакциях иммунитета, как запуск сигнала на уничтожение дефектных клеток Т-лимфоцитами, активация наивных T-CD8+-лимфоцитов и отрицательная селекция тимоцитов, делает изучение различных аспектов их функционирования одной из важных задач современной науки. В частности, знание динамики появления иммунных протеасом в тех или иных клетках в онтогенезе необходимо для понимания механизмов становления иммунитета.

В данной работе исследовано изменение содержания иммунных протеасом в селезенке и печени крысы в эмбриональном и раннем постнатальном развитии. В селезенке иммунные протеасомы выявляются с помощью Вестерн-блоттинга в эмбриональном и в первую неделю постнатального развития. К 7-мым суткам постнатального развития их количество возрастает примерно в 2 раза и к 18-м постнатальным суткам – еще в 2 раза. В печени же иммунные протеасомы практически не выявляются в раннем развитии, появляясь в заметном количестве только к 18-м суткам постнатального развития.

Исследовано распределение иммунных протеасом в клетках селезенки и печени крысы в эмбриональном и раннем постнатальном развитии. С помощью двойного иммунофлуоресцентного мечения показано, что иммунные протеасомы содержатся в В-лимфоцитах селезенки и печени и в Т-лимфоцитах селезенки. Была прослежена миграция этих клеток в процессе формирования селезенки. Показано, что В- и Т-лимфоциты располагаются в красной пульпе в течение первой недели постнатального развития; к 8-м постнатальным суткам В-лимфоциты заселяют маргинальную зону белой пульпы, в то время как Т-лимфоциты в этот период группируются у белой пульпы; лишь к 18-м постнатальным суткам они заселяют ее периартериальное пространство, заканчивание формирование функциональных зон. Кроме того, с помощью иммунофлуоресцентного мечения и последующего конфокального анализа клеток селезенки иммунные протеасомы обнаружены в макрофагах и ретикулярных клетках. Иммунофлуоресцентное мечение клеток печени позволило выявить значительное количество иммунных протеасом в гепатоцитах к 18–19-м суткам постнатального развития, что согласуется с данными по иммуноблоттингу.

Таким образом, печень способна «показывать» свои дефектные клетки иммунной системе с 18–19-го сут постнатального развития.

Именно в этот период селезенка приобретает способность «посылать»

в печень с кровью и/или лимфой Т-лимфоциты-киллеры для уничтожения дефектных клеток. Таким образом, данная работа помогает понять, как складываются взаимоотношения между нелимфоидными и вторичными лимфоидными органами в процессе становления иммунитета.

Работа выполнена при финансовой поддержке РФФИ (проект № 06-04-48229).

УЧАСТИЕ БЕЛКОВ G13 И LARG В АКТИВАЦИИ БЕЛКА RhoA В

ПРОЦЕССЕ ГАСТРУЛЯЦИИ У Xenopus laevis Д.О. Кирюхин1, Л.А. Шустикова1, Н.Н. Лучинская1,2, А.В. Белявский Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта Московский Государственный Университет им. М.В. Ломоносова, Биологический факультет, Москва, Россия.

Малые GTPазы семейства Rho (Rho, Cdc42, Rac) являются важными регуляторами перестройки актинового цитоскелета, процессов полимеризации микротрубочек, генной экспрессии, регулируют активность ряда ферментов. За счет участия во многих сигнальных каскадах, Rho-GTPазы контролируют клеточный цикл, подвижность и полярность клеток. Они взаимодействуют с эффекторными белками, когда находятся в активной, GTP-связанной форме. Гидролиз GTP переводит GTPазу в неактивное состояние. Одними из регуляторов перехода от неактивной к активной форме являются факторы обмена гуаниловых нуклеотидов (GEF), которые катализируют обмен GDP на GTP, активируя белок. Активация ряда GEF (LARG, p115Rho-GEF, PDZ-RhoGEF) происходит за счет взаимодействия с -субъединицами гетеротримерных G-белков. Такие GEF имеют в своем составе RGSдомен (regulator of G-protein signaling).

В нашей лаборатории были получены гены, кодирующие малую GTPазу RhoA, фактор обмена гуаниловых нуклеотидов LARG и -субъединицу гетеротримерного G-белка семейства G у Xenopus laevis. Было показано, что пространственно-временные картины экспрессии этих генов совпадают. Изменение степени их экспрессии влияет на подвижность клеток при гаструляции. Известно, что G13 способен активировать RhoA через LARG. Поэтому было сделано предположение, что наблюдаемые эффекты вызваны изменением количества активной формы RhoA. Относительное количество активной формы RhoA определяли методом аффинной преципитации с химерным белком, состоящим из RhoAсвязывающего домена белка ротекина (взаимодействует только с активной формой RhoA), слитого с глутатион-S-трансферазой, с последующим электрофоретическим анализом и иммуноблоттингом с антителами против RhoA.

Чтобы изучить, способность LARG к активации RhoA in vivo, мы инъецировали мРНК LARG в зиготу X. laevis и определяли, как изменяется количество активной формы RhoA на стадии развития 10.5.

Было показано, что инъекции мРНК LARG значительно увеличивают количество активной формы RhoA. Степень ответа зависит от количества инъецированной мРНК. Кроме того, с помощью антисмысловых морфолиновых олигонуклеотидов подавляли экспрессию эндогенного LARG. Мы обнаружили, что при этом количество активной формы RhoA падает ниже контрольного уровня. Был сделан вывод, что LARG принимает участие в активации RhoA.

Так как LARG имеет RGS-домен, можно предположить, что при усилении экспрессии G13 будет происходить активация RhoA, опосредованная LARG. Мы инъецировали мРНК G13 на стадии зиготы и показали, что при этом на стадии 10.5 значительно увеличивается количество активной формы RhoA. Характер ответа пропорционален количеству инъецированной мРНК. Чтобы проверить, влияет ли LARG на передачу сигнала от G13 к RhoA, мы инъецировали мРНК G совместно с антисмысловыми морфолиновыми олигонуклеотидами к мРНК LARG. Мы показали, что при этом активации RhoA не происходит. Это может свидетельствовать о том, что активация RhoA через G13 осуществляется с помощью LARG.

Снижение уровня экспрессии G13 с помощью антисмысловых морфолиновых олигонуклеотидов к мРНК G13, при увеличении экспрессии LARG не препятствует активации RhoA. Вероятно, активатором LARG может являться не только G13, но и другие белки. При этом взаимодействие между ними, возможно, может осуществляться с участием PDZ-домена.

Таким образом, полученные результаты позволяют предположить участие белков G13 и LARG в сигнальном каскаде, регулирующим активацию RhoA в процессе гаструляции у X. laevis.

ОСТЕОГЕННЫЙ ПОТЕНЦИАЛ КЛЕТОК СТРОМЫ ЖИРОВОЙ

ТКАНИ (СКЖТ) ЧЕЛОВЕКА В УСЛОВИЯХ IN VIVO

Учреждение РАН, Институт биологии развития им. Н.К. Кольцова РАН, Москва, Россия.

Комбинирование клеток, биоматериалов и факторов, индуцирующих дифференциацию мультипотентных клеток, является многообещающим подходом в тканевой инженерии для стимуляции регенерации и восстановления функции ткани. К настоящему времени помимо костного мозга, клетки с характеристиками мезенхимных стволовых клеток (МСК) выделены из жировой ткани. Ранее нами было показано, что стволовые клетки жировой ткани СКЖТ проявляют сходные с МСК дифференцировочные потенции в условиях in vitro. При культивировании в специфических условиях СКЖТ экспрессируют ряд генов и белков остеогенеза, синтезируют внеклеточный матрикс, состоящий в основном из коллагена I типа, который подвергается кальцификации.

Таким образом, СКЖТ могут быть использованы для клеточной терапии дефектов костной ткани.

Цель работы – исследовать остеогенный дифференировочный потенциал СКЖТ, культивированных на микроносителях из желатина или гидроксиаппатита, в условиях in vivo при подкожной имплантации иммунодефицитным мышам линии Nude.

СКЖТ выделяли из липоаспиратов жировой ткани человека ферментацией 0.075%-ным раствором коллагеназы I типа (Sigma) при 37C в течение 60 мин. Клетки культивировали в среде DMEM/F-12 (1:1) (Sigma), содержащей 10% FBS (Биолот) при 37С, 5% СО2. На 3 пассаже СКЖТ пассировали на пористые микроносители (Sigma, США) или гранулы гидроксиаппатита (Полистом, Россия) и культивировали в контрольной или остеогенной среде в течение 2 нед перед имплантацией. За сутки до операции микроносители заключали в коллагеновый гель. Для определения способности СКЖТ дифференцироваться в остеогенном направлении in vivo конструкции из клеток и подложки имплантировали подкожно мышам линии Nude в область лопаток. Сроки наблюдения составили 4, 8 и 12 нед. Имплантаты извлекали, фиксировали, делали срезы и проводили их гистологический и иммуногистохимический анализ.

Показано, что в случае культивирования СКЖТ на пористых желатиновых микроносителях клетки при имплантации иммунодефицитным мышам дифференцирутся в остеогенном направлении и экспрессируют специфичные остеогенные белки – остеонектин и остеокальцин только при условии предварительной индукции дифференцировки in vitro. При отсутствии индукции in vitro СКЖТ формируют структуру, подобную фиброзной соединительной ткани, при этом экспрессии остеогенных белков не выявлено на протяжении всего срока наблюдения. Однако в случае носителя из гидроксиаппатита показано, что СКЖТ приобретают фенотип остеогенных клеток как при предварительной индукции дифференцировки in vitro, так и при ее отсутствии. Через 8 нед после имплантации показано усиление экспрессии остеогенных белков и отложение фиброзного костного матрикса между гранулами гидроксиаппатита. Через 12 нед после имплантации выявлено образование участков более зрелого пластинчатого матрикса, основная часть представлена фиброзным матриксом.

Таким образом, при использовании гидроксиаппатита в качестве носителя клеток СКЖТ проявляют остеогенные дифференцировочные потенции в условиях in vivo и без предварительной индукции дифференцировки in vitro. При использовании желатиновых микроносителей необходима стимуляция дифференцировки в условиях in vitro.

СРАВНИТЕЛЬНЫЙ МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЙ И

ГИСТОХИМИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ АДИПОГЕННЫХ ПОТЕНЦИЙ

МЕЗЕНХИМНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК ИЗ ЗАРОДЫШЕВОЙ

ПЕЧЕНИ И ЗРЕЛОГО КОСТНОГО МОЗГА КРЫС

М.Н. Кожевникова, А.С. Микаелян, В.И. Старостин Учреждение РАН, Институт биологии развития Мезенхимные стромальные клетки (МСК) в настоящее время рассматриваются как мультипотентные тканеспецифические стволовые и родоначальные клетки взрослого организма, способные к направленной дифференцировке в такие типы клеток соединительной ткани как остеобласты, хондробласты, адипоциты и стромальные клетки, создающие кроветворное микроокружение (Friedenstein, Owen, 1988;

Dominici et al., 2006). МСК обнаружены в различных органах и тканях взрослого организма, тем не менее, основным источником этих клеток на протяжении всего постнатального онтогенеза является костный мозг. МСК также найдены в составе кроветворной стромы эмбриональных органов гемопоэза, в частности, в зародышевой печени. Присутствие МСК в кроветворных органах в разные периоды онтогенеза тесно связано с ключевой ролью этих клеток и их производных в формировании и поддержании кроветворного микроокружения, так называемой “ниши” кроветворной стволовой клетки. Важна сравнительная характеристика МСК из печени зародышей и зрелого костного мозга крайне важна для разрешения проблемы родства МСК из различных органов миелоидного кроветворения.

Согласно официальному постановлению Международного общества клеточной терапии (Dominici et al., 2006), одним из обязательных критериев МСК является наличие потенций к адипогенной дифференцировке.

Цель настоящего исследования состояла в сравнительном изучении молекулярно-генетических и фенотипических аспектов адипогенной дифференцировки МСК из транзиторного (зародышевая печень) и дефинитивного (костный мозг) органов миелоидного кроветворения.

В работе использованы культуры МСК из костного мозга неинбредных половозрелых крыс породы Wistar в возрасте 3–4 мес и весом 150–200 г и печени зародышей крыс на 16-е сут пренатального развития. Для получения адипогенной дифференцировки МСК инкубировали в индукционных средах в течение 16–21 сут.

Морфологический анализ адипогенной дифференцировки с использованием фазово-контрастного инвертированного микроскопа и гистохимического окрашивания жировым красным О и суданом III и IV показывает, что появление первых жировых клеток в культуре МСК из костного мозга приходится на ранние сроки культивирования в индукционной среде (3 сут эксперимента), а сама дифференцировка протекает интенсивнее, чем в культуре МСК из печени зародышей.

Первые группы дифференцированных адипоцитов в популяции МСК из печени зародышей появлялись лишь на 14–16 сут инкубации клеток в адипогенной среде. Эти группы были обособлены от остальных клеток, сохраняющих фибробластоподобную морфологию. Последние также обнаруживались и среди адипоцитов внутри группы. Более позднее появление зрелых жировых клеток в индифферентной среде (опытная культура), вероятно, связано с меньшей детерминированностью МСК из печени к дифференцировке в адипогенном направлении по сравнению с МСК из зрелого костного мозга. Полученные данные полностью согласуются с результатами ПЦР-анализа. С использованием специфических праймеров к генам поздних маркеров адипогенной дифференцировки показано, что в культуре МСК из костного мозга максимальная экспрессия генов Pparg, Lep и Albp выявлена на поздних сроках культивирования клеток в адипогенной среде. В аналогичных экспериментальных условиях в опытной культуре МСК из печени также выявлены транскрипты гена Pparg, однако уровень экспрессии гена Albp был гораздо ниже по сравнению с таковым в культуре МСК из костного мозга, а экспрессия гена Lep вовсе не выявлена.

Изложенные экспериментальные данные свидетельствуют, что адипогенные потенции МСК из печени зародышей выражены значительно слабее, чем таковые МСК из костного мозга. Это подтверждается не только более поздним появлением в опытной культуре МСК из печени зародышей зрелых адипоцитов и меньшей их численностью, но и низким уровнем экспрессии генов маркеров терминальных этапов адипогенеза.

Работа выполнена при финансовой поддержке РФФИ (проект № 06-04-48209) и гранта Президиума РАН «Молекулярная и клеточная биология».

ВОССТАНОВЛЕНИЕ ЗОНЫ РОСТА У ПОЛИХЕТЫ Nereis virens ПРИ РЕГЕНЕРАЦИИ: АНАЛИЗ ЭКСПРЕССИИ ГЕНОВ Nvi-twist И Nvi-pl Санкт-Петербургский государственный университет, Полихеты – кольчатые черви с непрямым развитием и хорошими способностями к регенерации во взрослом состоянии. Метаморфоз из личинки в ювенильную форму – ключевое событие всего их онтогенеза.



Pages:   || 2 | 3 |
 
Похожие работы:

«БИОЛОГИЯ И МЕДИЦИНА Ю.П. Голиков ПЕРВАЯ МИРОВАЯ ВОЙНА И СОТРУДНИКИ ИМПЕРАТОРСКОГО ИНСТИТУТА ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ МЕДИЦИНЫ В столице России 8 декабря 1890 г. состоялось торжественное открытие Императорского института экспериментальной медицины — ИИЭМ — первого в стране и в мире научно-исследовательского центра в области биологии и медицины. Его организатором и попечителем был принц А.П. Ольденбургский, который вплоть до Февральской революции 1917 г. был теснейшим образом связан с ИИЭМ. Инициатива...»

«1 Министерство сельского хозяйства Российской Федерации Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Кубанский государственный аграрный университет РАБОЧАЯ ПРОГРАММА по дисциплине ОПД.Ф.6 Кормление сельскохозяйственных животных (индекс и наименование дисциплины) Специальность 111201.65 Ветеринария Квалификация (степень) выпускника Ветеринарный врач Факультет Ветеринарной медицины Кафедра-разработчик Кафедра физиологии и кормленич с.х. животных...»

«Биохимические исследования генетических ресурсов растений в ВИРе А.В. Конарев, В.И. Хорева. Биохимические исследования генетических ресурсов растений в ВИРе В историческом аспекте рассмотрена организация в ВИРе биохимических исследований генетических ресурсов культурных растений и их дикорастущих сородичей. Приведены краткие сведения о деятельности биохимиков ВИР, внесших существенный вклад в развитие этого направления, о важнейших научных трудах лаборатории с середины 30-х годов и по настоящее...»

«Работы Тимирязева, посвященные фотосинтезу и современность Горно-Алтайский государственный университет Оплеухин А.А., 114 гр. Науч. рук. Гришина Е.Н. К.А. Тимирязев является крупнейшим ученым, заслуги которого разнообразны и велики. Его научная деятельность имела три основных направления: критика эволюционного учения и внедрения его в науку в виде исторического метода, изучение фотосинтеза и его роли на земле, история науки, ее популяризация. Тимирязев заложил русскую школу физиологии растений....»

«Министерство сельского хозяйства Российской Федерации Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Кубанский государственный аграрный университет РАБОЧАЯ ПРОГРАММА по дисциплине С2.Б.11 Ветеринарная микробиологии и микология (индекс и наименование дисциплины) Специальность 111801.65 Ветеринария Квалификация (степень) выпускника Ветеринарный врач Факультет Ветеринарной медицины Кафедра-разработчик Кафедра микробиологии, эпизоотологии и вирусологии...»

«Книга из библиотеки Российской ассоциации инструментальной транскоммуникации (РАИТ) Сайт в интернете: http://www.rait.airclima.ru Кириллические адреса: эгф.рф, фэг.рф, транскоммуникация.рф Группа в контакте: http://www.vk.com/itc_russia Талбот Майкл ГОЛОГРАФИЧЕСКАЯ ВСЕЛЕННАЯ Издательский дом София 2004 Талбот Майкл. Голографическая Вселенная / Перев. с англ. – М.: Издательский дом София, 2004. – 368 с. ISBN 5-9550-0482-3 В основу книги Майкла Талбота положены гипотезы двух выдающихся...»

«МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РФ Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования Тверской государственный университет Кафедра биологии УТВЕРЖДАЮ Декан биологического факультета С.М. Дементьева 19 сентября 2013 г. Рабочая программа дисциплины МЕТОДИКА ПОЛЕВЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ Для студентов I курса Направление подготовки 020400.62 БИОЛОГИЯ Профиль подготовки – общая биология, биоэкология, физиология человека и животных Квалификация (степень)...»

«1 2 СОСТАВИТЕЛИ: Н. С. Мотузко, зав. кафедрой нормальной и патологической физиологии учреждения образования Витебская ордена Знак почета государственная академия ветеринарной медицины, кандидат биологических наук, доцент; М. А. Макарук, доцент кафедры нормальной и патологической физиологии учреждения образования Витебская ордена Знак почета государственная академия ветеринарной медицины, кандидат ветеринарных наук, доцент; Л. Л. Руденко, доцент кафедры нормальной и патологической физиологии...»

«ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ОБРАЗОВАНИЮ ГОУ ВПО АДЫГЕЙСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ А.А. Псеунок ВОЗРАСТНАЯ АНАТОМИЯ И ФИЗИОЛОГИЯ (лекции) МАЙКОП - 2008 УДК 612. 17 (4-053) ББК 57.31 П86 Печатается по решению редакционно-издательского совета Адыгейского государственного университета Отв. редактор: Ф.Г. Ситдиков, доктор биологических наук, профессор, зав. кафедрой анатомии и физиологии человека и охраны детства ТГГПУ Рецензенты: Т.И.Джандарова, доктор биологических наук, профессор...»

«НОВЫЕ КНИГИ БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ УКАЗАТЕЛЬ КНИГ, ПОСТУПИВШИХ В БИБЛИОТЕКУ (ИЮЛЬ – НОЯБРЬ 2012г.) Аллергология 1. 616-056(03) А 50 Аллергология и иммунология : Национальное руководство. Краткое издание. - Москва : ГЭОТАР-Медиа, 2012. - 448 с. Экземпляры: всего:1 - КХ(1) ГРНТИ 76.29.38 Аннотация: Национальное руководство по аллергологии и иммунологии разработано и рекомендовано Российской ассоциацией аллергологов и клинических иммунологов. В книгу вошли общие и частные вопросы аллергологии и...»

«Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования Иркутский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения Российской Федерации Органы пищеварения: анатомо-физиологические особенности, методы исследования и семиотика основных поражений Учебно-методическое пособие для студентов Иркутск ИГМУ 2012 УДК [616-053.2:612.3(075.8)] ББК 57.319я73 O 64 Рекомендовано ФМС педиатрического факультета ГБОУ ВПО ИГМУ Минздрава России в качестве...»

«    Коновалов В.В.  Совсем Другая  Медицина  с сокращениями и дополнениями автора   Об авторе.  Автор книги - известный врач, кандидат медицинских наук, ученый и клиницист, терапевт, физиолог, иридолог, специалист по восточной и древнеиндийской медицине, эксперт Совета Федерации РФ, вице-президент Национальной Академии интеллектуальных и социальных технологий, член-корресподент Международной Академии Информатизации, директор Центра Интегральной Системной медицины, автор многочисленных научных...»

«Курс лекций по дисциплине Психология труда Составитель: М.Н. Волкова, к.п.н., доцент кафедры Психофизиологии и психологии труда ГИ МГУ им. адм. Г. И. Невельского Лекция 1. Обзорная характеристика психологии труда Психология труда – область психологии, изучающая психологические характеристики трудовой деятельности. Предмет исследования – психологические составляющие: процессы, состояния, свойства личности, проявляющиеся в процессе труда. Связь с другими отраслями психологии: Псих. труда и...»

«КНИГИ ПО ВЕТЕРИНАРИИ 2013 Издательство Издат Аквариум Аква Cерия Практика ветеринарного врача 1 АКУШЕРСТВО И ГИНЕКОЛОГИЯ СОБАК Автор: Инглэнд Г. 320 стр., 14 20 см, илл., пер с англ., мягкая обложка В этой книге, написанной для хирургов-ветеринаров, студентов ветеринарных учебных заведений и заводчиков, разбираются различные состояния собак, влияющие на их способность к размножению. Книга ¬содержит полную информацию по данному вопросу. В ней изложены анатомия, физиология и эндо¬кринология...»

«1 Министерство сельского хозяйства Российской Федерации Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Кубанский государственный аграрный университет РАБОЧАЯ ПРОГРАММА по дисциплине ОПД.Ф.3 Физиология и этология животных (индекс и наименование дисциплины) Специальность 111201.65 Ветеринария Квалификация (степень) выпускника Ветеринарный врач Факультет Ветеринарной медицины Кафедра-разработчик Кафедра физиологии и кормления с.х. животных Ведущий...»

«EX-PRODIGY My childhood and youth by NORBERT WIENER THE M.I.T. PRESS MASSACHUSETTS INSTITUTE OF TECHNOLOGY CAMBRIDGE MASSACHUSETTS Copyright ®1953 by Norbert Wiener All rights reserved First edition published 1953 by Simon and Schuster, Inc. First M.I.T. Press Paperback Edition, August, 1964 НОРБЕРТ ВИНЕР БЫВШИЙ ВУНДЕРКИНД МОЁ ДЕТСТВО И ЮНОСТЬ Моей жене, под чьей нежной опекой я впервые обрел свободу Перевод с английского доктора философских наук В.В. Кашина Оренбург 2004. ББК 22.1г(3) ВИНЕР Н....»

«ВЕСТНИК САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКОГО УНИВЕРСИТЕТА Сер. 11 2013 Вып. 2 ВНУТРЕННИЕ БОЛЕЗНИ УДК 612.017.11+616.097+616.42+576.8 А. Ш. Зайчик, А. Б. Полетаев, Л. П. Чурилов 1 ЕСТЕСТВЕННЫЕ АУТОАНТИТЕЛА, ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ТЕОРИИ И ПРЕВЕНТИВНАЯ МЕДИЦИНА В предыдущем номере Вестника СПбГУ. Серия 11 опубликована наша обзорнотеоретическая статья об аутораспознавании как основной физиологической функции адаптивной иммунной системы (АДИС) [1]. Данная публикация является продолжением темы применительно к  прикладным...»

«1. ЦЕЛИ ОСВОЕНИЯ ДИСЦИПЛИНЫ Целью освоения дисциплины Ветеринарное акушерство является формирование знаний и практических навыков по биотехнике воспроизводства, акушерству и гинекологии в объеме, необходимом для бакалавра профиля подготовки ветеринарно-санитарная экспертиза В процессе освоения данной дисциплины студент формирует и демонстрирует следующие общекультурные компетенции: - владение культурой мышления, способностью к обобщению и анализу, восприятию информации, постановке цели и выбору...»

«1. Цель и задачи дисциплины 1.Цель курса - состоит в научном познании и осуществлении мероприятий по предупреждению и ликвидации хирургических заболеваний животных по повышению их продуктивности. Главная цель преподавания ветеринарной хирургии состоит в том чтобы раскрыть проблемное содержание хирургии как науки, охарактеризовать ее научный и практический потенциал, показать пути развития и. сферы применения в народном хозяйстве и научно-техническом прогрессе. Изучение ветеринарной хирургии...»

«Программа вступительных испытаний в аспирантуру по специальности 14.04.02 –Фармацевтическая химия, фармакогнозия разработана на кафедрах фармацевтической химии и фармакогнозии на основе выпускных программ ВУЗа по фармацевтической химии и фармакогнозии. 2 ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ ХИМИЯ № Название раздела Содержание раздела п/ дисциплины п Общие методы Фармацевтическая химия как наука. 1 фармацевтического Объект фармацевтической химии. Методология анализа фармацевтической химии. Значение фармацевтической...»






 
© 2014 www.kniga.seluk.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Книги, пособия, учебники, издания, публикации»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.