WWW.KNIGA.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Книги, пособия, учебники, издания, публикации

 

RU 2 435 589 C2

(19) (11) (13)

РОССИЙСКАЯ ФЕДЕРАЦИЯ

(51) МПК

A61K 31/70 (2006.01)

A61K 47/42 (2006.01)

ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА

ПО ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ

(21)(22) Заявка: 2009120638/15, 02.06.2009 (72) Автор(ы):

Кубанова Анна Алексеевна (RU), (24) Дата начала отсчета срока действия патента: Ротанов Сергей Владимирович (RU), 02.06.2009 Фриго Наталия Владиславовна (RU), Полетаева Ольга Александровна (RU) Приоритет(ы):

(22) Дата подачи заявки: 02.06.2009 (73) Патентообладатель(и):

RU Федеральное государственное учреждение (43) Дата публикации заявки: 10.12.2010 Бюл. № "Государственный научный центр (45) Опубликовано: 10.12.2011 Бюл. № 34 дерматовенерологии и косметологии" Министерства здравоохранения и (56) Список документов, цитированных в отчете о социального развития Российской поиске: US 20080124738 A1, 29.05.2008. RU 2298796 Федерации (ФГУ "ГНЦДК C2, 10.05.2007. RU 2179726 C2, 20.02.2002. RU Минздравсоцразвития России) (RU) 2006126784 A, 27.01.2008.

Адрес для переписки:

107076, Москва, ул.Короленко, 3, стр.6, ФГУ "Государственный научный центр дерматовенерологии и косметологии" Министерства здравоохранения и социального развития РФ C C

(54) СОСТАВ КОНСЕРВИРУЮЩЕЙ ДОБАВКИ К КОНТРОЛЬНЫМ МАТЕРИАЛАМ,

ИСПОЛЬЗУЕМЫМ ПРИ СЕРОДИАГНОСТИКЕ СИФИЛИСА

(57) Реферат: добавляют реагенты альфа1-антитрипсин, Изобретение относится к области трегалозу и ProCline-300. Применение медицинской биотехнологии. Предложен разработанного состава консервирующей состав консервирующей добавки к добавки позволяет обеспечить сохранение контрольным материалам, используемым при специфической активности контрольных серодиагностике сифилитической инфекции. К материалов в нативном виде на уровне 90-93% образцам сыворотки крови, полученным от от первоначального уровня при их хранении в больных сифилисом или здоровых лиц, сразу течение 13 месяцев в условиях температуры +(4после их получения последовательно 8)°С. 2 табл.

RU.: ru RU 2 435 589 C (19) (11) (13)

RUSSIAN FEDERATION

(51) Int. Cl.

A61K 31/70 (2006.01) A61K 47/42 (2006.01)

FEDERAL SERVICE

FOR INTELLECTUAL PROPERTY

(12)

Abstract

OF INVENTION (21)(22) Application: 2009120638/15, 02.06.2009 (72) Inventor(s):

Kubanova Anna Alekseevna (RU), (24) Effective date for property rights: Rotanov Sergej Vladimirovich (RU), (43) Application published: 10.12.2010 Bull. dermatovenerologii i kosmetologii" Ministerstva zdravookhranenija i sotsial'nogo razvitija RF

(54) COMPOSITION OF RPESERVING ADDITIVE TO CONTROL MATERIALS APPLIED IN





SERODIAGNOSTICS OF SYPHILIS

(57) Abstract: alpha1-antitripsin, trehalose and ProCLine-300.

medicine biotechnology. Claimed is composition of preservation of specific activity of control material preserving additive to control materials, applied in in native condition, at the level of 90-93% from serodiagnostics of syphilitic infection. To samples initial level with their 13 month storage in of blood serum, obtained from patients with syphilis conditions of temperature +4-8°C.

Изобретение относится к медицинской биотехнологии и может быть использовано при создании контрольных материалов для серологической диагностики сифилитической инфекции.

Для качественного осуществления серологической диагностики сифилиса применяется технология внутрилабораторного контроля качества (ВлКК). ВлКК представляет собой систему мероприятий, проводимых на регулярной основе, направленных на проверку правильности выполнения серологических исследований и предотвращение возможности ошибок диагностики. Средством измерения, позволяющим оценивать качество проведения исследований, являются контрольные материалы (КМ), содержащие («положительный» контроль) или не содержащие («отрицательный» контроль) антитела к возбудителю сифилиса - Т.pallidum.

Наиболее адекватным для проведения ВлКК при серодиагностике сифилиса в настоящее время признаются КМ, выпускаемые в жидком виде и приготовленные на основе естественной биологической матрицы - сыворотки крови больного сифилисом или здорового человека [ISO 15194]. Вместе с тем необходимым условием для осуществления мероприятий ВлКК является длительное сохранение в КМ постоянного уровня специфических антител к возбудителю сифилиса, то есть сохранение их «специфической активности».

В настоящее время известно большое количество реагентов химической природы, которые при добавлении к биологическим растворам, содержащим специфические иммуноглобулины, обеспечивают их стерильность и сохранение специфической активности. К числу подобных средств относятся ртутьсодержащие реагенты (мертиолят), борная кислота, диметилсульфоксид, азид натрия, ProCline, антибиотики, Однако не все из указанных реагентов могут быть применены для создания КМ, используемых при серодиагностике сифилиса. Так, азид натрия в рекомендуемых концентрациях (0,1%) может оказывать выраженное бактерицидное действие и способствовать сохранению специфической активности антител в КМ, но он может также инактивировать фермент пероксидазу хрена, а именно этот фермент наиболее часто используется для синтеза конъюгата в иммуноферментном анализе (Масяго А.В, 1997). Применение препаратов, содержащих соли ртути, ограничено в связи с их токсичностью в соответствии с рекомендациями ВОЗ, Европейского Фармакологического комитета, Американского агентства по контролю над пищевыми продуктами и лекарственными средствами (FDA) и Национального органа по контролю над качеством медицинских иммунобиологических препаратов Российской Федерации (Комитет МИБП). Борная кислота также зарекомендовала себя в качестве реагента, небезопасного для здоровья человека. Растворы антибиотиков характеризуются низкой стабильностью в растворе и быстро подвергаются инактивации при длительном хранении. Таким образом, состав консервирующих добавок, используемых при создании КМ для серодиагностики 45 сифилиса, нуждается в существенной доработке.





В 2007 году в ФГУ «ГНЦД Росмедтехнологий» была разработана и прошла регистрацию в Российской Федерации экспертная панель контрольных сывороток «ЭП СИФИЛИС», предназначенная для проведения мероприятий ВлКК и внешнего контроля качества серодиагностики сифилиса. Панель приготовлена на основе сывороток крови человека (больных сифилисом и здоровых людей) и состоит из образцов, 2 из которых содержат антитела к возбудителю сифилиса в разной концентрации («положительная» часть панели) и 2 - не содержат таких антител («отрицательная» часть панели). В качестве консервирующей добавки, позволявшей на протяжении 6 месяцев сохранять первоначальный уровень антител к Т.pallidum в контрольных сыворотках «положительной части» панели, был использован реагент ProCline-300 (Supelco, США, кат. №48126(1). Однако срок годности панели, равный 6 месяцам, является недостаточным, особенно для КМ, входящих в состав расширенных экспертных (квалификационных) панелей, требующих для своего создания длительного времени и значительных материальных затрат, связанных с подбором образцов биологического материала. В связи с вышеизложенным актуальной в настоящее время является разработка консервирующей добавки к КМ, обеспечивающей более длительное сохранение их специфической активности.

Известно, что в процессе длительного хранения белки сыворотки крови человека подвергаются деградации. Одной из важных причин, определяющих снижение активности специфических иммуноглобулинов в образцах сыворотки крови при их хранении в незамороженном виде, является присутствие нативных ферментов, обладающих протеолитической активностью (Lau P.P. et al, 1990; Hsieh S.Y. et al., 2000; Yi J. et al., 2007).

Протеолитические ферменты (протеазы) попадают в сыворотку крови из органов и тканей, в которых осуществляется синтез этих ферментов, например из печени, поджелудочной железы и других органов. Кроме того, в образце цельной крови протеолитические ферменты накапливаются в процессе его хранения в результате естественного разрушения форменных элементов крови (клетки лейкоцитарного ряда, содержащие гранулы с активными ферментами) или за счет бактериальной контаминации образца крови.

Для решения проблемы длительного хранения КМ, содержащих белковые растворы, обладающие специфической иммунной активностью, необходима разработка стабилизирующих добавок, способных ингибировать протеолитическое воздействие ферментов сыворотки крови, например, таких как антитрипсины.

Антитрипсины (antitrypsins) представляют собою группу сывороточных белков из состава альбуминовой фракции, которые являются естественными ингибиторами трипсиноподобных протеаз у многих позвоночных животных. Одним из коммерческих вариантов этого реагента является препарат альфа1-антитрипсин, характеризующийся большим разнообразием входящих в его состав активных изоформ (у человека имеется несколько десятков антитрипсинов).

При этом следует учитывать, что добавление подобных реагентов может приводить к некоторому искажению результатов контрольного тестирования, что необходимо учитывать при выборе качественного и количественного состава используемых ингибиторов протеаз, который не оказывал бы влияния на специфическую активность конечного продукта Определенное защитное действие на белки сыворотки крови оказывает ряд углеводов. При замораживании растворов белков и их последующей лиофиолизации в качестве стабилизирующих веществ часто добавляют различные многоатомные сахара. Самым распространенным стабилизатором является сахароза, однако имеются сведения, что наилучшими свойствами обладает другой углевод - трегалоза, представляющий собой дисахарид, состоящий из двух молекул глюкозы (Chang L.L. et al., 2005; Han Y. et al., 2007). Имеются сообщения о протективных свойствах сахаров для сохранения стабильности белковых молекул и в виде растворов.

Технической задачей настоящего изобретения является разработка консервирующей добавки, обеспечивающей длительное сохранение специфической активности КМ для серодиагностики сифилиса, приготовленных в нативной форме на основе образцов сыворотки крови, полученных от больных различными формами сифилитической инфекции и здоровых доноров крови.

Эта задача достигается за счет того, что к образцам сыворотки крови сразу после их получения последовательно добавляют химические реагенты в соответствии с разработанным составом и последовательностью их внесения: альфа1-антитрипсин из расчета 0,5 ЕД на 100 мл сыворотки крови, дисахарид трегалозу в конечной концентрации 1% и ProCline-300 в конечной концентрации 0,1%. Каждый последующий реагент вносят после полного растворения предыдущего, для чего осуществляют тщательное перемешивание полученного раствора. Полученный препарат укупоривают стерильной ватно-марлевой пробкой и оставляют в холодильнике при +(4-8)°С на 8-10 часов. Препарат подвергают стерилизующей фильтрации через наборы фильтров с величиной пор 0,8-0,45-0,22 мкм и в стерильных условиях разливают на аликвоты по 0,5 мл в стерильные завинчивающиеся пробирки объемом 1,5-2,0 мл.

Техническим результатом применения разработанного состава консервирующей добавки является инактивация протеолитических ферментов в сыворотке крови, создание оптимальных условий для сохранения специфической активности иммуноглобулинов в растворе и обеспечение условий стерильности, что гарантирует сохранение в КМ специфической активности иммунных антител на уровне 90-93% от первоначального значения в течение не менее 13 месяцев хранения при температуре +(4-8)°С.

Преимущества предлагаемого состава реагентов:

- КМ, приготовленные с применением разработанного состава консервирующей добавки, сохраняются в нативном (жидком) виде, и готовы для применения;

- условия хранения КМ при температуре +(4-8)°С имеются и могут быть обеспечены в любой клинико-диагностической лаборатории и/или аптечном складе;

- применение разработанного состава консервирующей добавки и последовательности внесения составляющих ее реагентов позволяет гарантированно сохранять специфическую активность КМ, приготовленных на основе сыворотки крови человека, на уровне 90-93% от первоначального аттестованного значения в течение не менее 13 месяцев хранения;

- сохранение специфической активности КМ в течение длительного времени позволяет использовать данные КМ для проведения мероприятий внутрилабораторного и внешнего контроля качества, а также при сравнительных испытаниях наборов реагентов для серологических методов исследования, выпускаемых различными производителями;

- разработанный состав консервирующей добавки не содержит реагентов, оказывающих негативное влияние на здоровье лабораторных работников.

Изобретение осуществляют следующим образом.

От больных сифилисом или здоровых доноров, предварительно обследованных на наличие и уровень активности антител, ассоциированных с сифилитической инфекцией, и не имеющих указаний на инфицирование гепатитами В и С человека, а также ВИЧ1,2, путем венепункции получают образцы крови. Забор крови производится в пробирки или пластиковые емкости для сбора крови без применения антикоагулянтов. Полученные образцы, содержащие или не содержащие антитела к антигенам возбудителя сифилиса, инкубируют 30 минут в термостате при 37°С для формирования сгустка крови и подвергают первичному фракционированию в лабораторной центрифуге в течение 15-20 минут со скоростью вращения ротора 2500оборотов в минуту.

Полученную сыворотку крови немедленно переносят в отдельную стерильную мерную емкость и подвергают термической инактивации при температуре +56°С в течение 3 часов в соответствии с общепринятыми правилами для обеспечения условий биобезопасности при работе с образцами.

По окончании процесса инактивации сыворотку крови охлаждают до комнатной температуры (18-25°С) и добавляют в ее состав альфа1-антитрипсин из расчета 0,5 ЕД на 100 мл сыворотки крови, раствор тщательно перемешивают. Перемешивание осуществляют на магнитной мешалке. После полного растворения альфа1антитрипсина добавляют трегалозу в конечной концентрации 1% и раствор тщательно перемешивают. После полного растворения трегалозы к имеющемуся объему сыворотки добавляют реагент ProCline-300 в конечной концентрации 0,1%; раствор тщательно перемешивают. Емкость с полученным препаратом укупоривают стерильной ватно-марлевой пробкой и оставляют в холодильнике при +(4-8)°С на 8- Приготовленный КМ подвергают стерилизующей фильтрации через наборы фильтров с величиной пор 0,8-0,45-0,22 мкм и в стерильных условиях разливают на аликвоты в стерильные завинчивающиеся пробирки. Пробирки маркируют и хранят в бытовом холодильнике при температуре +(4-8)°С.

Эффективность применения разработанного состава консервирующей добавки доказана при хранении КМ в течение 13 месяцев с последующим исследованием их специфической активности.

12.12.2007 г. от пациентов М. (с сифилисом вторичным) и А. (с сифилисом первичным), обследованных в серологических реакциях на сифилис, ВИЧ, гепатиты В и С человека, путем венепункции было получено по 20,0 мл цельной крови. Кровь больных сифилисом была помещена в пластиковые стерильные пробирки без стабилизаторов свертывания.

Образцы сыворотки крови №1 и №2 выдерживали 30 минут в термостате при +37°С и подвергали центрифугированию при 3000 оборотах в минуту в течение 15 минут.

Каждый образец сыворотки крови переносили в две отдельные стерильные пробирки и инактивировали при температуре +56°С в течение 3 часов.

Из образцов сыворотки крови, полученных от каждого из пациентов, готовили два вида контрольного материала. При приготовлении КМ №1а и №2а в пробирки последовательно добавляли альфа1-антитрипсин из расчета 0,5 ЕД на 100 мл сыворотки крови, трегалозу в конечной концентрации 1% и реагент ProCline-300 в конечной концентрации 0,1%; каждый последующий реагент вносили после полного растворения предыдущей добавки; сыворотку крови при этом тщательно перемешивали на магнитной мешалке.

При приготовлении КМ №1б и №2б в пробирки с сывороткой крови вносили только реагент ProCline-300 в конечной концентрации 0,1%; сыворотку крови при этом тщательно перемешивали.

После завершения процесса приготовления все образцы подвергали аттестации путем определения уровня антител. Образцы №1а и №1б (полученные от больного М.) характеризовались высоким уровнем антител, определенных в регламентированных тестах на сифилис (ИФА, РПГА, РМП); образцы №2а и №2б (полученные от больного А.) - низким уровнем антител.

Пробирки с препаратами укупоривали стерильной пробкой и оставляли в холодильнике при +(4-8)°С до следующего дня. После этого каждый образец контрольной сыворотки набирали в пластиковый шприц и пропускали через набор фильтров с калиброванной величиной пор 0,8-0,45-0,22 мкм и разливали в стерильных условиях на аликвоты по 0,075 мл в стерильные пробирки Эппендорфа объемом 0, мл. Пробирки маркировали, помещали в пластиковые пакеты и хранили в бытовом холодильнике при температуре +(4-8)°С в течение 13 месяцев.

Сразу после розлива и через каждые 2 недели осуществляли контроль активности полученных контрольных материалов при их исследовании в ИФА на сифилис, который позволял оценивать динамику уровня антител по объективному показателю коэффициенту позитивности (табл.1).

Результаты наблюдений показали, что в образцах КМ №1а и №2а, при приготовлении которых была использована разработанная нами консервирующая добавка, в течение 13 месяцев хранения при температуре +(4-8)°С отмечалось сохранение специфических антител на уровне 90,0-93,0% от исходного аттестованного значения.

В образцах КМ №1б и №2б, при приготовлении которых был использован только реагент ProCline-300, было отмечено снижение уровня специфической активности антител до уровня 65,4 и 53,6% соответственно.

Таким образом, как следует из данного примера, разработанная консервирующая добавка, включающая антитрипсин, трегалозу и ProCline-300, обеспечивала сохранение высокого уровня специфической активности КМ в течение длительного периода времени.

17.12.2007 г. от активных доноров плазмы крови С. и А., обследованных в серологических реакциях на сифилис, ВИЧ, гепатиты В и С человека, при проведении плазмафереза было получено по 20,0 мл цельной крови в пластиковые стерильные пробирки без стабилизаторов свертывания - образцы №3 и №4 соответственно. Оба образца не содержали специфических антител к возбудителю сифилиса, определявшихся в регламентированных тестах на сифилис.

Образцы сыворотки крови выдерживали 30 минут в термостате при +37°С и подвергали центрифугированию при 3000 оборотах в минуту в течение 15 минут.

Образец сыворотки, полученный от одного донора, переносили в две отдельные стерильные пробирки. Полученные контрольные сыворотки инактивировали при температуре +56°С в течение 3 часов.

Контрольные материалы №3а и №4а готовили путем последовательного добавления к объему сыворотки крови реагентов: альфа1-антитрипсина из расчета 0, ЕД на 100 мл сыворотки крови, трегалозы в конечной концентрации 1% и реагента ProCline-300 в конечной концентрации 0,1%. Каждый последующий реагент вносили после полного растворения предыдущей добавки; сыворотку крови при этом тщательно перемешивали на магнитной мешалке. КМ №3б и №4б были получены путем добавления к сыворотке реагента ProCline-300 в чистом виде в конечной концентрации 0,1%. Пробирки с приготовленными КМ укупоривали стерильной пробкой и оставляли в холодильнике при +(4-8)°С до следующего дня.

Каждый образец КМ набирали в пластиковый шприц и пропускали через набор фильтров с калиброванной величиной пор 0,8-0,45-0,22 мкм и разливали в стерильных условиях на аликвоты по 0,075 мл в стерильные пробирки Эппендорфа объемом 0, мл. Пробирки маркировали, помещали в пластиковые пакеты и хранили в бытовом холодильнике при температуре +(4-8)°С в течение 13 месяцев, предохраняя от воздействия света.

Сразу после розлива и через каждые 2 недели осуществляли контроль активности полученных контрольных материалов при их исследовании в ИФА на сифилис (табл.2).

Результаты контрольных исследований показали, что с образцами КМ, полученными от здоровых доноров крови, уровень показателей оптической плотности в ИФА в течение всего срока наблюдения сохранялся на уровне ниже ОП критического при добавлении обеих консервирующих добавок; неспецифической реактивности в ИФА установлено не было.

Таким образом, приведенные примеры 1 и 2 демонстрируют:

- возможность использования разработанной консервирующей добавки для получения КМ для серодиагностики сифилиса, обладающих специфической активностью;

- возможность использования разработанной прописи консервирующей добавки получения КМ для серодиагностики сифилиса, не обладающих специфической активностью;

- возможность длительного сохранения специфической активности антител к T.pallidum (до 13 месяцев) в КМ, сохраняемых при температуре +(4-8)°С в присутствии разработанной консервирующей добавки.

Библиографический список 1. ISO 15194. In Vitro Diagnostic Medical Devices - Measurement of Quantities in Samples of Biological Origin, Description of Reference Materials.

2. Масяго A.B. Некоторые ошибки при постановке ИФА. // Новости «ВеторБест». - 1997. - №1(3). - С.3-7 (htth://www.vector-best.mhost.ru/nvb/st3_7.htm).

3. Chang L.L. Mechanism of protein stabilization by sugars during freeze-drying and storage:

native structure preservation, specific interaction, and/or immobilization in a glassy matrix? / L.L.Chang, D.Shepherd, J.Sun et al. // J. Pharm. Sci. - 2005. - Vol.94. - №.7. - P.1427-1444.

4. Han Y. Effects of sugar additives on protein stability of recombinant human serum albumin during lyophilization and storage / Y.Han, B.S.Jin, S.B.Lee et al. // Arch. Pharm. Res. Vol.30. - №9. - P.1124-1131.

5. Hsieh S.Y. Systematical evaluation of the effects of sample collection procedures on lowmolecular-weight serum/plasma proteome profiling / S.Y.Hsieh, R.K.Chen, Y.H.Pan, H.L.Lee // Proteomics. - 2006. - Vol.6. - №10. - P.3189-3198.

6. Lau P.P. Proteolytic degradation of human recombinant proinsulin/insulin by sera from acute pancreatitis patients and complete inhibition by Eglin-C / P.P.Lau, M.Van Handel, M.Larvin et al. // Pancreas. - 1990. - Vol.5. - №1. - P.17-26.

7. Yi J. Inhibition of intrinsic photolytic activities moderates preanalytical variability and instability of human plasma / J.Yi, C.Kim, C.A.Gelfand // J. Proteome Res. - 2007. - Vol.6. P.1768-1781.

Результаты исследования динамики уровня антител к T.pallidum в опытно-экспериментальных сериях КМ, приготовленных на основе сыворотки крови больных сифилисом с добавлением разработанного состава консервирующей добавки или реагента ProCline-300, в процессе их хранения при температуре +(4-8)°С с применением ИФА (по показателю КП) № Результаты исследования уровня антител к T.pallidum в ИФА с набором реагентов «РекомбиБест сер Характеристика 50 аптипаллидум суммарные антитела» D-1855 (г.Новосибирск) через n месяцев хранения 1а разработанным 14,570 14,560 14,500 14,496 14,531 14,541 14,500 14,470 13,950 13,918 13,865 13,607 13,666 13, Результаты исследования динамики уровня антител к T.pallidum в опытно-экспериментальных сериях КМ, приготовленных на основе сыворотки крови здоровых доноров крови с добавлением разработанного состава консервирующей добавки или реагента ProCline-300, в процессе их хранения при температуре +(4-8)°С с применением ИФА (по показателю КП) сер Характеристика антипаллидум суммарные антитела» D-1855 (г.Новосибирск) через n месяцев хранения Состав консервирующей добавки к контрольным материалам, используемым при серодиагностике сифилиса, включающий реагент ProClme-300, отличающийся тем, что дополнительно содержит альфа1-антитрипсин и трегалозу при следующем количественном соотношении компонентов на 100 мл сыворотки крови:



Похожие работы:

«В.А.Ястребов ПРЕДПРИНИМАТЕЛЬСТВО Краткий курс лекций по дисциплине Основы малого бизнеса Владимир 2008 1 PDF created with pdfFactory Pro trial version www.pdffactory.com УДК 338.22(075.8) ББК 65.290 я 73 Ястребов, В.А. Предпринимательство/Краткий курс лекций по дисциплине Основы малого бизнеса/В.А.Ястребов; Владим.гос.ун-т. – Владимир: Изд-во Владим.гос.ун-та, 2008. - 65 с. - ISBN Курс лекций разработан в соответствии с программой дисциплины Основы малого бизнеса, изучаемой на дневной форме...»

«Рецензия на книгу Ивана Зимбицкого Челюсти для бизнесмена 2. Анатомия Безденежья от выпускнига Гарварда Павла Кочкина Профессор Гарвардской Школы бизнеса опросил 5000 американцев Как, по их мнению, богатство распределено в стране. Большинство людей заявили, что деньги в нашем обществе несправедливо распределены, но как оказалось, мало кто смог близко представить себе реальную ситуацию. Посмотри на этот график, чтобы понять что люди думают о том, Павел Кочкин Выпускник Гарварда Владелец...»

«Приложение УТВЕРЖДЕНО приказом Министерства образования и наук и Российской Федерации от 201 г. №_ ПОЛОЖЕНИЕ о совете по защите диссертаций на соискание ученой степени кандидата наук, на соискание ученой степени доктора наук I. Общие положения 1. Настоящее Положение определяет порядок формирования и организации работы совета по защите диссертаций на соискание ученой степени кандидата наук, на соискание ученой степени доктора наук (далее - диссертационный совет), права и обязанности...»

«ОТЧЁТ главы управы района Соколиная гора АКСЕНОВА Александра Петровича О РЕЗУЛЬТАТАХ ДЕЯТЕЛЬНОСТИ УПРАВЫ РАЙОНА СОКОЛИНАЯ ГОРА ГОРОДА МОСКВЫ В 2013 ГОДУ на заседании Совета депутатов муниципального округа Соколиная гора 25 марта 2014 года 17.00 УВАЖАЕМЫЕ ДЕПУТАТЫ, РУКОВОДИТЕЛИ ПРЕДПРИЯТИЙ И УЧРЕЖДЕНИЙ, ЖИТЕЛИ РАЙОНА СОКОЛИНАЯ ГОРА! Во исполнение закона города Москвы от 11.07.2012 г. № 39 О наделении органов местного самоуправления муниципальных округов отдельными полномочиями города Москвы и...»

«YEN KTABLAR Annotasiyal biblioqrafik gstrici 2013 Buraxl II BAKI - 2013 Azrbaycan Milli Kitabxanasnn 90 illik yubileyin hsr olunur YEN KTABLAR Annotasiyal biblioqrafik gstrici 2013 Buraxl II BAKI - 2013 Ba redaktor : K.M.Tahirov flsf doktoru, mkdar mdniyyt iisi Trtibilr: L.Talbova, L.Barova Yeni kitablar: biblioqrafik gstrici /ba red. K.Tahirov; trt. ed.: L.Talbova [v b.]; M.F.Axundov adna Azrbаycаn Milli Kitabxanas.- Bak, 2013.- Buraxl II. - 290 s. M.F.Axundov adna Azrbaycan Milli Kitabxanas,...»

«RU 2 449 984 C2 (19) (11) (13) РОССИЙСКАЯ ФЕДЕРАЦИЯ (51) МПК C07C 217/06 (2006.01) A61K 8/41 (2006.01) C11D 3/30 (2006.01) ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА ПО ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ (12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ (21)(22) Заявка: 2008150346/04, 29.03.2007 (72) Автор(ы): БЕРМЕХО ОСЕС Мария Хосе (ES), (24) Дата начала отсчета срока действия патента: АРДЕРИУ ХИРАМЕ Марк (ES), 29.03.2007 АБЕ Хироси (ES) Приоритет(ы): (73) Патентообладатель(и): (30) Конвенционный приоритет: КАО КОРПОРЭЙШН С.А. (ES)...»

«ПРИМЕНЕНИЕ: • Датчики и сенсоры • Управляющие модули • Источники питания • Спецтехника • Светотехника • Промышленная электроника • Автоэлектроника • Добывающая промышленность ЗАО Предприятие Остек Тел.: (495) 788-44-44, факс: 788-44-42 www.ostec-materials.ru E-mail: info@ostec-group.ru 2 УВАЖАЕМЫЕ КОНСТРУКТОРА, РАЗРАБОТЧИКИ, ТЕХНОЛОГИ ЗАО Предприятие Остек предлагает Вашему вниманию цикл инженерных и технологических пособий в новом формате. В пособиях мы рассмотрим современные технологические...»

«РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ НАУК ВЫЧИСЛИТЕЛЬНЫЙ ЦЕНТР СООБЩЕНИЯ ПО ПРИКЛАДНОЙ МАТЕМАТИКЕ А.Н. ЖУКОВ О ВИРТУАЛЬНЫХ ДВУХКОНТУРНЫХ ДВИГАТЕЛЯХ С АГРЕГАТАМИ ДИСКРЕТНОГО ДЕЙСТВИЯ ВЫЧИСЛИТЕЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИМ. А.А. ДОРОДНИЦЫНА РОССИЙСКОЙ АКАДЕМИИ НАУК МОСКВА 2013 2 УДК 621.45:519. 816:629.782.03 Ответственный редактор доктор физ.-матем. наук, чл.-корр. РАН Ю.А. Флёров Рассматриваются направления формирований виртуальных структур авиационного двигателя с дискретными генераторами мощности. Формируется система...»

«Аллен Карр Легкий способ бросить курить Аллен Карр. Легкий способ бросить курить: Добрая книга; 2002 ISBN 5-94015-015-2 Аннотация Главная мысль, красной нитью проходящая через все книги Аллена Карра - это искоренение страха. В самом деле, его талант и его усилия как писателя и терапевта направлены на то, чтобы помочь каждому справиться с тревогами и страхами, которые мешают жить полноценной жизнью и наслаждаться ею. Это ярко демонстрируют его книги, ставшие бестселлерами во многих странах мира:...»

«ДОМ АНТИКВАРНОЙ КНИГИ В НИКИТСКОМ АУКЦИОН № 26 ЗОЛОТОЙ И СЕРЕБРЯНЫЙ ВЕКА РУССКОЙ ЛИТЕРАТУРЫ РЕДКИЕ КНИГИ, РУКОПИСИ, АВТОГРАФЫ, ДОКУМЕНТЫ И ФОТОГРАФИИ 23 апреля 2014 года, 19:00 Москва, Никитский пер., д. 4а, стр. 1 · · 1 РЕДКИЕ КНИГИ, РУКОПИСИ, АВТОГРАФЫ, ДОКУМЕНТЫ И ФОТОГРАФИИ МОСКВА, 23 АПРЕЛЯ 2014 Предаукционный показ с 13 по 22 апреля 2014 года (с 10:00 до 20:00, кроме понедельника) по адресу: Москва, Никитский пер., д. 4а, стр. 1 (м. Охотный ряд) Справки, заказ печатных каталогов,...»

«5 Turczaninowia 2008, 11(1) : 5–168 УДК 582.594 (597) L. Averyanov Л.В. Аверьянов THE ORCHIDS OF VIETNAM ILLUSTRATED SURVEY Part 1 SUBFAMILIES APOSTASIOIDEAE, CYPRIPEDIOIDEAE AND SPIRANTHOIDEAE The article opens serial publication of illustrated critical taxonomical survey of orchids in the flora of Vietnam. The first part of this monograph includes introduction, illustrated glossary of terminology used in identification keys and in description of taxa, key for identification of genera, as well...»

«Приют героев //Эксмо, М., 2006 ISBN: 5-699-14879-5 FB2: “Snake ” fenzin@mail.ru, 11.05.2007, version 1.0 UUID: FBD-13TOI8MS-2GHB-RWAC-P5WM-VN5J32I6TELW PDF: fb2pdf-j.20111230, 13.01.2012 Генри Лайон Олди Приют героев Шестеро постояльцев гостиницы Приют героев сгинуло без вести в результате ночного налета таинственных злоумышленников Расследование преступления поручено двум конкурирующим службам, но барон фон Шмуц, обер-квизитор Бдительного Приказа, и магичка высшей квалификации Генриэтта...»

«Мультиварка RMC-M4502 РУКОВОДСТВО ПО ЭКСПЛУАТАЦИИ www.multivarka.pro УВАЖАЕМЫЙ ПОКУПАТЕЛЬ! Благодарим вас за то, что вы отдали предпочтение бытовой технике от компании REDMOND. REDMOND — это новейшие разработки, качество, надежность и внимательное отношение к нашим покупателям. Надеемся, что и в будущем вы будете выбирать изделия нашей компании. Мультиварка REDMOND RMC-M4502 — это современное многофункциональное устройство для приготовления пищи, в котором новейшие инновационные разработки в...»

«2 3 СОСТАВ РАБОЧЕЙ ГРУППЫ по разработке образовательной программы послевузовского профессионального образования по специальности Оториноларингология Ученая № Фамилия, имя, Занимаемая степень, Место работы п/п отчество должность звание Зав. каф. Д.м.н., ГБОУ ВПО оториноларинБлоцкий А.А. профессор Амурская ГМА гологии ассистент каф. ГБОУ ВПО оториноларинЦепляев М.Ю. К.м.н., Амурская ГМА гологии СОДЕРЖАНИЕ Состав рабочей группы и консультантов по разработке основной профессиональной...»

«1 Александр Свияш Начни жизнь заново. 4 шага к новой реальности ОГЛАВЛЕНИЕ Для кого эта книга 1. Кого будем менять? 2. Все вроде просто! А где же результаты? 3. Поговорим о грустном. То есть о наших эмоциях 4. С чего будем начинать? 5. Шаг первый – долой эмоциональную грязь 6. Что будем загружать на Первом шаге? 7. Пишем Развернутую формулу прощения 8. Шаг второй - обновляем свой склад убеждений 9. Учимся правильно себя программировать 10. Как будем загружать? 11. Шаг третий – формулируем свои...»

«МИНИСТЕРСТВО ОБЩЕГО И ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ВОЛГОГРАДСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ ВОЛЖСКИЙ ГУМАНИТАРНЫЙ ИНСТИТУТ В.В. Горяйнов Курс лекций по теории функций комплексного переменного Волгоград 1998 ББК 22.161.5 Г 71 Рецензенты: доктор физ.-мат. наук, профессор В.М. Миклюков, доктор физ.-мат. наук, профессор Д.В. Прохоров, кандидат физ.-мат. наук, доцент В.А. Ботвинник Печатается по решению учебно-методической комиссии ВГИ ВолГУ Г 71 Горяйнов В.В. Курс лекций по...»

«ГНЦ ФГУГП Южморгеология ООО НефтеГазСтрой Центр Утверждаю Генеральный директор А.П.Пронкин ПРОЕКТ на выполнение работ по объекту Комплексные геолого-геофизические работы в области сочленения Лено-Тунгусской НГП и Лаптевской ПНГО (Государственный контракт от 30 марта 2012 г. № 40/01/70-108) Предварительный отчет Оценка воздействия на окружающую среду. (ОВОС). (Сухопутная часть) Генеральный директор ООО НефтеГазСтрой Центр Ильичев А.В. Москва, 2013 г. ГК40/01/70-108 Комплексные...»

«Священный Къуран Перевод смыслов Кулиева Эльмира ОГЛАВЛЕНИЕ Сура 1. Открывающая Книгу Сура 2. Корова Сура 3. Семейство Имрана Сура 4. Женщины Сура 5. Трапеза Сура 6. Скот Сура 7. Преграды Сура 8. Добыча Сура 9. Покаяние Сура 10. Йунус Сура 11. Худ Сура 12. Йуcуф Сура 13. Гром Сура 14. Ибpaxим Сура 15. Aл-Xиджp Сура 16. Пчелы Сура 17. Перенес Ночью Сура 18. Пещера Сура 19. Мapйaм Сура 20. Тa Xa Сура 21. Пророки Сура 22. Xaдж Сура 23. Верующие Сура 24. Свет Сура 25. Различение Сура 26. Поэты Сура...»

«СОДЕРЖАНИЕ Блюда из мяса Курица с овощами 19 Гуляш особый 11 Голень куриная с овощами 19 Первые блюда Говядина с черносливом 11 Медово-чесночные крылышки 20 Суп куриный с вермишелью 4 Говядина с розмарином и петрушкой 12 Курица в апельсиновом соке 20 Суп с фрикадельками 4 Говядина с луком и сыром 12 Курочка в соевом соусе 21 Суп грибной 5 Буженина 13 Куриные сердечки с овощами 21 Суп рыбный 5 Картофель тушёный с мясом 13 Куриный рулет с черносливом 22 Гороховый суп с копченостями 6 Свинина в...»

«РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ НАУК ИНСТИТУТ АРХЕОЛОГИИ НАЦИОНАЛЬНАЯ АКАДЕМИЯ НАУК УКРАИНЫ ИНСТИТУТ АРХЕОЛОГИИ МЕТОДИКИ РОССИЙСКИХ И УКРАИНСКИХ ПОЛЕВЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ Редколлегия серии: член-корр. П. Г. Гайдуков (председатель), к.и.н. К. Н. Гаврилов, к.и.н. В. А. Завьялов, к.и.н. С. Д. Захаров, к.и.н. А. Р. Канторович, к.и.н. Н. А. Кренке, к.и.н. Н. В. Лопатин, д.и.н. А. А. Масленников (зам. председателя), к.и.н. М. В. Шунько, к.и.н. А. В. Энговатова (зам. председателя) Ответственные редакторы выпуска:...»






 
© 2014 www.kniga.seluk.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Книги, пособия, учебники, издания, публикации»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.