WWW.KNIGA.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Книги, пособия, учебники, издания, публикации

 

RU 2 486 248 C2

(19) (11) (13)

РОССИЙСКАЯ ФЕДЕРАЦИЯ

(51) МПК

C12P 13/08 (2006.01)

C12N 1/20 (2006.01) C12R 1/15 (2006.01)

ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА

ПО ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ

(21)(22) Заявка: 2011126521/10, 29.06.2011 (72) Автор(ы):

Герман Людмила Сергеевна (RU), (24) Дата начала отсчета срока действия патента: Сенаторова Валентина Николаевна (RU), 29.06.2011 Бирюков Валентин Васильевич (RU), Щеблыкин Игорь Николаевич (RU), Приоритет(ы):

Петрищева Ольга Аркадьевна (RU) (22) Дата подачи заявки: 29.06. RU (73) Патентообладатель(и):

(43) Дата публикации заявки: 10.01.2013 Бюл. № Федеральное государственное бюджетное (45) Опубликовано: 27.06.2013 Бюл. № 18 образовательное учреждение высшего профессионального образования (56) Список документов, цитированных в отчете о "Московский государственный университет поиске: RU 2107097 С1, 20.03.1998. US инженерной экологии" (ФГБОУ ВПО 20080160585 A1, 03.07.2008. RU 2099424 С1, "МГУИЭ") (RU) 20.12.1997. RU 2125608 С1, 27.01.1999.

ФЕДОТОВА Н.А. Разработка технологии получения из зернового сырья азотсодержащих компонентов для процессов ферментации. Автореферат дисс. - М.: 2009.

SU 298132 А3, 11.03.1971.

Адрес для переписки:

C C 105066, Москва, ул. Старая Басманная, 21/4, МГУИЭ (Московский государственный университет инженерной экологии), ректору МГУИЭ Д.А. Баранову (54) СПОСОБ БИОСИНТЕЗА L-ЛИЗИНА (57) Реферат: среды 10-20% посевного материала, Изобретение относится к области выращенного в две стадии. Процесс биосинтеза биотехнологии. Предложен способ ведут с непрерывной подачей подпитки, биосинтеза L-лизина на ферментационных начиная с 8-16 час культивирования. При этом средах. Готовят основную ферментационную поддерживают ингибирующую концентрацию среду на основе ферментолизата крахмала в редуцирующих веществ в культуральной количестве 8-15% по глюкозе и жидкости 4-8%. После заполнения аппарата до RU дополнительную ферментационную среду, максимального объема через 60-66 часов содержащую компоненты основной культивирования и далее каждые 6-12 часов в ферментационной среды, концентрированные течение всего остального процесса биосинтеза в 2-3,5 раза. Стерилизуют их. Биосинтез L- часть культуральной жидкости в количестве 10лизина осуществляют с использованием 15% от максимального объема перекачивают в штамма-продуцента Corynebacterium glutamicum аппарат для дображивания. В этом аппарате BKM Ac-2577D (BIGOR 55). Загружают в продолжают процесс биосинтеза в течение 6- ферментер основную питательную среду в часов при тех же условиях, что и в основном количестве 1/3 от ее объема. Затем производят аппарате, но без подачи дополнительной засев основной ферментационной питательной питательной среды. Затем выделяют L-лизин.

.: ru Изобретение позволяет вести процесс обеспечивает получение культуральной биосинтеза в течение длительного времени без жидкости с концентрацией L-лизина перед снижения скорости синтеза L-лизина и выделением не ниже 100 г/л. 4 пр.

RUSSIAN FEDERATION

FEDERAL SERVICE

FOR INTELLECTUAL PROPERTY

(12)

Abstract

OF INVENTION

(43) Application published: 10.01.2013 Bull. MGUIEh (Moskovskij gosudarstvennyj universitet

(57) Abstract: reducing substances in the culture fluid of 4-8% is

times concentrated. They are sterilised. Biosynthesis biosynthesis process is continued for 6-12 hours inoculation of the basic fermentation nutrient medium the rate of synthesis of L-lysine, and provides stages. Biosynthesis process is carried out with concentration of L-lysine prior to the isolation.

cultivation. At that the inhibitory concentration of Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для получения L-лизина, применяемого для балансировки кормов животных, в пищевой промышленности для балансировки состава пищевых продуктов и в медицинской промышленности для приготовления аминокислотных смесей парентерального Известны способы получения L-лизина на основе микробиологического синтеза, предусматривающие культивирование с использованием различных штаммовпродуцентов Corynebacterium и Brevibacterium. Источником углерода в питательных средах служит меласса, технический сахар, техническая глюкоза. В качестве ростового фактора (источника аминного азота) используются кукурузный экстракт, кислотные гидролизаты белково-витаминного концентрата (БВК) и биомассы продуцента.

Известные в России способы получения L-лизина, реализованные в промышленных масштабах, ориентированы на использование мелассы и гидролизатов БВК, а конечным продуктом являлся жидкий концентрат лизина (ЖКЛ) или высушенный на отрубях концентрат кормового лизина (ККЛ).

Однако на территории России в настоящее время практически все углеводсодержащее сырье непищевого назначения для микробиологической промышленности труднодоступно или дорого. В связи с этим целесообразно использование технологий, работающих на нетрадиционном сырье.

Известен способ получения L-лизина, описанный в патенте США №4,411,991 ( г.), в котором предлагается использовать гидролизат концентрированной молочной сыворотки в качестве источника редуцирующих веществ (РВ). Недостатком данного способа является низкое содержание РВ в полученном гидролизате, и как следствие, низкая концентрация лизина.

Известен способ получения L-лизина, описанный в Journal of Fermentation and Bioengineering. Vol.86, №2, 180-184. 1998. Регулирование метаболической активности осуществляется внесением в культуральную жидкость лейцина так, чтобы текущая концентрация лейцина поддерживалась на уровне 0,1 г/л. Недостатком данного способа является использование генно-инженерных штаммов-продуцентов лизина, биомасса которых запрещена в ЕЭС для использования в комбикормах с/х животных.

Наиболее близким к предлагаемому способу по регулированию биосинтеза лизина в процессе культивирования является патент США №2107097, в котором описан способ биосинтеза лизина на ферментационных средах, предусматривающий приготовление ферментационной среды с углеводной, белковой и солевой частями, культивирование в ферментере на основной ферментационной среде штаммапродуцента с внесением дополнительной ферментационной среды (подпитки) в ходе процесса культивирования, при поддержании величины рН, температуры культивирования, аэрации и перемешивания на питательных средах с глюкозой в качестве источника углеводов с использованием лейцин-ауксотрофного штамма Corynebacterium, где регулирование метаболической активности происходит 45 путем внесения подпитки, содержащей источник углеводов и белка, по концентрации лейцина в культуральной жидкости. Весь процесс биосинтеза проводят при лимитирующей концентрации углеводов в питательной среде 5-35 г/л.

К недостаткам данного способа относятся использование кристаллической глюкозы и низкая концентрация L-лизина в культуральной жидкости, что является следствием периодического способа ведения процесса культивирования.

Задачей настоящего изобретения является биосинтез L-лизина на основе питательных сред, содержащих ферментолизат крахмала как источник углеводов, позволяющий получать высокую концентрацию L-лизина в культуральной жидкости.

Поставленная задача достигается тем, что - биосинтез лизина осуществляют на ферментационных средах с углеводной, белковой и солевой частями; культивирование штамма-продуцента проводят в ферментере на основной ферментационной среде с внесением дополнительной питательной среды (подпитки) в ходе процесса биосинтеза, при поддержании величины рН, температуры культивирования, аэрации и перемешивания; а в качестве сырья для приготовления основной ферментационной среды и подпитки используют ферментолизат крахмала, который получают из крахмалсодержащего растительного сырья или крахмалсодержащих отходов пищевой промышленности; ферментолизат крахмала вносят в ферментацонную среду в количестве 8-15% по глюкозе, и проводят культивирование с использованием штамма-продуцента Corynebacterium glutamicum BKM Ac-2577 D (BIGOR 55); в ферментер загружают 1/3 от его рабочего объема основную питательную среду, содержащую 2,5-7,5% источника органического азота (ростовой фактор), аммоний сернокислый 3,5-6,5%, соли магния и фосфора 0,05-0,4%, тиамин и биотин 0,05-0,6 мг/л и 10-20% посевного материала из посевного аппарата, выращенного в две стадии, проводят культивирование при рН 6,5-7,5, температуре 28C, и условиях аэрации и перемешивания, обеспечивающих скорость массопередачи кислорода не менее 5 г O2/л*час; через 8-16 часов от начала культивирования начинают подачу подпитки, в которой концентрация всех компонентов в 2-3,5 раза больше, чем в основной питательной среде, поддерживая концентрацию РВ в среде на уровне 4-8%; после достижения максимального (рабочего) объема жидкости в ферментере через 60-66 часов культивирования производят отбор культуральной жидкости (КЖ) в количестве 10-15% от максимального объема и передают ее в отдельный аппарат, где в процессе биосинтеза в течение 6-12 часов происходит дображивание РВ; процесс отбора культуральной жидкости проводят многократно каждые 6-12 часов в течение 350-500 часов роста; дображивание (процесс биосинтеза) проводят при тех же параметрах процесса, что и в основной ферментации (кроме подачи подпитки, она отсутствует) в течение 6-12 часов.

Сущность предлагаемого способа получения L-лизина заключается в следующем:

- на основе ферментолизата крахмала готовят основную ферментационную среду:

ферментолизат крахмала вносят в количестве 8-15% по глюкозе, 2,5-7,5% источника органического азота (ростового фактора), аммоний сернокислый 3,5-6,5%, соли магния и фосфора 0,05-0,4%, тиамин и биотин 0,05-0,6 мг/л и подпитку (дополнительную ферментационную среду), содержащую компоненты ферментационной среды, концентрированные в 2-3,5 раза, и стерилизуют их;

- биосинтез L-лизина осуществляется с использованием штамма-продуцента лизина Corynebacterium glutamicum BKM Ac-2577 D (BIGOR 55). Штамм получен мутагенезом из родительского штамма В5200 (ВКПМ ГосНИИгенетика) в компании ООО ПКФ «БИГОР». Культура Corynebacterium glutamicum BKM Ac-2577 D BIGOR имеет генетические маркеры: leu и horn ауксотрофность и амилоэтилцистеинрезистентность, облигатный аэроб, грамположительна, спор не образует. Клетки в виде палочек неправильной формы, размером 0,3-1,01,5-4,7 мкм, неподвижные.

Располагаются одиночно или в парах, часто V-образно;

- засев основной ферментационной питательной среды производят 10-20% посевного материала со второй стадии выращивания посевного материала;

- полунепрерывный процесс биосинтеза ведут с непрерывной подачей подпитки, начиная с 8-16 час культивирования, при этом метаболическая активность штаммаRU 2 486 248 C продуцента, ауксотрофного по лейцину, регулируется за счет поддержания ингибирующей концентрации РВ в культуральной жидкости 4-8% по глюкозе, а содержание лейцина поддерживается в культуральной жидкости 0,1-0,2 г/л за счет ростового фактора, входящего в состав подпитки;

- по заполнении аппарата до максимального объема через 60-66 часов культивирования, и далее каждые 6-12 час, многократно - в течение 350-500 часов, часть культуральной жидкости в количестве 10-15% от максимального объема КЖ перекачивают в стерильный аппарат, где поддерживается оптимальная для биосинтеза величина рН 6,7-7,4 подачей аммиачной воды. В этом аппарате происходит процесс биосинтеза в течение 6-12 часов, обеспечивающий дображивание РВ, из КЖ после дображивания затем выделяют лизин.

Сущность предлагаемой технологии раскрывается, но не исчерпывается в приведенных примерах.

Ферментацию проводят в ферментере емкостью 10 л, снабженном системами регулирования температуры, аэрации, перемешивания, рН, парциального давления растворенного кислорода, автоматической подачей дополнительных питательных Начальные условия перемешивания и аэрации обеспечивают скорость массопередачи кислорода 5 г O2/л*час.

Процесс биосинтеза, обеспечивающий дображивание (потребление остаточных редуцирующих веществ до концентрации не выше 0,8%), проводят в аппарате Биофло, емкостью 1 л, снабженном системами рН-статирования, термостатирования, аэрации, перемешивания.

Штамм-продуцент L-лизина Corynebacterium glutamicum BIGOR 55, выращенный на агаризованной среде Хоттингера при 30°C в течение суток, переносят в посевные колбы со стерильной питательной средой следующего состава (г/л):

Ферментолизат крахмала (по глюкозе) - 25, Кукурузный экстракт - 40, Аммоний сернокислый - 4, Натрий хлористый - 10, Засев колб производят при начальном значении рН 7,0-7,3.

При температуре 30°C выращивают на качалке в колбах в течение 18 часов.

Посевной материал из колб в количестве 10% переносят в аппарат, емкостью 1 л, предварительно заполненный 450 мл стерильной питательной среды следующего состава (г/л):

Ферментолизат крахмала (по глюкозе) - 50, Кукурузный экстракт - 45, Аммоний сернокислый - 20, Калий фосфорнокислый - 1, Магний сернокислый - 0, Пеногаситель Пропинол Б-400 - 1, Засев аппарата производят при начальном значении рН 7,0-7,3.

Культивирование ведут при 30°C в течение 8 часов.

Готовый посевной материал со второй стадии в количестве 10% от начального объема питательной среды в рабочем ферментере стерильно перекачивают перистальтическим насосом в рабочий ферментер.

Объем рабочего ферментера - 10 л. Аппарат стерилизуют с 3 л стерильной питательной среды следующего состава (г/л):

Ферментолизат крахмала (по глюкозе) - 80, Кукурузный экстракт - 25, Аммоний сернокислый - 35, Магний сернокислый - 0, Калий фосфорнокислый - 4, Пеногаситель Пропинол Б-400 - 1, Через 8 часов культивирования включают подачу подпитки следующего состава Ферментолизат крахмала (по глюкозе) - 280, Кукурузный экстракт - 87, Аммоний сернокислый - 122, Магний сернокислый - 1, Калий фосфорнокислый - 14, Пеногаситель Пропинол Б-400 - 3, Подпитку подают в ферментер со скоростью, величина которой меняется по специально составленному алгоритму, выходя к 60 часам на постоянное значение, которое поддерживается в течение всего процесса ферментации.

Через 60 часов 0,85 л культуральной жидкости (КЖ), что составляет 10% от объема КЖ в ферментере, перекачивают в стерильный аппарат емкостью 1 л, снабженный системами рН-статирования, термостатирования, перемешивания, аэрации, для проведения процесса биосинтеза, обеспечивающего дображивание редуцирующих веществ. Каждые 6 часов из аппарата емкостью 1 л сливают 0,85 л культуральной жидкости и вносят следующую порцию из основного аппарата (периодический слив) и передают на стадию выделения лизина.

Культивирование в основном аппарате ведется в течение 350 часов. Общий слив за 350 часов - 50,6 л с концентрацией лизина 100 г/л (по лизину монохлоргидрату).

Ферментацию проводят в ферментере емкостью 10 л, снабженном системами регулирования температуры, аэрации, перемешивания, рН, парциального давления растворенного кислорода, автоматической подачей дополнительных питательных 45 сред.

Начальные условия перемешивания и аэрации обеспечивают скорость массопередачи кислорода 5-6 г/O2/л*час.

Процесс биосинтеза, обеспечивающий дображивание РВ, проводят в аппарате Биофло, емкостью 2 л, снабженном системами рН-статирования, термостатирования, аэрации, перемешивания.

Штамм-продуцент L-лизина Corynebacterium glutamicum BIGOR 55, выращенный на агаризованной среде Хоттингера при 30°C в течение суток, переносят в посевные колбы со стерильной питательной средой следующего состава (г/л):

Ферментолизат крахмала (по глюкозе) - 25, Кукурузный экстракт - 40, Аммоний сернокислый - 4, Натрий хлористый - 10, Засев колб производят при начальном значении рН 7,0-7,3.

При температуре 30°C выращивают на качалке в колбах в течение 20 часов.

Посевной материал из колб в количестве 10% переносят в аппарат, емкостью 1 л, предварительно заполненный 600 мл стерильной питательной среды следующего состава (г/л):

Ферментолизат крахмала (по глюкозе) - 50, Кукурузный экстракт - 45, Аммоний сернокислый - 20, Калий фосфорнокислый - 1, Магний сернокислый - 0, Пеногаситель Пропинол Б-400 - 1, Засев аппарата производят при начальном значении рН 7,0-7,3.

Культивирование ведут при 30°C в течение 12 часов.

Готовый посевной материал со второй стадии в количестве 20% от начального объема питательной среды в рабочем ферментере стерильно перекачивают перистальтическим насосом в рабочий ферментер.

Объем рабочего ферментера - 10 л.

Аппарат стерилизуют с 3 л стерильной питательной среды следующего состава (г/л):

Ферментолизат крахмала по глюкозе - 150, Кукурузный экстракт - 75, Аммоний сернокислый - 65, Калий фосфорнокислый - 4, Магний сернокислый - 0, Пеногаситель Пропинол Б-400 - 1, Через 16 часов культивирования включают подачу подпитки, следующего состава Ферментолизат крахмала - 300, Кукурузный экстракт - 150, Аммоний сернокислый - 130, 45 Калий фосфорнокислый - 8, Магний сернокислый - 2, Подпитку подают в ферментер со скоростью, величина которой меняется по специально составленному алгоритму, выходя к 66 часам на постоянное значение, которое поддерживается в течение всего процесса ферментации.

Через 66 часов 1,275 л культуральной жидкости, что составляет 15% от объема КЖ в ферментере, перекачивают в стерильный аппарат емкостью 2 л, снабженный системами рН-статирования, термостатирования, перемешивания, аэрации, для дображивания РВ. Каждые 12 часов из аппарата емкостью 2 л сливают 1,275 л культуральной жидкости и вносят следующую порцию КЖ из основного аппарата (периодический слив).

Культивирование в основном аппарате ведется в течение 500 часов. Общий слив за 500 часов - 55,6 л с концентрацией лизина 115 г/л (по лизину монохлоргидрату).

Ферментацию проводят в ферментере емкостью 10 л, снабженном системами регулирования температуры, аэрации, перемешивания, рН, парциального давления растворенного кислорода, автоматической подачей дополнительных питательных Начальные условия перемешивания и аэрации обеспечивают скорость массопередачи кислорода 5 г O2/л*час.

Дображивание проводят в аппарате Биофло, емкостью 1 л, снабженном системами рН-статирования, термостатирования, аэрации, перемешивания.

Штамм-продуцент L-лизина Corynebacterium glutamicum BIGOR 55, выращенный на агаризованной среде Хоттингера при 30°C в течение суток, переносят в посевные колбы со стерильной питательной средой следующего состава (г/л):

Ферментолизат крахмала по глюкозе - 25, Дрожжевой экстракт - 12, Аммоний сернокислый - 4, Натрий хлористый - 10, Засев колб производят при начальном значении рН 7,0-7,3.

При температуре 30°C выращивают на качалке в колбах в течение 18 часов.

Посевной материал из колб в количестве 10% переносят в аппарат, емкостью 1 л, предварительно заполненный 300 мл стерильной питательной среды следующего состава (г/л):

Ферментолизат крахмала по глюкозе - 50, Дрожжевой экстракт - 13, Аммоний сернокислый - 20, Калий фосфорнокислый - 1, Магний сернокислый - 0, Пеногаситель Пропинол Б-400 - 1, Засев аппарата производят при начальном значении рН 7,0-7,3. Культивирование ведут при 30°C в течение 8 часов.

Готовый посевной материал со второй стадии в количестве 10% от начального объема питательной среды в рабочем ферментере стерильно перекачивают перистальтическим насосом в рабочий ферментер.

Объем рабочего ферментера - 10 л. Аппарат стерилизуют с 3 л стерильной питательной среды следующего состава (г/л):

Ферментолизат крахмала по глюкозе - Дрожжевой экстракт - 7, Аммоний сернокислый - 35, Калий фосфорнокислый - 1, Магний сернокислый - 0, Пеногаситель Пропинол Б-400 - 1, Через 8 часов культивирования включают подачу подпитки следующего состава Ферментолизат крахмала - 280, Дрожжевой экстракт - 26, Аммоний сернокислый - 122, Калий фосфорнокислый - 14, Магний сернокислый - 3, Подпитку подают в ферментер со скоростью, величина которой меняется по специально составленному алгоритму, выходя к 60 часам на постоянное значение, которое поддерживается в течение всего процесса ферментации.

Через 60 часов 0,85 л культуральной жидкости, что составляет 10% от объема КЖ в ферментере, перекачивают в стерильный аппарат емкостью 1 л, снабженный системами рН-статирования, термостатирования, перемешивания, аэрации, для дображивания редуцирующих веществ. Каждые 6 часов из аппарата емкостью 1 л сливают 0,85 л культуральной жидкости и вносят следующую порцию из основного аппарата (периодический слив) и передают на стадию выделения лизина.

Культивирование в основном аппарате ведется в течение 350 часов. Общий слив за 350 часов - 51,4 л с концентрацией лизина 100 г/л (по лизину монохлоргидрату).

Ферментацию проводят в ферментере емкостью 10 л, снабженном системами регулирования температуры, аэрации, перемешивания, рН, парциального давления растворенного кислорода, автоматической подачей дополнительных питательных Начальные условия перемешивания и аэрации обеспечивают скорость массопередачи кислорода 5-6 г/O2/л*час.

Дображивание проводят в аппарате Биофло, емкостью 2 л, снабженном системами рН-статирования, термостатирования, аэрации, перемешивания.

Штамм-продуцент L-лизина Corynebacterium glutamicum BIGOR 55, выращенный на агаризованной среде Хоттингера при 30°C в течение суток, переносят в посевные колбы со стерильной питательной средой следующего состава (г/л):

Ферментолизат крахмала (по глюкозе) - 25, Ферментолизат глютена - 20, Растительный экстракт - 20, Аммоний сернокислый - 4, Натрий хлористый - 10, Засев колб производят при начальном значении рН 7,0-7,3.

При температуре 30°C выращивают на качалке в колбах в течение 20 часов.

Посевной материал из колб в количестве 10% переносят в аппарат, емкостью 1 л, предварительно заполненный 600 мл стерильной питательной среды следующего состава (г/л):

Ферментолизат крахмала по глюкозе - 50, Ферментолизат глютена - 22, Растительный экстракт - 22, Аммоний сернокислый - 20, Калий фосфорнокислый - 1, Магний сернокислый - 0, Пеногаситель Пропинол Б-400 - 1, Засев аппарата производят при начальном значении рН 7,0-7,3. Культивирование ведут при 30°C в течение 12 часов.

Готовый посевной материал со второй стадии в количестве 20% от начального объема питательной среды в рабочем ферментере стерильно перекачивают перистальтическим насосом в рабочий ферментер.

Объем рабочего ферментера - 10 л.

Аппарат стерилизуют с 3 л стерильной питательной среды следующего состава (г/л):

Ферментолизат крахмала по глюкозе - 150, Ферментолизат глютена - 37, Растительный экстракт - 37, Аммоний сернокислый - 45, Аммоний фосфорнокислый - 0, Магний сернокислый - 0, Пеногаситель Пропинол Б-400 - 1, Через 16 часов культивирования включают подачу подпитки, следующего состава Ферментолизат крахмала (по глюкозе) - 300, Ферментолизат глютена - 75, Растительный экстракт - 75, Аммоний сернокислый - 130, Калий фосфорнокислый - 8, Магний сернокислый - 2, 45 витамины:

Подпитку подают в ферментер со скоростью, величина которой меняется по специально составленному алгоритму, выходя к 66 часам на постоянное значение, которое поддерживается в течение всего процесса ферментации.

Через 66 часов 1,275 л культуральной жидкости, что составляет 15% от объема КЖ в ферментере, перекачивают в стерильный аппарат емкостью 2 л, снабженный системами рН-статирования, термостатирования, перемешивания, аэрации, для дображивания РВ. Каждые 12 часов из аппарата емкостью 2 л сливают 1,275 л культуральной жидкости и вносят следующую порцию КЖ из основного аппарата (периодический слив).

Культивирование в основном аппарате ведется в течение 500 часов. Общий слив за 500 часов - 56,2 л с концентрацией лизина 115 г/л (по лизину монохлоргидрату).

Осуществлен способ культивирования L-лизина, обеспечивающий получение КЖ с концентрацией лизина перед выделением не ниже 100 г/л (по лизину-монохлоргидрату).

Этот результат достигнут благодаря использованию в качестве источника углеводов для приготовления питательных сред (основной и подпитки) ферментолизата крахмала, полученного из возобновляемого растительного крахмалсодержащего сырья.

Регуляция биосинтеза лизина ингибирующими концентрациями компонентов питательной среды и подача подпитки с постоянной скоростью по концентрации РВ в культуральной жидкости позволяет вести процесс биосинтеза в течение длительного времени без снижения скорости синтеза лизина.

Использование нового штамма-продуцента, полученного без применения рекомбинантных технологий, допускает применение биомассы продуцента в составе белково-витаминных кормовых добавок.

1. Способ биосинтеза L-лизина на ферментационных средах, предусматривающий приготовление ферментационной среды с углеводной, белковой и солевой частями, культивирование в ферментере на основной ферментационной среде штаммапродуцента с внесением дополнительной ферментационной среды в ходе процесса культивирования, при поддержании величины рН, температуры культивирования, аэрации и перемешивания, отличающийся тем, что в качестве штамма-продуцента используют Corynebacterium glutamicum ВКМ Ac-2577D (BIGOR 55); основная питательная среда содержит ферментолизат крахмалсодержащего сырья в количестве 8,0-15,0% по глюкозе; среду загружают в ферментер в количестве 1/3 от его рабочего объема; вносят 10-20% посевного материала, выращенного в две стадии;

через 8-16 ч культивирования начинают подачу дополнительной ферментационной среды, в которой концентрация всех компонентов в 2-3,5 раза больше, чем в основной, поддерживая концентрацию редуцирующих веществ в культуральной жидкости в пределах 4-8%, причем после достижения максимального объема жидкости в аппарате через 60-66 ч культивирования и далее каждые 6-12 ч в течение всего остального процесса биосинтеза производят отбор ферментационной жидкости из ферментера в количестве 10-15% от максимального объема и передают ее в аппарат для дображивания, в котором продолжают процесс биосинтеза в течение 6-12 ч при тех же условиях, что и в основном аппарате, но без подачи дополнительной питательной



Похожие работы:

«2 ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ ГЛАВА 1. ПОСТАНОВКА ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ 1.1. Контейнерные терминалы восточного региона Балтийского моря и задачи управления этими терминалами 1.2. Формализация процессов обработки экспортно-импортных и каботажных судов на основе теории массового обслуживания ГЛАВА 2. МАТЕМАТИЧЕСКОЕ ОБЕСПЕЧЕНИЕ ПРОЦЕССОВ СОВМЕСТНОЙ ОБРАБОТКИ ЭКСПОРТНО-ИМПОРТНЫХ И КАБОТАЖНЫХ СУДОВ НА ОСНОВЕ ВЫЧИСЛИТЕЛЬНЫХ И ПОЛИНОМИАЛЬНЫХ МОДЕЛЕЙ. 42 2.1. Постановка задачи формализации совместной обработки...»

«Библиотека Альдебаран: http://lib.aldebaran.ru Александр Викторович Доставалов: По ту сторону 2 Александр Викторович Доставалов По ту сторону По ту сторону: Олма-Пресс; Москва; 2000 ISBN 5-224-01414-X Аннотация Во время очередного восхождения группа скалолазов невольно попадает в параллельный мир. В этом мире Советский Союз, объединившись с фашистской Германией, выиграл Вторую мировую войну и установил господство над всеми государствами Земли. Но своего мира им мало. МАЛЕНЬКОМУ БОГУ СОЛНЦА...»

«ISSN 1998-6629 ВЕСТНИК САМАРСКОГО ГОСУДАРСТВЕННОГО АЭРОКОСМИЧЕСКОГО УНИВЕРСИТЕТА имени академика С. П. КОРОЛЁВА (национального исследовательского университета) № 7 (31) 2011 УДК 05 ББК Я5 ВЕСТНИК САМАРСКОГО ГОСУДАРСТВЕННОГО АЭРОКОСМИЧЕСКОГО УНИВЕРСИТЕТА имени академика С. П. КОРОЛЁВА (национального исследовательского университета) № 7 (31) Тематический выпуск Главный редактор Шахматов Е. В., д.т.н., профессор Заместитель главного редактора Прокофьев А. Б., д.т.н., профессор Ответственный...»

«ЗОЛОТАРЁВЫ (ОТЕЦ И СЫНОВЬЯ) ВЕНГРИКИ — КТО ОНИ /ЧАСТЬ ПЕРВАЯ/ Материалы сайта предназначены для толерантных (терпимых) лиц 18-ти лет и старше; и, воспринимающих РУССКИЙ МАТ без последствий для своей сердечной и мозговой активности (т.е. при звуках ЧИСТОЙ, НАИЧИСТЕЙШЕЙ, НАИЧЕСТНЕЙШЕЙ РЕЧИ – не впадающие в ступор). Примечательно и небезынтересно для нас то, что: самонаименование СЛО+ВЕ+Н(Ы) и наименование, прозвание ВЕ+Н+ГРИК(И) – в своём составе содержат одно и то же самое слово-понятие ве = вh...»

«ТРИЛОГИЯ АЛЕКСАНДРА ЯНОВА РОССИЯ И ЕВРОПА. 1462-1921 19 АПРЕЛЯ 2010 15:30 - 17:30 МОСКВА МОДЕРАТОР: Лев Регельсон ВЫСТУПАЮЩИЕ: Тренин Дмитрий Витальевич Карацуба Ирина Владимировна Кондаков Игорь Вадимович Ситнянский Георгий Юрьевич Балакирев Александр Сергеевич Зимин Дмитрий Борисович Режабек Борис Георгиевич Шегидевич Яков Степанович Куракина Татьяна Сергеевна Волкова Эмилия Николаевна Магарил Сергей Александрович Филатов Сергей Борисович Антонов Александр Васильевич Якунин Глеб Павлович...»

«ПОМИНАНИЯ АЛЛАХА ИЗ СЛОВ ГОСПОДИНА БЛАГОЧЕСТИВЫХ, ДА БЛАГОСЛОВИТ ЕГО АЛЛАХ И ДА ПРИВЕТСТВУЕТ (Аль-азкар аль-мунтахаба мин калам саййид аль-абрар) Составитель: Имам Мухйи-д-дин Абу Закарийа бин Шараф ад-Димашки аш-Шафи‘и ан-Навави (631  676 гг.х. / 1233 – 1277) Перевод, примечания и указатели: Владимир (Абдулла) Нирша 2 ОТ ПЕРЕВОДЧИКА С именем Аллаха Милостивого, Милосердного Вниманию читателя предлагается книга “Аль-азкар аль-мунтахаба мин калам саййид аль-абрар”, которая относится к числу...»

«Рай, святой город и слава трона Преподобный Элвуд Скотт (сокращенная версия). В начале 20-го века Бог дал Сенеке Соди славное переживание пребывания сорока дней на небесах. Эта книга изменит вашу жизнь и даст вам надежду, поможет вам отложить в сторону все проблемы и акцентировать внимание на славе Божьей. По мере его повествования о своем пережитом опыте Элвуду Скотту, вы будете чувствовать себя, как будто вы находитесь рядом с ним и наблюдаете много различных сцен из небесного царства, в...»

«ГЛАВА АДМИНИСТРАЦИИ ВОЛГОГРАДСКОЙ ОБЛАСТИ ПОСТАНОВЛЕНИЕ от 31 декабря 2009 г. N 1605 ОБ УТВЕРЖДЕНИИ ПОЛОЖЕНИЯ О ПРИРОДНОМ ПАРКЕ ДОНСКОЙ (в ред. постановления Главы Администрации Волгоградской обл. от 13.09.2010 N 1498) В соответствии с Федеральным законом от 14 марта 1995 г. N 33-ФЗ Об особо охраняемых природных территориях, Законами Волгоградской области от 7 декабря 2001 г. N 641-ОД Об особо охраняемых природных территориях Волгоградской области и от 13 июня 2001 г. N 549-ОД О создании...»

«ГОУ ВПО СибГМУ Росздрава Отчет по НИР за 2006-2010 гг. Отчет по НИР за 2006-2010 гг. Ученый совет 25 января 2011 гг. Ученый совет 25 января 2011. Л.М. Огородова Л.М. Огородова Основные разделы программы НИР • Развитие приоритетных научных направлений (27 комплексных тем) • Развитие исследовательской инфраструктуры • Внедрение инновационных элементов управления и инфраструктуры НИР Основные эффекты реализации ГОУ ВПО СибГМУ Росздрава программы • Увеличение объема НИОКР • Реализация крупных...»

«АНАЛИЗ СОВРЕМЕННОГО РУССКОГО ПЕРЕВОДА БИБЛИИ, ИЗДАННОГО РОССИЙСКИМ БИБЛЕЙСКИМ ОБЩЕСТВОМ В 2011 ГОДУ. Последнее обновление 13 ноября 2012 года. Найти обновленный файл можно по адресу: http://atheizm.com/download/srpb.pdf Автор обзора: Минаев Андрей (hetrulycomes.info). Материал нуждается в ваших рецензиях: the-genesis@narod.ru 1 АНАЛИЗ СОВРЕМЕННОГО РУССКОГО ПЕРЕВОДА БИБЛИИ, ИЗДАННОГО РОССИЙСКИМ БИБЛЕЙСКИМ ОБЩЕСТВОМ В 2011 ГОДУ. Данный анализ рассматривает только соответствие современного...»

«КУЗБАССКИЕ БИБЛИОТЕКИ НЕКОММЕРЧЕСКОЕ БИБЛИОТЕЧНОЕ ПАРТНЕРСТВО СЕКЦИЯ НАУЧНО-МЕТОДИЧЕСКОЙ РАБОТЫ КЕМЕРОВСКАЯ ОБЛАСТНАЯ НАУЧНАЯ БИБЛИОТЕКА им. В.Д ФЕДОРОВА БИБЛИОИЗДАНИЯ-2003: Ежегодный указатель издательской продукции библиотек партнерства Кузбасские библиотеки Вып. 4. КЕМЕРОВО, 2004 г. ББК Б 59 Составитель: Лаврушкина В.И., отв. секретарь НБП Кузбасские библиотеки, гл. библиотекарь отдела прогнозирования и развития библиотечного дела Кемеровской ОНБ им. В.Д. Федорова Компьютерная верстка и...»

«ЗАКОНОДАТЕЛЬСТВО РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН, РЕГУЛИРУЮЩЕЕ ОТНОШЕНИЯ В СФЕРЕ ПРИВАТИЗАЦИИ 1 30 августа 1995 года КОНСТИТУЦИЯ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН (с изменениями и дополнениями по состоянию на 02.02.2011 г.) Извлечение Статья 61 3. Парламент вправе издавать законы, которые регулируют важнейшие общественные отношения, устанавливают основополагающие принципы и нормы, касающиеся: 8) приватизации предприятий и их имущества. Опубликована: Казахстанская правда, 08.09.1995; Ведомости Парламента Республики...»

«Постановление главы администрации Старооскольского городского округа Белгородской обл. от 12.12.2011 N 5388 Об утверждении плана мероприятий по реализации долгосрочной целевой программы оздоровления молодого поколения в возрасте до 25 лет на 2011 - 2013 годы ГЛАВА АДМИНИСТРАЦИИ СТАРООСКОЛЬСКОГО ГОРОДСКОГО ОКРУГА БЕЛГОРОДСКОЙ ОБЛАСТИ ПОСТАНОВЛЕНИЕ от 12 декабря 2011 г. N 5388 ОБ УТВЕРЖДЕНИИ ПЛАНА МЕРОПРИЯТИЙ ПО РЕАЛИЗАЦИИ ДОЛГОСРОЧНОЙ ЦЕЛЕВОЙ ПРОГРАММЫ ОЗДОРОВЛЕНИЯ МОЛОДОГО ПОКОЛЕНИЯ В ВОЗРАСТЕ...»

«Герой Советского Союза Кот Алексей Николаевич Отечества крылатые сыны: Записки штурмана Проект Военная литература: militera.lib.ru Издание: Кот А. Н. Отечества крылатые сыны. — Днепропетровск: Проминь, 1989. Scan: AAW OCR, правка: Андрей Мятишкин (amyatishkin@mail.ru) [1] Так обозначены страницы. Номер страницы предшествует странице. {1}Так помечены ссылки на примечания. Примечания в конце текста Кот А. Н. Отечества крылатые сыны: Записки штурмана. — Днепропетровск: Проминь, 1989. — 295 с.; ил....»

«А.Д. Михилёв Концептуальный художественный синтез versus постмодернизм Поле современного украинского литературоведения густо засеяно западными теориями и методологиями, а небо над ним до самого горизонта безраздельно и безнадёжно постмодернистское. Пелена постмодернизма оказывает магическое воздействие не только на начинающих исследователей, но порой и на их наставников. Как иначе объяснить тот удивительных факт, что любой значительный писатель второй половины ХХ – начала ХХI века под пером...»

«ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА ПО ГИДРОМЕТЕОРОЛОГИИ И МОНИТОРИНГУ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ ГЛАВНАЯ ГЕОФИЗИЧЕСКАЯ ОБСЕРВАТОРИЯ ИМ.А.И.ВОЕЙКОВА ЕЖЕГОДНИК СОСТОЯНИЕ ЗАГРЯЗНЕНИЯ АТМОСФЕРЫ В ГОРОДАХ НА ТЕРРИТОРИИ РОССИИ ЗА 2006 г. 2008 УТВЕРЖДАЮ Заместитель Руководителя Росгидромета В.Н.Дядюченко __2007 г. По всем вопросам, касающимся информации о качестве воздуха в городах России, просим обращаться: 194021, Санкт-Петербург, ул. Карбышева, д.7. ГУ ГГО, Отдел мониторинга загрязнения атмосферы. Факс: (812)297-86-61....»

«Рекомендации по использованию обменного формата РУСМАРК для пополнения АСКБ НИУ Россельхозакадемии. Составители: Н. В. Ласточкина, В.А. Нохрина, О.Ф. Семенова Принятый в АСКБ формат данных для обмена: Российский коммуникативный формат представления библиографических записей. Библиотеки-участницы (БУ) Активного сводного каталога библиотек НИУ Россельхозакадемии (АСКБ), имеющие свой электронный каталог, могут предоставлять свои библиографические записи для загрузки в АСКБ. Если на документ,...»

«МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН КЫЗЫЛОРДИНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ ИМЕНИ КОРКЫТ АТА ПРАВИЛА проведения текущего контроля успеваемости, промежуточной и итоговой аттестации обучающихся в докторантуре Кызылординского государственного университета им. Коркыт Ата Кызылорда, 2013 год Правила проведения текущего контроля успеваемости, промежуточной и итоговой аттестации обучающихся в докторантуре Кызылординского государственного университета имени Коркыт Ата.- Кызылорда:...»

«Норбер Кастере Моя жизнь под землей (воспоминания спелеолога) Введение Моей матери, державшей меня за руку в моей первой пещере, когда мне было всего пять лет. Памяти моего отца, моего лучшего друга. Нежной памяти моей жены, которая следовала за мной и преданно мне помогала более чем в трехстах пещерах, пропастях и подземных реках. Книга эта написана по разным причинам, но, может быть, главным образом как ответ на вопросы, которые мне постоянно задают: В каком возрасте Вы начали интересоваться...»

«печатью ЬНОГО РАЗВИТИЯ т44 устАвА ФЕДЕРАJIЬНОГО ГОСУ Y Е,дЕ rr{J l Dп чl U l UU улАрGтвЕI{ ного юджЕтНого россиЙ.с.ЦIЦJдрдиологи ч'Еаiий iдучно_прЬrйзЪбдстввнный ЕНИЯ УЧ РE)кд Б комплЕкс. м и н и ст Е рствА зд рА_в оох рАн Е н ия и социдл Ьiч о го рАз в ития российской ФЕдЕрлции в новdй ЁвЪдiции (в ред. Приказов Минздрава России от 27.О9.2О N от 15.02.2013 N 77) в с соответствии о Положением Министерстве здравоохранения и социального развития Российской Федерации, лверх(4енным постановлением...»




 
© 2014 www.kniga.seluk.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Книги, пособия, учебники, издания, публикации»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.